云南省醫(yī)療器械檢驗(yàn)研究院 云南昆明 650000

在體外診斷試劑的使用當(dāng)中，試劑的穩(wěn)定性是非常重要的，也是試劑能夠投入使用的重要衡量標(biāo)準(zhǔn)。在醫(yī)學(xué)試劑穩(wěn)定性測試研究當(dāng)中，有關(guān)于體外診斷試劑的實(shí)驗(yàn)測試是比較少的，研究成果屈指可數(shù)。在進(jìn)行體外診斷試劑穩(wěn)定性測試時可以借鑒的資料也比較少，加強(qiáng)對體外診斷試劑穩(wěn)定性測試的研究，對提高體外診斷試劑穩(wěn)定性判別有重要的作用，因而需要對體外診斷試劑穩(wěn)定性測試的要點(diǎn)進(jìn)行重點(diǎn)分析。

1 一般資料

1.1 穩(wěn)定性測試試劑的選擇

根據(jù)體外診斷試劑的主要特點(diǎn)和穩(wěn)定性測試研究項(xiàng)目的要求，穩(wěn)定性測試試劑的選擇要保證穩(wěn)定性測試能夠有序的操作，穩(wěn)定性指標(biāo)的測量數(shù)據(jù)變化明顯。簡單的來說就是要根據(jù)穩(wěn)定性測試的內(nèi)容，來決定選用同一批次還是不同批次的體外診斷試劑。根據(jù)《新生物制品審評辦法》當(dāng)中的規(guī)定，設(shè)立三組成品穩(wěn)定性研究測試，（1）長期穩(wěn)定性研究，選用連續(xù)3個批次的體外診斷試劑。（2）使用期間穩(wěn)定性研究，采用同一批次產(chǎn)品。（3）模擬運(yùn)輸穩(wěn)定性研究，使用同一批次試劑[1]。

1.2 體外診斷試劑穩(wěn)定性測試的主要內(nèi)容

（1）度量指標(biāo)。度量指標(biāo)就是指通過對試劑的某一特性或含量值的測量，就可以直接得出試劑穩(wěn)定性效果，對度量指標(biāo)的測試是在試劑規(guī)定的使用期限內(nèi)進(jìn)行的。不同的試劑擁有的特性都是有差異的，因而只要掌握每種試劑的主要特征，就可以通過測量其中一項(xiàng)指標(biāo)明確試劑的穩(wěn)定性是否良好。對于體外診斷試劑，度量指標(biāo)是測量漂移。

（2）置信度。對醫(yī)學(xué)試劑的置信度進(jìn)行測量，可以對試劑在儲存或使用期間的變化進(jìn)行掌握，從而對試劑的穩(wěn)定性進(jìn)行判定。對于體外診斷試劑穩(wěn)定性測試，一般是選用95%以上的置信區(qū)間進(jìn)行測量，置信區(qū)間的百分比選擇要根據(jù)測試的具體情況而設(shè)定，95%是最低百分比值，先要提高測量的精準(zhǔn)度，可以適量提高測量置信區(qū)間的百分比，如97%或99%都可以[2]。

（3）可接受標(biāo)準(zhǔn)?？山邮軜?biāo)準(zhǔn)是借鑒與測試試劑有相同之處的試劑穩(wěn)定性測試的數(shù)據(jù)，還有測量試劑所標(biāo)注的一些信息。通過對這些信息的分析，可以對試劑的基本性能有大概的了解，在結(jié)合其它的測試數(shù)據(jù)，綜合分析就可以得出試劑穩(wěn)定性測試的結(jié)果。

（4）穩(wěn)定性研究的種類。

第一種是保存期穩(wěn)定性的研究，是對體外診斷試劑在儲存階段的一些表征進(jìn)行測量，體外診斷試劑的儲存是有相應(yīng)的規(guī)定的，在這種特定的保存條件下，通過穩(wěn)定性的測試可以明確測量試劑能夠保存的最長期限。

第二種是使用期穩(wěn)定性研究，就是對體外診斷試劑已經(jīng)投入使用后，試劑活性能夠保持期限的研究，在進(jìn)行使用期穩(wěn)定性研究時，可以對同一生產(chǎn)批次，同一型號的試劑進(jìn)行統(tǒng)一的測試，它們的使用期穩(wěn)定性都是相對保持一致的。

