趙亭亭 陳 超 邵彥翔 張清雯 劉 玲

(1.中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所，青島266071；2.上海海洋大學(xué)水產(chǎn)與生命學(xué)院，上海201306)

維生素C(vitamin C)也被稱(chēng)為抗壞血酸，是具水溶性的有機(jī)營(yíng)養(yǎng)分子。在自然界中，大部分維生素C以還原形式存在，這種還原形式的抗壞血酸在動(dòng)物體內(nèi)具有促進(jìn)鐵元素吸收、增強(qiáng)機(jī)體免疫力的作用，另外它還是脯氨酸羥化酶和賴(lài)氨酸羥化酶的輔酶，因此是魚(yú)類(lèi)和哺乳動(dòng)物合成組織膠原蛋白不可缺少的物質(zhì)。已有報(bào)道表明，維生素C不僅能夠加快魚(yú)體的生長(zhǎng)發(fā)育，還可以調(diào)節(jié)經(jīng)濟(jì)魚(yú)類(lèi)由于溫度和光照變化、運(yùn)輸以及疾病等產(chǎn)生的應(yīng)激狀態(tài)，提高機(jī)體抗病力和免疫性[1-2]。但是，除少數(shù)軟骨魚(yú)類(lèi)具有合成維生素C的能力外，硬骨魚(yú)類(lèi)由于缺乏合成抗壞血酸的酶導(dǎo)致無(wú)法自給自足而必須從食物中攝取[3-4]，因此飼料中維生素C的作用尤為重要。魚(yú)類(lèi)維生素C需求量受多種因素影響，如魚(yú)的種類(lèi)、魚(yú)的規(guī)格、生存環(huán)境、應(yīng)激狀態(tài)以及維生素C劑型的不同等。魚(yú)體若缺乏維生素C則會(huì)出現(xiàn)一系列的癥狀，如厭食、游泳緩慢、影響正常生長(zhǎng)發(fā)育、脊柱彎曲、內(nèi)臟出血、魚(yú)鰭潰爛與死亡率升高等病癥，影響生產(chǎn)效率，降低經(jīng)濟(jì)效益。

條紋鋸鮨(Centropristisstriata)俗稱(chēng)美洲黑石斑，常簡(jiǎn)稱(chēng)為黑石斑，屬?gòu)V溫、廣鹽性魚(yú)類(lèi)，因其體色艷麗、體態(tài)優(yōu)美、生長(zhǎng)速度快、適應(yīng)性與抗病力強(qiáng)、成活率高、營(yíng)養(yǎng)豐富、加工方便等諸多優(yōu)點(diǎn)，深得美國(guó)和加拿大廣大消費(fèi)者的喜愛(ài)，市場(chǎng)供不應(yīng)求。我國(guó)山東省于2002年引入條紋鋸鮨[5]，于2006年馴化及人工繁育成功[6]。近年來(lái)，條紋鋸鮨育苗與人工養(yǎng)殖技術(shù)的逐漸成熟，為其養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的興起與壯大奠定了基礎(chǔ)。但對(duì)條紋鋸鮨配合飼料的研究，國(guó)內(nèi)僅見(jiàn)林星[7]、邱金海[8]對(duì)其飼料蛋白質(zhì)水平和能蛋比的報(bào)道。國(guó)外Anderson等[9]報(bào)道了用棉籽粉蛋白成功替代魚(yú)粉蛋白以降低養(yǎng)殖成本；Alam等[10-11]研究了條紋鋸鮨幼魚(yú)生長(zhǎng)性能最佳時(shí)適宜的飼料蛋白質(zhì)水平以及飼料中添加不同水平的海鹽對(duì)其生長(zhǎng)和存活的影響。至今未見(jiàn)有關(guān)條紋鋸鮨幼魚(yú)對(duì)維生素C需要量的研究報(bào)道。因此，本試驗(yàn)通過(guò)在飼料中添加不同水平的維生素C，研究維生素C對(duì)條紋鋸鮨幼魚(yú)生長(zhǎng)、免疫、組織維生素C積累量及肌肉成分的影響，為條紋鋸鮨配合飼料中適宜維生素C的添加提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)飼料制備

