范慶紅

（山東省萊州市畜牧獸醫(yī)站，山東萊州 261400）

大腸桿菌為條件致病菌，在誘因存在的情況下，容易引起繼發(fā)感染。羊大腸桿菌病在羊群中較為多發(fā)，是目前養(yǎng)羊業(yè)的常發(fā)疾病之一[1-3]。霉菌毒素是大腸桿菌感染的重要誘因之一，在養(yǎng)殖業(yè)中較為常見[4-6]，尤其是黃曲霉毒素。黃曲霉毒素會影響淋巴細胞活性，導致動物機體出現(xiàn)免疫抑制[7]，因而繼發(fā)其他疾病。

2018年6月18日，山東省萊州市某養(yǎng)羊場報告，該場全群羊表現(xiàn)精神不振、食欲減退、腹瀉等癥狀，個別母羊流產(chǎn)，部分發(fā)病羊羔死亡。為確診疫情，查找引發(fā)疫情的原因，萊州市畜牧獸醫(yī)站在接到報告后，組織人員到現(xiàn)場開展了本次暴發(fā)調(diào)查。

1 方法

1.1 病例定義

1.1.1 可疑病例 2018年6月以來，該羊場中出現(xiàn)眼精神不振、食欲減退、腹瀉、流產(chǎn)或死亡的羊只。

1.1.2 確診病例 采集可疑病例肝臟等組織，經(jīng)實驗室分離鑒定出大腸桿菌的羊只。

1.2 現(xiàn)場調(diào)查

與養(yǎng)殖場場主、飼養(yǎng)員進行座談交流，收集羊場基本信息、羊調(diào)入調(diào)出情況、疫病發(fā)生過程、周邊養(yǎng)羊場分布情況、飼料來源、人員進出管理情況、發(fā)病后采取的控制措施；查閱羊場的羊只歷史發(fā)病死亡記錄，現(xiàn)場查看羊群臨床癥狀以及青貯飼料和精飼料儲存情況；對死亡羔羊進行病理解剖，并采集肝臟組織樣品送實驗室檢測。

1.3 實驗室檢測

將采集的肝臟組織樣品進行大腸桿菌、梭菌和沙門氏菌等可疑致病菌的分離鑒定，并對分離菌株采用藥敏紙片擴散法[8]進行藥敏試驗。

1.4 數(shù)據(jù)分析

用Excel進行數(shù)據(jù)收集、整理和分析，繪制疫病流行曲線。

2 結果

2.1 羊場基本信息

該場建于2013年6月，位于一座小山上，離交通主干道和居民區(qū)較遠，周圍5 km范圍內(nèi)沒有其他養(yǎng)羊場。羊場建有2棟羊舍，相距8 m，每棟面積270 m2，棟舍內(nèi)劃分4欄。羊場入口處有消毒池，但是沒有消毒液，生活區(qū)和生產(chǎn)區(qū)沒有設置物理隔離，管理者和飼養(yǎng)員可隨意走動，外來車輛和人員可隨意進出。羊場場區(qū)布局見圖1。

該羊場為自繁自養(yǎng)場，存欄綿羊420只，其中成年羊約300只；羊群不分階段飼養(yǎng)，以青貯飼料飼喂為主。該羊場接種的疫苗包括口蹄疫、小反芻獸疫和羊“三聯(lián)四防”疫苗，前兩種為政府招標疫苗。

現(xiàn)場察看發(fā)現(xiàn)，青貯飼料池排水不暢，青貯飼料色澤發(fā)暗，可聞到一股輕微的臭味和霉味。

圖1 發(fā)病羊場場區(qū)布局示意圖

2.2 發(fā)病經(jīng)過

6月8日，部分羊只出現(xiàn)精神不振、采食量下降以及拉稀等情況，但并未引起場主關注；6月11日，出現(xiàn)首只羔羊死亡，隨后每天都有羔羊死亡；6月13日，出現(xiàn)1只母羊流產(chǎn)，隨后場主開始對所有拉稀羊只注射痢菌凈，但效果不明顯，每天仍有羔羊死亡，6月15日又有1只母羊發(fā)生流產(chǎn)；6月18日，進行現(xiàn)場調(diào)查；6月19日，根據(jù)藥敏試驗結果，選用環(huán)丙沙星進行干預治療，隨后疫情有所控制，羔羊死亡數(shù)量開始下降；6月23日后，電話回訪，再無死亡病例出現(xiàn)。整個疫病發(fā)生期間，從空間分布看，2棟羊舍普遍發(fā)病；從群間分布看，不分年齡和性別，整個羊群基本都出現(xiàn)臨床癥狀，襲擊率接近100%，共死亡羔羊21只，病死率為5.0%。根據(jù)羊場死亡羊只情況繪制的流行病學曲線見圖2。