第三種是運(yùn)輸模擬研究，體外診斷試劑在進(jìn)行運(yùn)輸?shù)倪^程中會受到運(yùn)輸方式和運(yùn)輸環(huán)境等因素的影響，這些因素影響的作用下，就有可能會引起試劑的變化，因而運(yùn)輸模擬研究方式就是對體外診斷試劑的常用的運(yùn)輸形式進(jìn)行模擬[3]。對運(yùn)輸過程中試劑產(chǎn)生的變化進(jìn)行觀察和分析，根據(jù)研究結(jié)果可以對體外診斷試劑的運(yùn)輸方式進(jìn)行優(yōu)化。

2 方法

2.1 體外診斷試劑穩(wěn)定性測試研究設(shè)計(jì)

本文采用的是穩(wěn)定性測試研究的經(jīng)典設(shè)計(jì)類型，并且使用度量指標(biāo)：測量漂移作為穩(wěn)定性性能測試指標(biāo)。首先，要將要測試的體外診斷試劑樣品先放在特定的測試保存環(huán)境當(dāng)中，然后在依次進(jìn)行各組的實(shí)驗(yàn)，得到穩(wěn)定性測試的結(jié)果。經(jīng)典設(shè)計(jì)可以在穩(wěn)定性測試期間的任意時間節(jié)點(diǎn)，將待測的體外診斷試劑拿出，進(jìn)行測試時都可以得到準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)結(jié)果，在待測期間體外診斷試劑不會受到外界因素的影響，但是在進(jìn)行測試實(shí)驗(yàn)的過程中容易受到一些因素的影響，包括儀器、環(huán)境等。

在設(shè)計(jì)階段要將穩(wěn)定性測試需要的三組產(chǎn)品按照批次進(jìn)行分類保存，要求每一批次的體外診斷試劑都要多準(zhǔn)備10%-20%的量，作為實(shí)驗(yàn)測試的備用[4]。然后對測試設(shè)備進(jìn)行準(zhǔn)備，檢查各個設(shè)備操作、運(yùn)行狀態(tài)是否正常，保證測量精準(zhǔn)度。同時實(shí)驗(yàn)操作者要研讀體外診斷試劑指導(dǎo)原則，保證穩(wěn)定性測試操作的規(guī)范性。最后，根據(jù)實(shí)驗(yàn)的情況，提前將數(shù)據(jù)收集方法確定，并做好對失控?cái)?shù)據(jù)處理的準(zhǔn)備。

2.2 體外診斷試劑穩(wěn)定性測試操作

首先，將三組穩(wěn)定性測試項(xiàng)目進(jìn)行分別儲存，在一天中從三組實(shí)驗(yàn)產(chǎn)品當(dāng)中，隨機(jī)挑選幾個產(chǎn)品，對每組實(shí)驗(yàn)樣品當(dāng)中的被測量漂移進(jìn)行測量，將測量數(shù)據(jù)進(jìn)行記錄，根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)每隔一段時間進(jìn)行重復(fù)測量，并將數(shù)據(jù)進(jìn)行記錄。其次，每天都要采取隨機(jī)的形式更換產(chǎn)品測試，再進(jìn)行被測量漂移的數(shù)據(jù)測量和記錄。

最后，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后將實(shí)驗(yàn)期間每天的數(shù)據(jù)測量結(jié)果進(jìn)行對比，要求將三組進(jìn)行分別的對比，將每組的測試數(shù)據(jù)進(jìn)行整理，將對比或存在異常的數(shù)據(jù)進(jìn)行標(biāo)注。另外，經(jīng)典設(shè)計(jì)方式在測量期間產(chǎn)品測量值可能會受到外界因素的影響，在試驗(yàn)期間對影響因素進(jìn)行控制，如果產(chǎn)品受到影響要明確其影響原因，然后針對其原因進(jìn)行調(diào)整，重新選擇產(chǎn)品進(jìn)行測量，作為當(dāng)天的被測量漂移變化數(shù)據(jù)。

3 評價指標(biāo)

3.1 數(shù)據(jù)分析

繪制一個以觀察的分析物平均值（Y軸）對時間（X軸）的線性回歸方程。大多數(shù)產(chǎn)品在他們的保存期只有輕微的降解（≤10），因此經(jīng)常采用線性模型，如果圖形接近非線性，考慮使用轉(zhuǎn)換公式或非線性模型[5]。