試驗(yàn)飼料以魚(yú)粉、酪蛋白、豆粕為蛋白質(zhì)源，以魚(yú)油和豆油為脂肪源，配制7種等氮等能飼料，每組飼料中維生素C添加量分別為0(對(duì)照組)、50、150、300、600、1 200和2 400 mg/kg(維生素C純量，非維生素磷酸酯量)，維生素C的添加形式為維生素C單磷酸酯(有效含量為35%)。試驗(yàn)飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。微量成分按照逐級(jí)擴(kuò)大法混均，豆粕、膽堿等經(jīng)粉碎后過(guò)80目篩，各組分按配比稱(chēng)量后混和，所有組分混和后置于攪拌機(jī)中充分混勻，后經(jīng)制粒機(jī)制成粒徑為5 mm的圓形顆粒。置烘干機(jī)50 ℃下烘干后于-20 ℃下冷藏備用。制成飼料送青島科普研發(fā)技術(shù)中心有限公司利用高效液相色譜法檢測(cè)各組飼料的維生素C含量，實(shí)測(cè)值分別為10.97(對(duì)照組)、74.03、148.33、213.64、335.33、618.88和910.98 mg/kg。

表1 試驗(yàn)飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平(干物質(zhì)基礎(chǔ))

續(xù)表1項(xiàng)目Items飼料維生素C含量 Dietary vitamin C content/(mg/kg)10.9774.03148.33213.64335.33618.88910.98磷酸二氫鈣 Ca(H2PO4)22.000 02.000 02.000 02.000 02.000 02.000 02.000 0羧甲基纖維素 CMCC5.000 05.000 05.000 05.000 05.000 05.000 05.000 0氯化膽堿 Choline chloride1.000 01.000 01.000 01.000 01.000 01.000 01.000 0維生素預(yù)混料(不含維生素C) Vitamin premix (without vitamin C)1)1.000 01.000 01.000 01.000 01.000 01.000 01.000 0礦物質(zhì)預(yù)混料 Mineral premix2)1.000 01.000 01.000 01.000 01.000 01.000 01.000 0維生素C磷酸酯 Vitamin C phosphate0.014 30.042 90.085 70.171 40.342 90.685 7合計(jì) Total100.000 0100.000 0100.000 0100.000 0100.000 0100.000 0100.000 0營(yíng)養(yǎng)水平 Nutrient levels粗蛋白質(zhì) Crude protein44.744.244.944.844.944.844.8粗脂肪 Crude lipid6.16.16.36.15.95.96.1維生素C Vitamin C10.9774.03148.33213.64335.33618.88910.98

1)維生素預(yù)混料(不含維生素C)為每千克飼料提供 Vitamin premix (without vitamin C) provided the following per kg of diets：VB175 mg，VB2200 mg，葉酸 folic acid 20 mg，VB650 mg，煙酸 niacin 500 mg，泛酸鈣calcium pantothenate 300 mg，肌醇 inositol 1 000 mg，生物素 biotin 6 mg，VE 500 mg，VK 60 mg，VB121 mg，維生素A乙酸酯 vitamin A acetate 15 mg，VD 0.05 mg。

2)礦物質(zhì)混合物為每千克飼料提供 Mineral premix provided the following per kg of diets：FeSO4·H2O 8 g，CuSO4·5H2O 1 g，MnSO4·H2O 2 g，ZnSO4·7H2O 30 g，MgSO4·7H2O 150 g，CaI20.5 g，Na2SeSO40.04 g，COSO4·7H2O 0.1 g，KCl 70 g，沸石粉 zeolite powder 738.36 g。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)及養(yǎng)殖管理

試驗(yàn)在日照某養(yǎng)殖場(chǎng)進(jìn)行。正式試驗(yàn)開(kāi)始前，試驗(yàn)魚(yú)暫養(yǎng)于500 L圓形PE養(yǎng)殖桶內(nèi)，飽食投喂基礎(chǔ)飼料2周，使之適應(yīng)試驗(yàn)環(huán)境與飼料。暫養(yǎng)結(jié)束后，魚(yú)體饑餓24 h，選取規(guī)格一致、體質(zhì)健壯、平均體重為(88.34±24.10) g的條紋鋸鮨幼魚(yú)630尾，隨機(jī)分為7組，每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)30尾魚(yú)。試驗(yàn)魚(yú)為同一養(yǎng)殖環(huán)境中養(yǎng)殖的同一批健康的1齡條紋鋸鮨幼魚(yú)，隨機(jī)分配至21個(gè)500 L圓形PE養(yǎng)殖桶內(nèi)，組間初始平均體重?zé)o顯著差異(P>0.05)。養(yǎng)殖期間分別對(duì)應(yīng)投喂7組試驗(yàn)飼料，每天飽食投喂2次(07:00和17:00)，記錄投飼量，投喂半小時(shí)后，吸除殘餌與糞便，統(tǒng)計(jì)記錄殘餌數(shù)，正式養(yǎng)殖試驗(yàn)進(jìn)行8周。

