徐 珂 張明哲 張振東 楊 炳

(遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院婦科，貴州 遵義 563003)

研究表明，部分特定的生物分子標(biāo)志物與子宮內(nèi)膜癌(EC)的發(fā)生發(fā)展及預(yù)后關(guān)系密切〔1〕。近年來的生物學(xué)報(bào)道顯示，細(xì)胞凋亡抑制基因是EC內(nèi)在調(diào)控因子〔2〕。凋亡抑制基因(Survivin)蛋白作為抑制蛋白家族的新成員，具有較強(qiáng)的腫瘤特異性〔3〕。另外，雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)與腫瘤的發(fā)生和轉(zhuǎn)移關(guān)系密切〔4〕。VEGF是一種特異性高，功能性強(qiáng)的促血管生長(zhǎng)因子，具有促進(jìn)實(shí)體瘤血管形成的作用〔5，6〕。本文擬探討Survivin、ER、PR、VEGF蛋白表達(dá)與EC臨床病理特征的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1臨床資料 選擇2017年2～12月遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院婦科接診的33例EC患者為觀察組Ⅰ，均經(jīng)手術(shù)病理確診，排除首次治療為非手術(shù)治療和在其他醫(yī)院進(jìn)行過第一次手術(shù)治療的患者。上述患者均未接受放療、化療與激素治療，患者之前所接受的手術(shù)方式為全子宮切除術(shù)。年齡46～72〔平均(59.0±5.3)〕歲；病理分期采用2009年國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO)標(biāo)準(zhǔn)：Ⅰ期25例，Ⅱ期6例，Ⅲ期2例。細(xì)胞分化程度：G1級(jí)20例，G2級(jí)8例，G3級(jí)5例。浸潤(rùn)程度：未浸潤(rùn)6例，淺肌層浸潤(rùn)16例，深肌層浸潤(rùn)11例。淋巴轉(zhuǎn)移轉(zhuǎn)移5例，未轉(zhuǎn)移28例。取觀察組Ⅰ患者癌旁組織25例為觀察組Ⅱ。取同期行子宮全切術(shù)的26例子宮肌瘤患者為對(duì)照組，年齡44～78〔平均(61.0±5.1)〕歲。上述患者均自愿簽署知情同意書。三組一般資料比較無顯著差異(P>0.05)。

1.2ER、PR、VEGF與Survivin檢測(cè) 入選患者行全子宮切除術(shù)的過程中，獲取子宮組織標(biāo)本，10%甲醛溶液固定標(biāo)本，石蠟包埋，制作3張切片，每張切片厚度大約為4 μm，而后進(jìn)行常規(guī)二甲苯脫蠟，采用梯度酒精脫水，3%過氧化氫進(jìn)行內(nèi)源性過氧化物酶封閉，標(biāo)本常規(guī)脫蠟后進(jìn)行微波修復(fù)抗原，非特異性抗原操作于10%正常山羊血清封閉組織中進(jìn)行，加入兔抗人ER、PR 抗體(Novocastra公司) ，于4℃冰箱孵育24 h，以磷酸鹽緩沖液(PBS)代替第一抗體作為陰性對(duì)照，次日滴加生物素標(biāo)記的羊抗兔二抗(ER、PR二抗為北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，Survivin和VEGF二抗試劑盒購自福建邁新生物技術(shù)公司)，免疫組化(SP)法染色，二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色，蘇木素復(fù)染，中性樹脂封片，鏡檢。以已知EC陽性切片作陽性對(duì)照。

1.3結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn) ER、PR、VEGF與Survivin以細(xì)胞核或細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性。結(jié)果判定采用半定量積分法：①依據(jù)每張切片中細(xì)胞的染色強(qiáng)度評(píng)分：0分無顯色，1分淺黃色，2分棕黃色，3分棕褐色；② 依據(jù)組織切片中的陽性染色細(xì)胞數(shù)量占全部腫瘤細(xì)胞數(shù)量百分比評(píng)分：≤5%為0分，>5%且≤25%為1分，>25%且≤50%為2分，>50%且≤75%為3分，>75%為4分；③ 前兩項(xiàng)指標(biāo)評(píng)分相乘：兩者乘積為0分為陰性(-)；兩者乘積1～4分為弱陽性(+)；兩者乘積5～8分為中度陽性()；兩者乘積9～12分為強(qiáng)陽性()。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS19.0軟件進(jìn)行χ2及t檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1各組Survivin、VEGF、ER、PR蛋白表達(dá) 觀察組Ⅰ與觀察組Ⅱ Survivin、VEGF、ER、PR蛋白陽性率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；對(duì)照組Survivin、VEGF、ER、PR蛋白陽性率明顯低于觀察組Ⅰ、觀察組Ⅱ，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

