郭 珍（浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院，浙江杭州310009）

血培養(yǎng)是臨床上檢測(cè)患者血液或胸腔積液等體液中有無(wú)細(xì)菌感染的一種微生物檢測(cè)方法。早診斷并盡早采取有效的治療是降低敗血、菌血癥等感染引起的病死率的重要手段[1]。本院采用BacT/ALERT 3D全自動(dòng)血培養(yǎng)儀進(jìn)行標(biāo)本檢測(cè)，并對(duì)分出的病原菌進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。本文回顧性分析2017年4月至2018年3月本院細(xì)菌檢測(cè)陽(yáng)性結(jié)果的情況，并對(duì)分離出的病原菌進(jìn)行菌群分布和耐藥情況分析，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

1.1.1 標(biāo)本來(lái)源 選取本院2017年4月至2018年3月門診和住院478例患者的血液陽(yáng)性培養(yǎng)標(biāo)本。包括大腸桿菌ATCC35218、大腸桿菌ATCC25922、銅綠假單胞菌ATCC27853、肺炎克雷伯菌ATCC700603、金黃色葡萄球菌ATCC29213和糞腸球菌ATCC29212。所有標(biāo)準(zhǔn)菌株均購(gòu)自國(guó)家衛(wèi)生健康委員會(huì)臨床檢驗(yàn)中心。

1.1.2 試劑與儀器 BacT/ALERT 3D全自動(dòng)血培養(yǎng)儀（購(gòu)自法國(guó)梅里埃公司）及培養(yǎng)需氧培養(yǎng)瓶（BPA）和厭氧培養(yǎng)瓶（BPN）、20 mL規(guī)格注射器，血平板和麥康凱平板，細(xì)菌培養(yǎng)箱（購(gòu)自日本三洋公司），VITEK-2 Compact全自動(dòng)細(xì)菌鑒定及藥敏分析系統(tǒng)（購(gòu)自法國(guó)梅里埃公司）。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)菌培養(yǎng) 患者皮膚消毒后采用無(wú)菌注射器采集12 mL左右血液，立即注入培養(yǎng)瓶中，BPA、BPN培養(yǎng)瓶各注入5～6 mL。培養(yǎng)瓶立即送往檢驗(yàn)科，在30 min內(nèi)放入BacT/ALERT 3D全自動(dòng)血培養(yǎng)儀中在（36±1）℃條件下培養(yǎng)至出現(xiàn)陽(yáng)性報(bào)警信號(hào)或未出現(xiàn)報(bào)警信號(hào)時(shí)培養(yǎng)至第7天。

1.2.2 細(xì)菌鑒定及藥敏分析 出現(xiàn)陽(yáng)性報(bào)警的標(biāo)本培養(yǎng)瓶采用無(wú)菌方法取出少量培養(yǎng)物轉(zhuǎn)種到血平板和麥康凱平板。放入35℃細(xì)菌培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24～48 h。分離單個(gè)菌落采用VITEK-2 Compact細(xì)菌鑒定和藥敏分析系統(tǒng)進(jìn)行菌株鑒定和藥敏分析。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用Excel2010軟件對(duì)菌群分布和耐藥性數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié) 果

2.1 陽(yáng)性標(biāo)本菌群分布結(jié)果 在478例陽(yáng)性標(biāo)本分離出的菌株中，腸道桿菌325例（68.0%），其后依次為葡萄球菌111例（23.3%）、非發(fā)酵菌13例（2.7%）、鏈球菌10例（2.0%）。腸道桿菌中最多的是大腸桿菌167例（34.9%）；葡萄球菌中最多的是表皮葡萄球菌39例（8.2%）。見表1。

2.2 主要病原菌對(duì)常見抗菌藥物耐藥性分析

2.2.1 腸道桿菌對(duì)常見抗菌藥物的耐藥情況 大腸桿菌對(duì)氨芐西林耐藥率為85.0%，對(duì)環(huán)丙沙星、頭孢曲松、復(fù)方磺胺甲噁唑和左氧氟沙星的耐藥率分別為55.1%、53.9%、52.7%和52.1%，對(duì)含酶抑制劑類和碳青霉烯類藥物較為敏感。肺炎克雷伯菌對(duì)氨芐西林耐藥率為87.5%，對(duì)頭孢曲松和復(fù)方磺胺甲噁唑耐藥率分別為37.5%、32.5%。結(jié)果顯示，第三、四代頭孢菌素，磺胺類及氟喹諾酮類抗菌藥物對(duì)肺炎克雷伯菌均有較好的抗菌活性。見表2。

