李春磊 裴艷志 鄒志田 高磊 路通 凡航 朱曉峰

摘 要：目的 研究CCR7在NSCLC中的表達(dá)情況，探討其與NSCLC的臨床病理關(guān)系。方法 采取鏈霉素抗生物素蛋白-過氧化物酶免疫組化法檢測36例非小細(xì)胞肺癌組織、5例正常肺組織 CCR7的表達(dá)情況及肺癌組織 D2-40的表達(dá)情況。結(jié)果 CCR7主要表達(dá)在細(xì)胞膜及細(xì)胞質(zhì)，36例組織標(biāo)本中29例陽性表達(dá)，陽性率為80.56%；正常肺組織的陽性率為10.00%。癌組織淋巴結(jié)陽性標(biāo)本中 CCR7陽性率為84.21%，陰性標(biāo)本陽性率為52.94%（P<0.05）。結(jié)論 CCR7在肺癌組織中高表達(dá)，并隨著TNM分期的提高，CCR7的表達(dá)也逐漸提高。并且CCR7高表達(dá)的癌組織樣本中D2-40也呈現(xiàn)高表達(dá)。NSCLC淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與癌組織中的CC7高表達(dá)關(guān)聯(lián)密切，可能為今后預(yù)測NSCLC患者預(yù)后及治療提供有力的理論依據(jù)。

關(guān)鍵詞：非小細(xì)胞肺癌；CCR7；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移

中圖分類號：R734.2 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2018.17.004

文章編號：1006-1959（2018）17-0014-03

Abstract：Objective To investigate the expression of CCR7 in NSCLC and to explore its clinicopathological relationship with NSCLC. Methods The expression of CCR7 in 36 cases of non-small cell lung cancer tissues and 5 normal lung tissues and the expression of D2-40 in lung cancer tissues were detected by streptomycin avidin-peroxidase immunohistochemistry.Results CCR7 was mainly expressed in cell membrane and cytoplasm，and 29 cases were positively expressed in 36 tissue samples，the positive rate was 80.56%； the positive rate of normal lung tissue was 10.00%.The positive rate of CCR7 in cancer tissue-positive specimens was 84.21%，and the positive rate in negative specimens was 52.94%（P<0.05）.Conclusion CCR7 is highly expressed in lung cancer tissues，and the expression of CCR7 is gradually increased with the increase of TNM staging.And D2-40 also showed high expression in cancer tissue samples with high CCR7 expression.NSCLC lymph node metastasis is closely related to the high expression of CC7 in cancer tissues， which may provide a powerful theoretical basis for predicting the prognosis and treatment of patients with NSCLC.

Key words：Non-small cell lung cancer；CCR7；Lymph node metastasis

肺癌（lung cancer）發(fā)生于支氣管黏膜及其腺體上皮的惡性腫瘤，是當(dāng)今全世界威脅人類健康的最嚴(yán)重的惡性疾病之一，且其發(fā)病率呈逐年上升的趨勢，現(xiàn)已位居惡性腫瘤發(fā)病率和死亡率之首，其中80%以上是非小細(xì)胞肺癌（non-small cell lung cancer， NSCLC）[1]?，F(xiàn)階段的治療方法以手術(shù)為主，放化療等多學(xué)科綜合治療已成為學(xué)科共識。雖然目前在肺癌早期診斷及綜合治療方面取得了相當(dāng)大的進(jìn)展，但目前的5年生存期仍未達(dá)到令人滿意的程度，即便是Ⅰ期的NSCLC患者根治術(shù)后，仍會有相當(dāng)一部分患者發(fā)生腫瘤的復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，這提示著我們這些患者術(shù)前即有可能存在著一些轉(zhuǎn)移，而淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移最常見的途徑，所以肺癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是臨床治療所面對的最大難題，直接影響著患者的生存期。趨化因子受體7（Chemokine receptor 7，CCR7）是一種G蛋白偶聯(lián)的7次跨膜受體，在與配體相結(jié)合，可實(shí)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞與淋巴細(xì)胞歸巢類似的生物學(xué)行為，進(jìn)而介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞向特定器官的轉(zhuǎn)移?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，CCR7在多種實(shí)體腫瘤中高表達(dá)，如胰腺癌、乳腺癌、橫紋肌肉瘤等，影響著腫瘤細(xì)胞的粘附、存活、淋巴管、血管生成等，在腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用。本實(shí)驗研究CCR7在NSCLC組織中表達(dá)情況及其臨床病理的關(guān)系進(jìn)行分析。