2.2ER、PR、VEGF、Survivin蛋白與EC臨床病理特征的相關(guān)性 ER、PR、VEGF、Survivin蛋白陽性表達(dá)與EC臨床分期、組織分化程度、浸潤(rùn)程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移存在明顯相關(guān)性，見表2。

表1 各組Survivin蛋白水平表達(dá)情況(n)

與對(duì)照組比較：1)P<0.05

表2 VEGF、Survivin、ER、PR蛋白陽性率與EC臨床病理特征的相關(guān)性(%)

3 討 論

圍絕經(jīng)期和絕經(jīng)后女性的EC發(fā)病比例較高〔7〕。在我國(guó)，每年將近20萬的新發(fā)EC病例，致死率僅次于宮頸癌和卵巢癌。目前，EC的病因尚不明確，可能與患者的生活方式有關(guān)〔8〕。Surivivin表達(dá)于腫瘤和胚胎組織中，且與腫瘤的分化增殖、浸潤(rùn)程度、轉(zhuǎn)移存在密切關(guān)聯(lián)〔9～11〕。本研究表明Survivin蛋白在EC組織中呈過表達(dá)，且能夠推測(cè)出Survivin的異常表達(dá)可能發(fā)生于EC的早期階段。EC早期階段通過抑制細(xì)胞凋亡，而一些存在缺陷的基因細(xì)胞會(huì)繼續(xù)不停的生長(zhǎng)，從而促進(jìn)基因突變的聚集，進(jìn)而使細(xì)胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化，誘導(dǎo)EC的發(fā)生。Survivin的高表達(dá)為腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移提供了優(yōu)勢(shì)。VEGF可直接作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞，并與血管內(nèi)皮細(xì)胞上的受體結(jié)合，經(jīng)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)達(dá)到促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞分化和血管生成的作用。研究指出，VEGF對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞有較強(qiáng)的促增殖、促分裂、促轉(zhuǎn)移作用，同時(shí)還能增強(qiáng)小血管的通透性；另外，VEGF還能抑制內(nèi)皮細(xì)胞基因的活化，從而誘導(dǎo)其產(chǎn)生蛋白水解酶，誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞移動(dòng)、促進(jìn)腫瘤血管生成、淋巴管生成，誘導(dǎo)腫瘤形成〔1,12,13〕。本文提示VEGF與EC的侵襲和轉(zhuǎn)移存在關(guān)聯(lián)，也是導(dǎo)致EC預(yù)后不良的重要因素，因此，針對(duì)VEGF的特異性治療也是抑制EC轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)的重要方法。EC屬ER依賴型，ER與EC的發(fā)生、發(fā)展及其預(yù)后關(guān)系密切〔14〕。本研究顯示隨EC進(jìn)展，子宮內(nèi)膜正常細(xì)胞的功能受到影響，導(dǎo)致ER的表達(dá)呈低水平，多數(shù)情況下為弱陽性表達(dá)。組織學(xué)病理分級(jí)主要反映腫瘤生物學(xué)的行為特征，ER的表達(dá)與臨床病理相關(guān)性分析結(jié)果提示，臨床分期越晚、細(xì)胞分化程度越低、浸潤(rùn)程度越深，癌組織中的ER陽性表達(dá)率就越低〔15〕。因此，EC中ER表達(dá)降低預(yù)示腫瘤惡性程度增加。另外，EC是激素依賴性腫瘤，其發(fā)生與ER長(zhǎng)期刺激而無PR拮抗有關(guān)〔16〕。孕激素能通過PR發(fā)揮重要的生理作用，且與EC的發(fā)生、發(fā)展、預(yù)后有關(guān)。PR低表達(dá)通常早于EC的發(fā)生或發(fā)生在EC的早期階段，原因是孕激素?zé)o法發(fā)揮拮抗ER的作用，從而導(dǎo)致EC的發(fā)生，同時(shí)也提示PR在臨床治療中具有一定作用〔17〕。本文提示，PR的陽性表達(dá)與EC的惡性程度和預(yù)后存在密切關(guān)聯(lián)，PR表達(dá)越高，惡性程度越低，預(yù)后良好。