試驗(yàn)采用溢流水養(yǎng)殖方式，養(yǎng)殖期間定期測(cè)試水溫(18～24 ℃)、pH(6.8～7.3)、溶解氧濃度(6.24～7.08 mg/L)、鹽度(22～24)和氨氮濃度(0.45～0.63 mg/L)等水質(zhì)指標(biāo)，檢查試驗(yàn)魚(yú)生長(zhǎng)情況并觀(guān)察是否有魚(yú)出現(xiàn)缺乏維生素C的癥狀。

1.3 樣品采集

試驗(yàn)結(jié)束后，魚(yú)體饑餓24 h，對(duì)各桶中的試驗(yàn)魚(yú)進(jìn)行計(jì)數(shù)并測(cè)量體重體長(zhǎng)，用于計(jì)算增重率(weight gain rate，WGR)、特定生長(zhǎng)率(special growth rate，SGR)、肥滿(mǎn)度(condition factor，CF)和成活率(survival rate，SR)；統(tǒng)計(jì)每組投喂的飼料質(zhì)量，用于計(jì)算飼料系數(shù)(feed conversion ratio，F(xiàn)CR)和飼料的蛋白質(zhì)效率(protein efficiency ratio，PER)。

從每個(gè)養(yǎng)殖桶中隨機(jī)抽取5尾魚(yú)，用MS-222將魚(yú)體麻醉后，于尾部靜脈采血，4 ℃過(guò)夜，3 500 r/min離心10 min，取上清，用于檢測(cè)血清生化指標(biāo)、相關(guān)酶活性、抗氧化指標(biāo)及維生素C積累量；然后在冰盤(pán)上進(jìn)行解剖，依次分離出內(nèi)臟和肝臟，分別稱(chēng)重，記錄數(shù)據(jù)，計(jì)算臟體比(viscerosomatic index，VSI)和肝體比(heaptosomatic index，HSI)；后取少量肝組織，用于檢測(cè)肝臟的抗氧化指標(biāo)和維生素C積累量；取少量背部肌肉，置于凍存管內(nèi)，用于肌肉抗氧化指標(biāo)和維生素C積累量的檢測(cè)，將剩余背部肌肉置于-20 ℃冰柜中備用，用于肌肉成分的測(cè)定。

1.4 指標(biāo)測(cè)定

1.4.1 生長(zhǎng)性能、形體指標(biāo)與飼料利用相關(guān)公式

增重率(%)=100×[(平均末重-
平均初重)/平均初重]；
特定生長(zhǎng)率(%/d)=100×(ln平均末重-
ln平均初重)/試驗(yàn)天數(shù)；
成活率(%)=100×終末魚(yú)尾數(shù)/初始魚(yú)尾數(shù)；
肝體比(%)=100×肝臟重/體重；
臟體比(%)=100×內(nèi)臟重/體重；
肥滿(mǎn)度(g/cm3)=體重/體長(zhǎng)3；
飼料系數(shù)=總干物質(zhì)攝食量/魚(yú)體總增重；
蛋白質(zhì)效率=(平均末重-平均初重)/
總飼料蛋白質(zhì)攝入量。

1.4.2 血清生化及組織抗氧化指標(biāo)

血清總蛋白含量和堿性磷酸酶活性的測(cè)定均采用微量酶標(biāo)法，甘油三酯和膽固醇含量的測(cè)定分別采用甘油三酯檢測(cè)試劑盒(GPO-PAP法)和總膽固醇檢測(cè)試劑盒(COD-PAP法)，利用比濁法測(cè)定血清溶菌酶的活性。血清、肝臟與肌肉組織中的超氧化物歧化酶(SOD)活性的測(cè)定采用羥胺法，可見(jiàn)光法測(cè)定過(guò)氧化氫酶(CAT)活性，總抗氧化能力(T-AOC)和維生素C積累量均通過(guò)比色法進(jìn)行測(cè)定，微板法測(cè)定谷草轉(zhuǎn)氨酶(GPT)及谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GOT)活性和丙二醛(MDA)含量。以上所用試劑盒均購(gòu)于南京建成生物工程研究所，試驗(yàn)步驟嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)操作。

1.4.3 肌肉成分的測(cè)定

肌肉送青島科普研發(fā)技術(shù)中心有限公司進(jìn)行檢測(cè)。肌肉的粗蛋白質(zhì)、粗脂肪、水分、粗灰分含量分別采用凱氏定氮法、索氏抽提法、直接干燥法與馬弗爐550 ℃高溫灼燒法進(jìn)行測(cè)定，膠原蛋白含量采用羥脯氨酸法[12]進(jìn)行測(cè)定。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