1資料與方法

1.1 一般資料 NSCLC組織蠟塊來自佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院胸外科從2010年1月～2015年12月行手術(shù)切除的肺癌組織，并選取5例手術(shù)切除的正常肺組織，按照《中國腫瘤病理學(xué)分類》，36例標(biāo)本中鱗癌15例，腺癌19例，腺鱗癌2例。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移19例；年齡48～75歲，中位年齡60歲。所入選患者手術(shù)前均未行放療或化療治療。36例患者按照國際抗癌協(xié)會（ UICC）2009年新修訂的第七版非小細(xì)胞肺癌 TNM分期分為：Ⅰ期8例、Ⅱ期15例、Ⅲ期13例。所有切片經(jīng)過10%中性福爾馬林溶液浸泡固定，并常規(guī)石蠟包埋，4 μm連續(xù)切片，免疫組織化學(xué)SP法染色。

1.2 主要試劑 鼠抗人CCR7購買自哈爾濱博士德生物科技有限公司。檢測系統(tǒng)DAB顯示試劑盒購買于北京中杉金橋生物科技有限公司。

1.3 實(shí)驗方法 所有標(biāo)本均經(jīng)過檸檬酸緩沖液（pH=6.0）高溫高壓抗原修復(fù)，采用鏈霉素抗生物素蛋白-過氧化物酶免疫組化法（SP法）免疫組織化學(xué)法染色。 嚴(yán)格按照試劑盒操作進(jìn)行。CCR7稀釋濃度為1： 100。用已知的CCR7陽性切片作CCR7的陽性對照。PBS取代一抗作陰性對照。所有切片采用DAB顯色，蘇木精復(fù)染，中性樹脂封片，光鏡下觀察。

1.4結(jié)果判定 按照Andre等[2]的方法對CCR7的結(jié)果進(jìn)行判讀，由兩位資深病理醫(yī)師雙盲閱片，根據(jù)免疫組織化學(xué)染色陽性的細(xì)胞比例和染色的強(qiáng)度進(jìn)行評分，以細(xì)胞膜或細(xì)胞漿呈棕黃色顆粒為陽性細(xì)胞。染色強(qiáng)度判：無色記為0分；淺黃色記為1分；棕黃色記為2分；棕褐色記為3分；根據(jù)著色細(xì)胞比例評分：≤10%記為0分； 11%～25%記為1分； 26%～50%記為2分； <50%記為3分。兩者評分之和≥3分記為陽性，<3分記為陰性。

1.5統(tǒng)計學(xué)方法 本次研究數(shù)據(jù)采用SPSS21.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行分析，計數(shù)資料以（%）表示，行？字2檢驗，P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

隨著TNM分期的提高，其陽性率也逐漸提高。正常肺組織多為染色陰性或淺黃色，染色的面積小，見圖1。CCR7在NSCLC中高表達(dá)，且表達(dá)主要在細(xì)胞膜和（或）細(xì)胞質(zhì)中，見圖2。36例NSCLC組織有80.56%的標(biāo)本陽性表達(dá)，正常肺組織為10.00%（P<0.05）。同時，本實(shí)驗還發(fā)現(xiàn)CCR7的表達(dá)與患者的年齡、性別、腫瘤大小、病理類型無關(guān)，而與淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移、腫瘤的TNM分期相關(guān)，見表1。

3討論

腫瘤轉(zhuǎn)移和侵襲是人類癌癥的關(guān)鍵惡性特征。腫瘤患者的死亡主要是由癌細(xì)胞擴(kuò)散到遠(yuǎn)處的器官造成。癌癥轉(zhuǎn)移的重要特征之一就是淋巴結(jié)受累。目前腫瘤新生淋巴管及新生血管的研究已成為研究腫瘤轉(zhuǎn)移的熱點(diǎn)。CCR7在腫瘤淋巴管和血管的生成中起到重要作用。CCR7在所有原始T細(xì)胞和一些記憶T細(xì)胞，B細(xì)胞和成熟樹突狀細(xì)胞上表達(dá)。在免疫和炎癥反應(yīng)期間，CCR7與其配體趨化因子配體19（CCL19）或趨化因子配體21（CCL21）相互作用時，可促進(jìn)淋巴細(xì)胞運(yùn)輸和歸巢到淋巴結(jié)[3-5]。相關(guān)文獻(xiàn)報道[6]CCR7可與其配體 CCL19/CCL21相結(jié)合，在多種生長因子，如VEGF-C、D等的參與下，可趨化腫瘤向淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。