2.3 臨床觀察及病理剖檢

全群羊精神不振、食欲下降、體溫升高、被毛粗亂、不愿活動，部分羊只可視黏膜黃染或蒼白，消瘦，腹瀉后體溫下降，糞便稀，呈半液狀，或有氣泡，或混有黏液和血液。

現(xiàn)場剖檢3只病死羊和1只病重羊，可見腸黏膜充血、水腫或出血，腸內(nèi)混有血液和氣泡，腸系膜淋巴結腫大，切面多汁、外翻；腹腔和心包積液，內(nèi)有纖維素樣滲出物；肝臟腫大，表面有壞死灶，肺臟腫大，局部有肉樣病變，表面有灰白色壞死灶。

圖2 發(fā)病羊場羔羊死亡流行病學曲線

2.4 實驗室檢測

無菌采集4只剖檢羊及后續(xù)4只死亡羊只的肝臟組織病料，送至萊州市動物疫病預防控制中心實驗室進行細菌分離鑒定，結果在8只羊的肝組織樣品中均分離出大腸桿菌（麥康凱培養(yǎng)基下出現(xiàn)紅色、圓形、扁平、隆起、表面光滑、邊緣整齊的大菌落，見圖3），均未分離到梭菌和沙門氏菌。

圖3 實驗室檢測結果

將這些分離到的大腸桿菌菌株用痢菌凈、恩諾沙星、強力霉素、氟苯尼考、慶大霉素、克林沙星、磺胺二甲基異嘧啶、頭孢替坦、環(huán)丙沙星、多西環(huán)素、呋喃唑酮等藥物進行藥敏試驗，發(fā)現(xiàn)這些菌株對痢菌凈、恩諾沙星、強力霉素、氟苯尼考、慶大霉素和磺胺二甲基異嘧啶均表現(xiàn)出一定的耐藥性，而對克林沙星、頭孢替坦、環(huán)丙沙星和呋喃唑酮較敏感。

3 病因分析

結合該場發(fā)病羊只發(fā)病的流行病學特征、臨床癥狀、病理剖檢變化及實驗室檢測結果，推斷引起該羊場羊群發(fā)病死亡的原因為大腸桿菌感染。大腸桿菌感染通常需要一些誘因，如極端天氣、羊群運輸、羊群擁擠、羊舍空氣污濁、飼料霉變、其他傳染病等。現(xiàn)場調(diào)查發(fā)現(xiàn)，該羊群為自繁自養(yǎng)，無調(diào)入和調(diào)出情況，羊設寬敞，無擁擠，空氣良好，但發(fā)現(xiàn)該羊場青貯飼料存在發(fā)霉情況；查閱當?shù)靥鞖赓Y料發(fā)現(xiàn)，5—6月萊州市無極端天氣出現(xiàn)，但5月份降雨9 d，6月份降雨4 d，雨水相對較多。綜上判斷，飼料霉變引起羊群霉菌毒素中毒是最可能的誘因。

4 干預措施

根據(jù)病因分析，建議該羊場立即停喂霉變青貯飼料，更換為優(yōu)質(zhì)飼料，對全場進行全面衛(wèi)生清理和消毒。根據(jù)藥敏試驗結果選用環(huán)丙沙星肌注，對出現(xiàn)腹瀉的羊只和帶仔母羊連用5 d，對新生羊灌服0.2～0.3 g胃蛋白酶；對于癥狀較重的羔羊靜脈注射環(huán)丙沙星、5%葡萄糖注射液和維生素C制劑。采取干預措施后每天回訪，6月22日全群基本恢復健康，6月23日后無死亡病例出現(xiàn)，表明干預措施效果較好，也驗證了病因假設。

5 討論

由于縣級動物疫病預防與控制中心實驗室比較簡陋，本次調(diào)查過程中雖然用鑒別培養(yǎng)基分離出大腸桿菌，通過藥敏試驗篩選出了敏感藥物，并取得了較好的干預效果，但并未對大腸桿菌進行血清型分型鑒定，導致調(diào)查結果缺乏嚴謹性；另外青貯飼料霉變只是根據(jù)現(xiàn)場觀察和嗅覺推斷的，未送樣到實驗室開展霉菌檢測，因此并不能完全確定該誘因。

另外，在調(diào)查過程中發(fā)現(xiàn)，該羊場在疫病防控中存在不少問題，比如，羊場主生物安全意識較差，外來人員可以隨意進出生產(chǎn)區(qū)，飼料質(zhì)量安全監(jiān)管不嚴，不注意科學用藥，忽視消毒工作，對病羊不實施隔離，等等。這些問題都會給羊場帶來發(fā)病風險，今后應予以改善。