采用SPSS 17.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析(one-way ANOVA)，并用Duncan氏多重比較法分析各組間的差異性，P<0.05時(shí)為差異顯著。試驗(yàn)數(shù)據(jù)以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)”表示。圖表處理及回歸方程計(jì)算用Excel 2007進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。

2 結(jié)果與分析

2.1 飼料維生素C含量對(duì)條紋鋸鮨幼魚(yú)生長(zhǎng)性能、形體指標(biāo)和飼料利用的影響

由表2可知，74.03 mg/kg組條紋鋸鮨幼魚(yú)的增重率和特定生長(zhǎng)率顯著高于10.97、618.88和910.98 mg/kg組(P<0.05)，與其他各組間無(wú)顯著差異(P>0.05)。當(dāng)飼料維生素C含量從74.03 mg/kg增加到910.98 mg/kg時(shí)，條紋鋸鮨幼魚(yú)的增重率和特定生長(zhǎng)率均開(kāi)始呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，飼料中維生素C添加量達(dá)到910.98 mg/kg時(shí)，開(kāi)始抑制其生長(zhǎng)。飼料維生素C含量對(duì)條紋鋸鮨幼魚(yú)的存活率無(wú)顯著影響(P>0.05)。

74.03 mg/kg組條紋鋸鮨幼魚(yú)的飼料系數(shù)顯著低于10.97和910.98 mg/kg組(P<0.05)，618.88 mg/kg組的飼料系數(shù)顯著低于910.98 mg/kg組(P<0.05)，剩余各組間的飼料系數(shù)差異不顯著(P>0.05)。10.97和910.98 mg/kg組條紋鋸鮨幼魚(yú)的蛋白質(zhì)效率顯著低于74.03和618.88 mg/kg組(P<0.05)。335.33 mg/kg組條紋鋸鮨幼魚(yú)的肥滿(mǎn)度顯著低于74.03、148.33和213.64 mg/kg組(P<0.05)，且與10.97、618.88和910.98 mg/kg組差異不顯著(P>0.05)。飼料維生素C含量對(duì)魚(yú)體的肝體比無(wú)顯著影響(P>0.05)。74.03 mg/kg組條紋鋸鮨幼魚(yú)的臟體比顯著高于910.98 mg/kg組(P<0.05)，與其他各組無(wú)顯著差異(P>0.05)。

由圖1可見(jiàn)，以飼料維生素C含量與特定生長(zhǎng)率做折線(xiàn)回歸模型可得：Y=0.005 4X+0.760 9 (R2=1.000 0)和Y=-0.000 5X+1.154 2(R2=0.947 8)，2條直線(xiàn)相交點(diǎn)即為條紋鋸鮨幼魚(yú)特定生長(zhǎng)率最大時(shí)飼料維生素C含量，即維生素C需要量為66.66 mg/kg。

2.2 飼料維生素C含量對(duì)條紋鋸鮨幼魚(yú)血清生化指標(biāo)的影響

由表3可知，10.97、74.03 mg/kg組血清總蛋白含量顯著低于其他各組(P<0.05)，其他各組之間無(wú)顯著差異(P>0.05)。618.88和910.98 mg/kg組血清甘油三酯含量顯著低于其他各組(P<0.05)。10.97 mg/kg組血清溶菌酶活性顯著低于213.64、335.33、618.88、910.98 mg/kg組(P<0.05)。飼料維生素C含量對(duì)血清總膽固醇含量及堿性磷酸酶活性無(wú)顯著影響(P>0.05)。

由圖2可見(jiàn)，以飼料維生素C含量與血清溶菌酶活性做折線(xiàn)回歸模型可得：Y=0.236 5X+43.694 (R2=0.893 8)和Y=-0.054 7X+144.19 (R2=1.000 0)，2條直線(xiàn)相交點(diǎn)即為條紋鋸鮨幼魚(yú)血清溶菌酶活性最高時(shí)飼料維生素C含量，即維生素C需要量為345.11 mg/kg。

表2 飼料維生素C含量對(duì)條紋鋸鮨幼魚(yú)生長(zhǎng)性能、形體指標(biāo)和飼料利用的影響

同行數(shù)據(jù)肩標(biāo)不同小寫(xiě)字母表示差異顯著(P<0.05)，相同或無(wú)字母表示差異不顯著(P>0.05)。下表同。

In the same row, values with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05), while with the same or no letter superscripts mean no significant difference (P>0.05). The same as below.