3.2 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

如果回歸圖的斜率在統(tǒng)計(jì)學(xué)上無顯著性（P≥0.05），樣本的穩(wěn)定區(qū)間測試時間點(diǎn)的最大值。如果回歸圖的斜率在統(tǒng)計(jì)學(xué)上有顯著性（P＜0.05），通過測量樣本被測量漂移得出的穩(wěn)定區(qū)間可認(rèn)為是可接受標(biāo)準(zhǔn)和線性回歸一側(cè)與置信區(qū)間相交的區(qū)間，這可以由統(tǒng)計(jì)軟件生成置信區(qū)間的線性回歸圖確定。第二種方法是，置信區(qū)間值以由研究期間內(nèi)的相應(yīng)的時間點(diǎn)的值估計(jì)出的值計(jì)算出，然后繪圖，得出與可接受標(biāo)準(zhǔn)相交的區(qū)間。

4 結(jié)果

針對第一組長期穩(wěn)定性研究，選用連續(xù)3個批次的體外診斷試劑，穩(wěn)定性測試研究時間為400天，本實(shí)驗(yàn)每日重復(fù)觀測數(shù)據(jù)的次數(shù)為5次，對每天提取的不同產(chǎn)品的數(shù)據(jù)，利用統(tǒng)計(jì)學(xué)方式進(jìn)行計(jì)算，所有樣本以分析結(jié)果平均值(Y軸)對測試日期(X軸)做標(biāo)準(zhǔn)線性回歸分析，觀察t統(tǒng)計(jì)的斜率可以看出，測試產(chǎn)品在特定環(huán)境當(dāng)中儲存階段，相對穩(wěn)定的區(qū)間保持的時間為400天，因而實(shí)驗(yàn)選擇該批次試劑的長期儲存保質(zhì)期在400天之內(nèi)[6]。

針對第二組使用期間穩(wěn)定性研究，采用同一批次產(chǎn)品穩(wěn)定性研究的時間為400天，將同一批次的產(chǎn)品進(jìn)行使用，對使用期間的產(chǎn)品變化數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，由回歸擬合的統(tǒng)計(jì)量確定（斜率，Y截距）為：（允許漂移上限-Y截距）/斜率=穩(wěn)定性估計(jì)值[7]將數(shù)據(jù)套用在上述公式當(dāng)中，得到的數(shù)據(jù)結(jié)果為450天，第二組研究的目的是確定體外診斷試劑在投入使用時的穩(wěn)定性區(qū)間，在計(jì)算的過程中，沒有對置信區(qū)間進(jìn)行計(jì)算。

針對第三組模擬運(yùn)輸穩(wěn)定性研究，使用同一批次試劑，使模擬不同運(yùn)輸方式來觀察產(chǎn)品穩(wěn)定性變化，對各種運(yùn)輸方式情況進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)影響產(chǎn)品穩(wěn)定性的因素主要有溫度、濕度、光照強(qiáng)度和震動強(qiáng)度等，在進(jìn)行運(yùn)輸時將這些影響因素進(jìn)行控制，可以延長體外診斷試劑的穩(wěn)定性。

5 討論

體外診斷試劑的穩(wěn)定性性能與體外診斷試劑的質(zhì)量是成正比的，穩(wěn)定性越高，質(zhì)量越好，在進(jìn)行醫(yī)療使用時，才能得出更加準(zhǔn)確的診斷結(jié)果。體外診斷試劑穩(wěn)定性的變化就會導(dǎo)致體外診斷試劑的質(zhì)量變化，例如血型反定型用紅細(xì)胞，由于穩(wěn)定性不僅影響紅細(xì)胞表面抗原的抗原性，而且可能影響其抗原表型[8]。

對體外診斷試劑的儲存階段、使用階段、運(yùn)輸階段進(jìn)行科學(xué)的穩(wěn)定性測試，可以及時掌握體外診斷試劑的穩(wěn)定性能和影響因素，提前做好應(yīng)對措施，保證體外診斷試劑使用的效果和質(zhì)量。但是，目前有關(guān)于體外診斷試劑穩(wěn)定性測試的研究，不光是可參考的資料比較少，在進(jìn)行試驗(yàn)的過程中也是存在很多問題的，包括研究內(nèi)容的不完整、研究項(xiàng)目和指標(biāo)設(shè)置不符合研究需要、研究的時間過短、研究結(jié)果表述不清晰等。

通過本文對體外診斷試劑的穩(wěn)定性測試的論述，可以發(fā)現(xiàn)如果按照相關(guān)的規(guī)范進(jìn)行產(chǎn)品的儲存，產(chǎn)品的穩(wěn)定性是比較好的，在產(chǎn)品使用期間如果使用置信區(qū)間，就可以得到更加保守的穩(wěn)定性評估區(qū)間。而針對體外診斷試劑的運(yùn)輸穩(wěn)定性來說，只要合理的控制影響穩(wěn)定性的因素，就能避免運(yùn)輸期間產(chǎn)品穩(wěn)定性下降。