表1 478例陽(yáng)性標(biāo)本菌群分布結(jié)果

表2 腸道桿菌對(duì)常見抗菌藥的耐藥情況

2.2.2 葡萄球菌對(duì)常見抗菌藥物的耐藥情況 耐藥情況結(jié)果見表3。

表3 葡萄球菌對(duì)常見抗菌藥耐藥情況

3 討 論

使用全自動(dòng)血培養(yǎng)儀檢測(cè)患者標(biāo)本可以縮短診斷時(shí)間、提高診斷效率[2]。全自動(dòng)血培養(yǎng)儀在使用過(guò)程中也會(huì)受到各種因素的干擾，影響其檢測(cè)性能[3]。需要對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行綜合分析，進(jìn)一步了解本檢測(cè)項(xiàng)目的性能。

本研究對(duì)陽(yáng)性標(biāo)本菌群分析結(jié)果顯示，腸道桿菌是血液感染的主要病原菌，其中以大腸桿菌為主。其后依次為葡萄球菌、非發(fā)酵菌和鏈球菌，這一結(jié)果與其他研究報(bào)道基本一致[4-5]。這一結(jié)果表明，臨床上引起菌血癥和敗血癥的病原菌主要為腸桿菌科和葡萄球菌屬細(xì)菌，為臨床治療提供有力的依據(jù)。

本研究通過(guò)對(duì)分離出的細(xì)菌耐藥性分析發(fā)現(xiàn)，大腸桿菌對(duì)氨芐西林、環(huán)丙沙星、頭孢曲松、復(fù)方磺胺甲噁唑和左氧氟沙星的耐藥率均在50.0%以上，對(duì)慶大霉素耐藥率為46.7%，而對(duì)含酶抑制劑類和碳青霉烯類藥物的耐藥率較低。肺炎克雷伯菌對(duì)第三、四代頭孢菌素，青霉素類酶抑制劑，磺胺類及氟喹諾酮類抗菌藥物均具有較低的耐藥性，其耐藥率都在25.0%以下。本研究中對(duì)碳青霉烯類耐藥的腸桿菌科細(xì)菌較其他報(bào)道少[6]，可能與本院嚴(yán)格控制臨床碳青霉烯類抗菌藥物的使用有關(guān)。腸桿菌科細(xì)菌耐碳青霉烯類藥物的主要機(jī)制是產(chǎn)生碳青霉烯酶及細(xì)菌外膜機(jī)制等[7]，臨床合理選擇抗菌藥物，對(duì)降低分離病原菌耐藥率起關(guān)鍵性作用。

血培養(yǎng)中的葡萄球菌以表皮葡萄球菌和金黃色葡萄球菌為主。表皮葡萄球菌是血流感染中檢出率最高的一種革蘭陽(yáng)性菌[8]，也是報(bào)道導(dǎo)致血培養(yǎng)假陽(yáng)性結(jié)果最常見的一種污染菌[9]，同時(shí)報(bào)道也指出凝固酶陰性葡萄球菌在血流感染的病原菌中檢出率逐漸增高[10]。這種變化趨勢(shì)的主要原因是在手術(shù)、創(chuàng)傷的處置、留置靜脈導(dǎo)管時(shí)[11-12]，以及對(duì)于人工心臟瓣膜或其他裝置植入時(shí)無(wú)菌操作不夠嚴(yán)格[13]，都可能導(dǎo)致凝固酶陰性葡萄球菌感染。本研究結(jié)果顯示，分離出的金黃色葡萄球菌對(duì)氟喹諾酮類藥物、利福平、磺胺類藥物及慶大霉素具有較低的耐藥性。

綜上所述，本院血培養(yǎng)陽(yáng)性標(biāo)本中分離出的病原菌以腸道桿菌為主，大腸桿菌的分離率最高，對(duì)氨芐西林、環(huán)丙沙星、頭孢曲松、復(fù)方磺胺甲噁唑和左氧氟沙星耐藥率較高，對(duì)含酶抑制劑類和碳青霉烯類藥物較為敏感。對(duì)培養(yǎng)主要病原菌分布及其耐藥性進(jìn)行監(jiān)控分析，有利于為血流感染的臨床診斷和治療及合理用藥提供依據(jù)。