圖1 飼料維生素C含量與條紋鋸鮨幼魚(yú)

2.3 飼料維生素C含量對(duì)條紋鋸鮨幼魚(yú)血清抗氧化指標(biāo)的影響

由表4可知，血清SOD活性和T-AOC均隨著飼料維生素C含量的升高呈現(xiàn)出先升高后降低的趨勢(shì)，血清MDA含量呈現(xiàn)先降低后升高的趨勢(shì)。335.33 mg/kg組血清SOD活性最高，顯著高于10.97、74.03、910.98 mg/kg組(P<0.05)；

335.33 mg/kg組血清T-AOC最高，顯著高于10.97、618.88、910.98 mg/kg組(P<0.05)；335.33 mg/kg組血清MDA含量最低，顯著低于10.97 mg/kg組(P<0.05)。飼料維生素C含量對(duì)血清CAT活性無(wú)顯著影響(P>0.05)。

由此可見(jiàn)，飼料維生素C含量為335.33 mg/kg時(shí)，對(duì)提高條紋鋸鮨幼魚(yú)血清抗氧化指標(biāo)的效果最好。

2.4 飼料維生素C含量對(duì)條紋鋸鮨肝臟抗氧化指標(biāo)的影響

由表5可知，335.33 mg/kg組肝臟SOD和CAT活性最高，MDA含量最低。飼料維生素C含量對(duì)肝臟T-AOC無(wú)顯著影響(P>0.05)。10.97 mg/kg組肝臟SOD和CAT活性顯著低于其他各組(P<0.05)。148.33、335.33和910.98 mg/kg組肝臟MDA含量顯著低于10.97 mg/kg(P<0.05)。

由此可見(jiàn)，飼料維生素C含量為335.33 mg/kg時(shí)，可顯著增強(qiáng)條紋鋸鮨幼魚(yú)肝臟的抗氧化能力。

表3 飼料維生素C含量對(duì)條紋鋸鮨幼魚(yú)血清生化指標(biāo)的影響

圖2 飼料維生素C含量與條紋鋸鮨幼魚(yú)

2.5 飼料維生素C含量對(duì)條紋鋸鮨幼魚(yú)肌肉抗氧化指標(biāo)的影響

由表6可知，飼料維生素C含量對(duì)肌肉CAT活性和MDA含量無(wú)顯著影響(P>0.05)。74.03 mg/kg組肌肉SOD活性和T-AOC均顯著高于其他各組(P<0.05)。

由此可見(jiàn)，飼料維生素C含量為74.03 mg/kg時(shí)，可有效增強(qiáng)肌肉的抗氧化能力。

2.6 飼料維生素C含量對(duì)條紋鋸鮨幼魚(yú)血清及肝臟GOT和GPT活性的影響

由表7可知，213.64、335.33、618.88、910.98 mg/kg組血清GOT活性顯著低于10.97 mg/kg組(P<0.05)。肝臟GOT活性隨著飼料維生素C含量的增加呈先上升后降低趨勢(shì)，10.97 mg/kg組顯著低于其他各組(P<0.05)，在335.33 mg/kg組達(dá)最高。10.97、74.03 mg/kg組血清GPT活性顯著高于其他各組(P<0.05)，其他各組之間差異不顯著(P>0.05)。飼料維生素C含量對(duì)肝臟GPT活性無(wú)顯著影響(P>0.05)。

2.7 飼料維生素C含量對(duì)條紋鋸鮨幼魚(yú)血清、肝臟和肌肉中維生素C積累量的影響

由表8可知，血清中維生素C積累量隨著飼料維生素C含量的增加不斷升高，910.98 mg/kg組血清中維生素C積累量達(dá)到最高，顯著高于其他各組(P<0.05)。肝臟中維生素C積累量也是隨著飼料維生素C含量的升高而升高，910.98 mg/kg組肝臟中維生素C積累量最高，并且顯著高于10.97、74.03、148.33和213.64 mg/kg組(P<0.05)，與335.33、618.88 mg/kg組差異不顯著(P>0.05)。肌肉中維生素C積累量隨著飼料維生素C含量的升高而增加，618.88 mg/kg組的肌肉中維生素C積累量最高，顯著高于10.97、74.03、148.33和213.64 mg/kg組(P<0.05)，與335.33、618.88 mg/kg組差異不顯著(P>0.05)。

條紋鋸鮨幼魚(yú)肝臟中維生素C積累量是3個(gè)組織中最高的。由圖3可見(jiàn)，以飼料維生素C含量與肝臟中維生素C積累量做折線(xiàn)回歸模型可得：Y=0.058 5X+7.5367 (R2=0.996 7)和Y=-0.001 7X+25.141 (R2=1.000 0)，2條直線(xiàn)相交點(diǎn)即為條紋鋸鮨幼魚(yú)肝臟中維生素C積累量最高時(shí)飼料維生素C含量，即維生素C需要量為309.93 mg/kg。

