包紅桃 謝知慧 李應(yīng)福 王寶泉 晏 鵬 董娟娟 劉雙萍 武權(quán)生

(甘肅中醫(yī)藥大學(xué)，甘肅 蘭州 730000)

卵巢儲(chǔ)備功能(OR)是指卵巢皮質(zhì)區(qū)卵泡生長(zhǎng)、發(fā)育、形成可受精卵泡的能力，反映女性生育潛能和生殖內(nèi)分泌功能〔1,2〕。卵巢儲(chǔ)備功能下降(DOR)指卵巢產(chǎn)生卵子能力減弱、卵泡質(zhì)量下降，導(dǎo)致女性生育能力下降及性激素缺乏，臨床多表現(xiàn)為月經(jīng)稀發(fā)、經(jīng)期不規(guī)則、閉經(jīng)、不孕等〔3〕，DOR時(shí)卵巢抑制素生成減少，對(duì)垂體的抑制作用減弱使促卵泡生成素(FSH)分泌增加，而內(nèi)源性FSH 的持續(xù)升高可加速竇卵泡的消耗。如不積極干預(yù)最終將導(dǎo)致卵子的耗竭發(fā)生卵巢早衰，失去最佳治療機(jī)會(huì)。DOR發(fā)生與年齡、婚育狀況、宮腔操作次數(shù)、心理、吸煙、減肥藥服用史、雷公藤服用史、卵巢手術(shù)史、腮腺炎病史等諸多因素有關(guān)〔4〕。DOR發(fā)生率為10%〔5〕，是一個(gè)漸進(jìn)性過(guò)程，常在 1～6 年內(nèi)發(fā)展為卵巢衰竭?，F(xiàn)有DOR中醫(yī)、西醫(yī)治療手段都有不同的局限性〔6～12〕。近年來(lái)，致力于中醫(yī)藥改善OR的研究、探索日益增多，并已取得顯著臨床療效。傳統(tǒng)中醫(yī)診治疾病的整體觀念與辨證論治原則顯得尤為重要。本研究旨在闡釋中醫(yī)藥改善DOR的優(yōu)勢(shì)。

1 材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 采用自然老化的初老模型，SPF級(jí)SD大鼠，雌性，12～13月齡，體重240～440 g；5月齡青年大鼠，體重180～220 g。由甘肅中醫(yī)藥大學(xué)SPF級(jí)實(shí)驗(yàn)室提供。實(shí)驗(yàn)過(guò)程室溫保持(21±2)℃，相對(duì)濕度60%～70%，動(dòng)物購(gòu)進(jìn)后適應(yīng)性喂養(yǎng)4 d。

1.2實(shí)驗(yàn)藥物 所需中藥材均由甘肅中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院中藥房同一批購(gòu)進(jìn)。戊酸雌二醇片(補(bǔ)佳樂(lè)，生產(chǎn)廠家：拜耳醫(yī)藥保健有限公司廣州分公司，批號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字J20130009，劑型：片劑，規(guī)格：1 mg×21片，批號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字J20130009)。實(shí)驗(yàn)試劑：FSH和黃體生成素(LH)試劑盒均購(gòu)自欣博盛生物科技有限公司。

1.3實(shí)驗(yàn)方法 以陰道上皮角化試驗(yàn)驗(yàn)證模型〔13,14〕。按大鼠動(dòng)情周期陰道涂片的細(xì)胞變化特點(diǎn)來(lái)劃分動(dòng)情周期的各階段。通過(guò)陰道脫落細(xì)胞分析對(duì)60只13周齡SD雌性初老大鼠連續(xù)15 d進(jìn)行陰道涂片、鏡檢，觀察陰道組織涂片中細(xì)胞的變化，記錄圖像并分析。篩選出50只動(dòng)情周期紊亂、動(dòng)情間期延長(zhǎng)提示DOR模型大鼠后隨機(jī)分為模型組、組方高劑量組、組方中劑量組、組方低劑量組、補(bǔ)佳樂(lè)組。5月齡雌性大鼠10只為青年組。

1.3.1給藥 除模型組、青年組灌服等體積生理鹽水外，其余各組均按體表面積折算成人的等效劑量給藥，組方高(2.12 g·kg-1·d-1)、中(1.06 g·kg-1·d-1)、低劑量組(0.53 g·kg-1·d-1)，每日2次；補(bǔ)佳樂(lè)組0.03 g·kg-1·d-1，1次/d，均連續(xù)7 d。