D2-40是近年來發(fā)現(xiàn)的一種淋巴管標(biāo)志物，可與癌胚抗原M2A特異性結(jié)合，且只與淋巴管內(nèi)皮反應(yīng)，不與血管內(nèi)皮反應(yīng)，被認(rèn)為是最具有特異性的淋巴管標(biāo)志物[7]。相關(guān)研究顯示[8] D2-40抗體可更敏感的檢測出腫瘤淋巴管的生成，可更有效的預(yù)測腫瘤的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。

本實(shí)驗發(fā)現(xiàn)：①CCR7在NSCLC組織中的表達(dá)顯著高于正常組織，且隨著TNM分期的提高，NSCLC組織CCR7的陽性率逐漸提高；②淋巴結(jié)陽性的NSCLC的CCR7的表達(dá)率高于淋巴結(jié)陰性的標(biāo)本；③淋巴結(jié)陽性組的MLVD高于淋巴結(jié)陰性組MLVD；④CCR7在不同病理類型的NSCLC表達(dá)，差異無臨床意義及統(tǒng)計學(xué)意義。

本實(shí)驗采用SP法證實(shí)了CCR7與NSCLC淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移高度相關(guān)。相關(guān)研究[9-11]證明 CCR7可與其配體結(jié)合，形成CCR7/CCL19/CCL21系統(tǒng)，通過ERK/Akt通路誘導(dǎo)VEGF-C、D的上調(diào)，從而促進(jìn)腫瘤微淋巴管生成，為NSCLC淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移打下伏筆。并且該實(shí)驗測定D2-40發(fā)現(xiàn)淋巴結(jié)陽性的組織MLVD的表達(dá)率明顯高于淋巴結(jié)陰性的標(biāo)本，從側(cè)面印證CCR7與NSCLC淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。

綜上所述，CCR7高表達(dá)與NSCLC淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移關(guān)系密切，可能為今后NSCLC患者的治療及預(yù)測預(yù)后提供有力的理論依據(jù)。積極尋找阻斷CCR7作用通路的靶點(diǎn)，將成為未來研究NSCLC淋巴管生成和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移新的方向。

參考文獻(xiàn)：

[1]Jemal A，Bray F，Center MM，et al.Global cancer statistics[J].Ca A Cancer Journal for Clinicians，2015，65（2）：87-108.

[2]Andre F，Cabioglu N，Assi H，et al.Expression of chemokine receptors predicts the site of metastatic relapse in patients with axillary node positive primary breast cancer[J].Annals of Oncology Official Journal of the European Society for Medical Oncology，2006，17（6）：945.

[3]Chiara LD，Crean J.Emerging Transcriptional Mechanisms in the Regulation of Epithelial to Mesenchymal Transition and Cellular Plasticity in the Kidney[J].Journal of Clinical Medicine， 2016，5（1）：6.

[4]Mitsugu F，Takaaki M，Akihiko I.Biomedical insights into cell adhesion and migration-from a viewpoint of central nervous system tumor immunology[J].Frontiers in Cell&Developmental; Biology，2015，3（3）：55.

[5]Nowruz D，Ehsan S，Parva P，et al.Comparison The Effects of Two Monocyte Isolation Methods，Plastic Adherence and Magnetic Activated Cell Sorting Methods，on Phagocytic Activity of Generated Dendritic Cells[J].Cell Journal，2013，15（3）：218-223.

[6]蔡慶勇.CCR7基因?qū)κ彻荀[狀細(xì)胞癌新生血管的作用及機(jī)制研究[D].第三軍醫(yī)大學(xué)，2016.

[7]張春芳，齊冬雪，楊聰穎，等.SALL4、D2-40和 Glypican-3在睪丸生殖細(xì)胞腫瘤診斷中的應(yīng)用[J].臨床與實(shí)驗病理學(xué)雜志，2015（8）：850-854.

[8]高強(qiáng)，丁貴坡，張旋.乳腺癌組織中D2-40標(biāo)記的淋巴管浸潤與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系[J].中國實(shí)用醫(yī)刊，2014，41（6）：19-21.

[9]楊潤祥，劉林，馬飛，等.甲狀腺癌中CCR7和D2-40的表達(dá)及其與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系[J].腫瘤防治研究，2014，41（5）：418-422..

[10]Zhang YY，Liu ZB，Ye XG，et al.Iodine regulates G2M progression induced by CCL21 CCR7 interaction in primary cultures of papillary thyroid cancer cells with RET PTC expression[J].Molecular Medicine Reports，2016，14（4）：3941-3946.

[11]Irino T，Takeuchi H，Matsuda S，et al.CC-Chemokine receptor CCR7：a key molecule for lymph node metastasis in esophageal squamous cell carcinoma[J].Bmc Cancer，2014，14（1）：291.

收稿日期：2018-3-12；修回日期：2018-4-11

編輯/李樺