表4 飼料維生素C含量對(duì)條紋鋸鮨幼魚(yú)血清抗氧化指標(biāo)的影響

表5 飼料維生素C含量對(duì)條紋鋸鮨肝臟抗氧化指標(biāo)的影響

表6 飼料維生素C含量對(duì)條紋鋸鮨幼魚(yú)肌肉抗氧化指標(biāo)的影響

表7 飼料維生素C含量對(duì)條紋鋸鮨幼魚(yú)血清及肝臟GOT和GPT活性的影響

表8 飼料維生素C含量對(duì)條紋鋸鮨幼魚(yú)血清、肝臟和肌肉中維生素C積累量的影響

2.8 飼料維生素C含量對(duì)條紋鋸鮨幼魚(yú)肌肉成分的影響

由表9可知，飼料維生素C含量對(duì)肌肉粗蛋白質(zhì)、粗脂肪和粗灰分含量均無(wú)顯著影響(P>0.05)。74.03mg/kg組肌肉水分含量顯著低于10.97、148.33和213.64 mg/kg組(P<0.05)。肌肉膠原蛋白含量隨著飼料維生素C含量的升高而增加，910.98 mg/kg組肌肉膠原蛋白含量最高，顯著高于其他各組(P<0.05)。

圖3 飼料維生素C含量與條紋鋸鮨幼魚(yú)肝臟中

3 討 論

3.1 飼料維生素C含量對(duì)條紋鋸鮨幼魚(yú)生長(zhǎng)性能及血清生化指標(biāo)的影響

本研究結(jié)果表明，飼料中添加一定含量的維生素C對(duì)條紋鋸鮨幼魚(yú)具有顯著的促生長(zhǎng)作用，但維生素C含量過(guò)高(910.98 mg/kg)時(shí)不再促進(jìn)條紋鋸鮨的生長(zhǎng)，反而出現(xiàn)抑制生長(zhǎng)現(xiàn)象。這一結(jié)果同周歧存等[13]對(duì)點(diǎn)帶石斑魚(yú)(Epinephelus

coioides)、Shiau等[14]對(duì)雜交羅非魚(yú)(Oreochromisniloticus×O.aureus)的研究結(jié)果一致。對(duì)飼料維生素C含量及條紋鋸鮨幼魚(yú)特定生長(zhǎng)率之間進(jìn)行折線(xiàn)模型回歸分析可知，條紋鋸鮨幼魚(yú)飼料中維生素C的適宜含量為66.66 mg/kg，與胡毅等[15]對(duì)青魚(yú)(Mylopharyngodonpieceus)的研究結(jié)果(63 mg/kg)基本一致。在試驗(yàn)過(guò)程中，對(duì)照組魚(yú)體并未出現(xiàn)鰭條潰爛、脊柱彎曲、內(nèi)部出血、死亡率增加等維生素C缺乏癥，這可能因?yàn)閷?duì)照組飼料含有一定量的維生素C(10.97 mg/kg)，也可能是由于試驗(yàn)魚(yú)體較大，對(duì)維生素C缺乏不夠敏感所致。另外，Lee等[16]對(duì)許氏平鮋(Sebastesschlegeli)的研究表明，對(duì)魚(yú)體投喂不含維生素C的飼料12～16周后，魚(yú)體才會(huì)出現(xiàn)維生素C缺乏癥，因此維生素C缺乏是否能引起條紋鋸鮨幼魚(yú)出現(xiàn)維生素C缺乏癥，需要進(jìn)一步延長(zhǎng)養(yǎng)殖周期才能得以證明。本試驗(yàn)中，各組間條紋鋸鮨的生長(zhǎng)性能雖有差異，但總體生長(zhǎng)效果一般，增重率較低，猜測(cè)是由試驗(yàn)魚(yú)體規(guī)格較大導(dǎo)致。因此，建議在后續(xù)的研究工作中盡量采用規(guī)格較小的試驗(yàn)魚(yú)以獲得更佳的試驗(yàn)效果。