1.3.2標(biāo)本采集 陰道脫落細(xì)胞采集方法：用自制的無(wú)菌棉簽蘸取少量生理鹽水浸濕后插入大鼠陰道，充分蘸取分泌物后取出，在玻片上輕輕滾動(dòng)，使分泌物均勻涂布于玻片上，待涂片自然風(fēng)干后，以95%的酒精固定、瑞氏染色。最后一次灌胃后1～2 h眼眶采血，離心后，取上清液，用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)監(jiān)測(cè)FSH、LH(按試劑盒說(shuō)明操作)，處死大鼠摘取卵巢，用10%的甲醛溶液固定，石蠟包埋切片，常規(guī)蘇木素-伊紅(HE)染色，在光鏡下觀察卵泡數(shù)量。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0軟件進(jìn)行單因素方差分析，方差齊者采用Bonferroni法，方差不齊者采用DunnettT3法。

2 結(jié) 果

2.1各組血清FSH、LH的表達(dá) 與模型組比較，組方高、中、低劑量組、補(bǔ)佳樂(lè)組血清FSH、LH明顯降低(P<0.05)，模型組血清FSH、LH值顯著高于青年組(P<0.05)；補(bǔ)佳樂(lè)組血清FSH、LH值顯著低于組方高、低劑量組(P<0.05)，而與組方中劑量組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；組方高、中、低劑量組、補(bǔ)佳樂(lè)組能明顯降血清FSH、LH表達(dá)水平，且中劑量組效果最顯著(P<0.01)。見表1。

2.2各組卵泡數(shù)量 青年組表現(xiàn)為卵巢體積大，卵泡生長(zhǎng)活躍，可見各級(jí)卵泡，顆粒細(xì)胞層次多，卵泡液含量多，黃體發(fā)育良好，體積大，血管豐富；模型組可見卵巢萎縮，卵泡數(shù)減少，無(wú)黃體，卵母細(xì)胞顆粒層數(shù)減少，閉鎖卵泡數(shù)增多，卵泡內(nèi)細(xì)胞排列出現(xiàn)紊亂；組方高、低劑量組可見卵巢略有萎縮，卵泡數(shù)略有增多，黃體數(shù)量略少，卵母細(xì)胞顆粒層數(shù)較多；組方中劑量、補(bǔ)佳樂(lè)組可見卵巢體積正常大小，各級(jí)卵泡數(shù)均較多，卵泡液含量多，黃體數(shù)較多，卵母顆粒細(xì)胞層次增多，以組方中劑量組尤為明顯。見圖1。

表1 各組血清 FSH、LH表達(dá)水平

與青年組比較：1)P<0.05；與模型組比較：2)P<0.05，3)P<0.01；與補(bǔ)佳樂(lè)組比較：4)P<0.05

圖1 各組卵巢組織中卵泡數(shù)量(×10)

3 討 論

中醫(yī)藥防治DOR從多方面、多環(huán)節(jié)入手，對(duì)人體具有整體調(diào)節(jié)作用，中醫(yī)藥補(bǔ)腎活血，調(diào)肝健脾、滋陰補(bǔ)腎、補(bǔ)腎祛瘀等效果顯著〔15，16〕。西醫(yī)常采用激素治療DOR，但其副作用較大，患者服藥期間易擅自停藥等。應(yīng)用“肝腎同源，精血互生”病機(jī)理論，從整體出發(fā)，辨證論治，具有整體調(diào)控和多靶點(diǎn)、多方式調(diào)節(jié)的特點(diǎn)。臨床經(jīng)驗(yàn)方滋養(yǎng)肝腎組方加以優(yōu)化后篩選出以炙黃芪35 g、淫羊藿15 g、生地12 g、熟地15 g、枸杞15 g、當(dāng)歸20 g、鹽澤瀉12 g、茯苓15 g、太子參30 g、麩炒白術(shù)18 g、陳皮6 g、女貞子15 g、酒萸肉12 g、炒山藥15 g、炒白芍15 g、墨旱蓮15 g、何首烏15 g、酒黃精15 g、鹿角膠10 g、龜甲膠15 g、甘草6 g具有地域特色藥材為主的基本配伍組方，本研究說(shuō)明滋養(yǎng)肝腎組方通過(guò)滋養(yǎng)肝腎調(diào)節(jié)機(jī)體生殖內(nèi)分泌功能，改善DOR的作用，從而穩(wěn)定機(jī)體內(nèi)環(huán)境。