表9 飼料維生素C含量對(duì)條紋鋸鮨幼魚(yú)肌肉成分的影響

堿性磷酸酶是生物體內(nèi)關(guān)鍵的代謝調(diào)控酶，可以直接參與磷酸基團(tuán)的運(yùn)輸和鈣磷代謝，在魚(yú)體對(duì)營(yíng)養(yǎng)成分的吸收與利用過(guò)程中扮演著至關(guān)重要的角色，除此以外還能通過(guò)轉(zhuǎn)變病原體的表面構(gòu)造而強(qiáng)化被感染機(jī)體對(duì)病原體的識(shí)別和吞噬能力，有利于增強(qiáng)魚(yú)體的免疫力[17]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，飼料維生素C含量對(duì)條紋鋸鮨血清中AKP的活性無(wú)顯著影響，這可能是因?yàn)轸~(yú)體對(duì)外界刺激的反應(yīng)首先反映在組織抗氧化系統(tǒng)上，血清中AKP主要用于參與代謝調(diào)控和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收、利用上，并不需要調(diào)動(dòng)血清中AKP的活性，具體原因還需進(jìn)一步深入研究。

3.2 飼料維生素C含量對(duì)條紋鋸鮨幼魚(yú)組織抗氧化指標(biāo)及血清、肝臟中GOT、GPT活性的影響

動(dòng)物體內(nèi)活性氧自由基的形成和清除必須維持著一個(gè)動(dòng)態(tài)平衡，才可以使機(jī)體免受氧化脅迫的危害，保證機(jī)體正常的運(yùn)轉(zhuǎn)。MDA是脂質(zhì)被氧化后的關(guān)鍵成分，因其可對(duì)生物體細(xì)胞的構(gòu)造和活性產(chǎn)生很強(qiáng)的破壞性而具有很大的生物毒性[18]，MDA的含量可以直接表明生物膜受氧化損害的水平，間接表明自由基對(duì)生物體的損害水平[19]。SOD和CAT等構(gòu)成的抗氧化酶系統(tǒng)，可清除機(jī)體代謝產(chǎn)生的過(guò)多的自由基。其中，SOD是體內(nèi)以超氧陰離子(O2-)為唯一底物的酶類(lèi)和自由基連鎖反應(yīng)的阻斷劑，它可特異性地催化超氧化物自由基歧化為過(guò)氧化氫和氧氣，過(guò)氧化氫在CAT的作用下生成無(wú)毒性的水和氧氣。因此，檢測(cè)魚(yú)類(lèi)組織中的SOD、CAT的活性和MDA含量的變化可以較為準(zhǔn)確地反映魚(yú)體內(nèi)的抗氧化狀況[20]。T-AOC是評(píng)價(jià)機(jī)體清除自由基和其他潛在毒性氧化物能力的指標(biāo)，機(jī)體總抗氧化力的數(shù)值與其清除自由基的能力呈正比，即T-AOC數(shù)值越大，機(jī)體的防御性越強(qiáng)。在條紋鋸鮨幼魚(yú)肌肉組織中，335.33 mg/kg組的SOD活性最大，飼料維生素C含量對(duì)肌肉組織中CAT的活性和MDA的含量無(wú)顯著影響，但是74.03 mg/kg組的T-AOC最強(qiáng)。這可能是因?yàn)榭寡趸到y(tǒng)除本研究中檢測(cè)的SOD和CAT指標(biāo)外，還存在的谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)等其他抗氧化因子也做出了反應(yīng)。另外，維生素C含量對(duì)條紋鋸鮨幼魚(yú)血清和肌肉中的CAT活性均無(wú)顯著影響，這可能是由于SOD是首先作用于活性氧自由基的酶，CAT是SOD的下游酶，負(fù)責(zé)清除SOD與O2-作用后產(chǎn)生的過(guò)氧化氫，另外GSH-Px也可以起到同樣的作用，所以CAT并未被調(diào)動(dòng)參與血清和肌肉組織的抗氧化反應(yīng)中。

研究報(bào)道，飼料中添加316、2 000、100和630 mg/kg維生素C可提高黃顙魚(yú)(PelteobagrusfulvidracoRich)[21]、大口黑鱸(Micropterussalmoides)[22]、草魚(yú)(Ctenopharyngodonidellus)[23]、點(diǎn)帶石斑魚(yú)[24]等魚(yú)組織中SOD的活性；但宋理平等[25]對(duì)中國(guó)對(duì)蝦(Fenneropenaeuschinensis)幼蝦的報(bào)道稱(chēng)，飼料中的維生素C含量對(duì)其組織的SOD活性無(wú)顯著影響，而艾春香[26]對(duì)河蟹(Eriochiersinensis)的研究表明，隨著飼料維生素C含量的升高其血清SOD的活性反而降低。由此可見(jiàn)，飼料維生素C含量對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物組織中SOD活性影響的結(jié)論尚不一致，這可能與水產(chǎn)動(dòng)物的種類(lèi)、生長(zhǎng)階段、健康狀況、養(yǎng)殖環(huán)境以及添加維生素C來(lái)源的形式和維生素C與維生素E等營(yíng)養(yǎng)因子的相互作用有關(guān)，具體機(jī)制需要進(jìn)一步深入研究。

GOT和GPT在正常情況下主要分布于肝臟和心肌等組織細(xì)胞中，血清中轉(zhuǎn)氨酶的含量很少且活性很低，其主要作用是參與細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的新陳代謝和轉(zhuǎn)氨基作用。當(dāng)肝臟受損時(shí)，細(xì)胞通透性增大，GOT和GPT從肝臟進(jìn)入血液中，導(dǎo)致血清中2種轉(zhuǎn)氨酶活性上升。因而血清中GOT和GPT的活性可以反映肝組織是否病變或受損[27]。本研究中條紋鋸鮨幼魚(yú)血清中GPT的活性隨著飼料維生素C含量的升高而不斷下降，后處于平穩(wěn)狀態(tài)。在條紋鋸鮨幼魚(yú)肝臟中，GOT的活性先隨著飼料維生素C含量的增加而增強(qiáng)，而飼料維生素C含量達(dá)到910.98 mg/kg時(shí)，GOT的活性明顯降低。這說(shuō)明飼料中添加適量的維生素C可以對(duì)魚(yú)體起到一定程度保肝護(hù)肝的作用。

3.3 飼料維生素C含量對(duì)條紋鋸鮨幼魚(yú)組織維生素C積累量及肌肉營(yíng)養(yǎng)成分的影響

Wang等[28]報(bào)道，魚(yú)體組織維生素C的積累量由低到高為肌肉、肝臟、腦、鰓，本研究結(jié)果與上述報(bào)道一致，肌肉是3個(gè)組織中維生素C積累量最低的組織。Al-Amoudi等[29]認(rèn)為，出現(xiàn)這種現(xiàn)象的原因是肌肉的活躍度造成的，肌肉中的維生素C以一種可消費(fèi)的形式存在，能直接參與生理活動(dòng)。而肝臟是維生素C的主要代謝場(chǎng)所，也是主要儲(chǔ)存場(chǎng)所，所以肝臟中的維生素C含量遠(yuǎn)高于肌肉。Dabrowski[30]認(rèn)為，魚(yú)類(lèi)從外界獲取的維生素C主要用于維持組織中維生素C的穩(wěn)定狀態(tài)，所以維持組織最大積累量的維生素C添加量即為魚(yú)類(lèi)的最適添加量。Foumier等[31]報(bào)道，肝臟維生素C積累量達(dá)到飽和時(shí)飼料中的維生素C含量是估算歐洲鱸魚(yú)對(duì)維生素C需要量的最可靠的指標(biāo)，因此本研究中飼料維生素C含量為335.33 mg/kg是個(gè)可信的指標(biāo)。經(jīng)折線(xiàn)模型回歸分析可知，飼料維生素C含量為309.93 mg/kg的時(shí)，肝臟中維生素C的積累量開(kāi)始進(jìn)入平臺(tái)期。

本試驗(yàn)結(jié)果表明，條紋鋸鮨幼魚(yú)肌肉中粗蛋白質(zhì)、粗脂肪和粗灰分的含量不受飼料維生素C含量的影響，該結(jié)果與對(duì)半滑舌鰨(Cynoglossussemilaevis)[32]、翹嘴鲌(Culteralburnus)[33]、吉富羅非魚(yú)(O.niloticus)[34]的研究結(jié)果一致，但對(duì)點(diǎn)帶石斑魚(yú)[9]的研究顯示，飼料中維生素C含量對(duì)其肌肉的粗脂肪含量有顯著影響。本試驗(yàn)結(jié)果表明，飼料中添加高含量的維生素C可顯著提高肌肉中膠原蛋白的含量。膠原蛋白中羥脯氨酸和羥賴(lài)氨酸的含量十分豐富，維生素C是脯氨酸和賴(lài)氨酸羥化反應(yīng)不可缺少的輔酶，能夠促進(jìn)兩者的形成，因此添加維生素C有助于膠原蛋白的形成。

4 結(jié) 論

① 飼料中添加適量的維生素C，可顯著影響條紋鋸鮨幼魚(yú)的生長(zhǎng)、飼料利用、血清生化以及組織抗氧化指標(biāo)，顯著提高條紋鋸鮨幼魚(yú)肌肉中膠原蛋白的含量。

② 本研究以特定生長(zhǎng)率、肝臟中維生素C積累量和血清溶菌酶活性為評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，通過(guò)折線(xiàn)回歸模型得出，規(guī)格為88 g左右的條紋鋸鮨幼魚(yú)飼料中維生素C的需要量分別為66.66、309.93和345.11 mg/kg。