張慶華

天津紅日藥業(yè)股份有限公司 天津 301700

1 雜質(zhì)研究的目的和意義

創(chuàng)新藥物雜質(zhì)研究具有兩方面的重要意義，首先，雜質(zhì)的研究是保證產(chǎn)品安全性的需要。創(chuàng)新藥物的整個研究階段，安全性是最重要的研究內(nèi)容。其次，雜質(zhì)研究涉及藥學(xué)研究的全過程。藥物的雜質(zhì)來源、檢測方法、限度可能存在潛在的安全性隱患，這些由雜質(zhì)帶來的因素，對于劑型選擇、處方組成、工藝確定、分析方法的研究以及產(chǎn)品的儲存等均產(chǎn)生較大的影響。所以雜質(zhì)應(yīng)是創(chuàng)新藥物質(zhì)量研究、質(zhì)量控制和安全性研究的重點。雜質(zhì)研究直接體現(xiàn)創(chuàng)新物的研究水平。

2 復(fù)方制劑雜質(zhì)研究的特點

復(fù)方制劑的雜質(zhì)研究除應(yīng)符合藥物制劑雜質(zhì)研究的一般性要求之外，還有以下特點：①復(fù)方制劑由2種或2種以上藥物組成，其雜質(zhì)包括各原料藥中帶入的雜質(zhì)，各藥物在制劑制備過程和貯藏期間產(chǎn)生的降解產(chǎn)物，以及各藥物之間、藥物與輔料之間可能的相互作用產(chǎn)生的降解產(chǎn)物。因此，復(fù)方制劑的雜質(zhì)數(shù)目多，且其來源具有多樣性。②由于復(fù)方制劑雜質(zhì)數(shù)目多及來源的多樣性，使得雜質(zhì)的分離檢出、定性及定量研究工作更加困難。③復(fù)方制劑雜質(zhì)的檢查方法應(yīng)兼顧不同來源的雜質(zhì)，同時應(yīng)重點監(jiān)控毒性雜質(zhì)及穩(wěn)定性較差藥物的降解產(chǎn)物，因此檢查方法的建立及限度的確定均較單方制劑復(fù)雜得多。

3 我國對復(fù)方制劑中雜質(zhì)檢查和控制的研究現(xiàn)狀

中國藥典2005年版新增的《藥品雜質(zhì)分析指導(dǎo)原則》規(guī)定：對于制劑中的雜質(zhì)，除降解產(chǎn)物和毒性雜質(zhì)外，如果是原料藥中已經(jīng)控制的，則在制劑中一般不再控制，故對于制劑而言，需重點關(guān)注的雜質(zhì)主要是降解產(chǎn)物。翟惠民等指出，應(yīng)深入研究藥品中雜質(zhì)及降解產(chǎn)物的檢查方法，重視降解產(chǎn)物的檢測。有些西藥制劑由于輔料、工藝、包裝材料及貯藏條件的影響，其穩(wěn)定性與原料藥差異較大，若新制劑中降解產(chǎn)物的檢查方法完全照搬原料藥的做法，而不做驗證考察是不妥當(dāng)?shù)模驗橹苿┻^程中可能會產(chǎn)生新的降解產(chǎn)物。

孔英梅等提出了我國在新藥有關(guān)物質(zhì)檢查中存在的一些問題：申報資料中常提出因原料藥進行了有關(guān)物質(zhì)檢查，并已放入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中，所以對制劑不再進行有關(guān)物質(zhì)檢測；另外，在復(fù)方制劑的雜質(zhì)檢查中，僅僅采用面積歸一化法對雜質(zhì)的總量進行控制，而不對各個雜質(zhì)來源進行歸屬。如，徐繼建等在測定復(fù)方二甲雙肌格列本服片中雜質(zhì)時，對已知雜質(zhì)雙氰胺按外標(biāo)法計算，認為含量不超過0.1%，其他單個雜質(zhì)峰面積之和不得大于對照溶液中鹽酸二甲雙肌峰面積的3倍即可。

石慶平等在檢查復(fù)方維生素注射液中有關(guān)物質(zhì)時，采用高效液相色譜(HPLC)法有效分離出注射液中有關(guān)物質(zhì)，得出的結(jié)果是：雜質(zhì)峰面積總和不大于對照溶液主峰面積的3%，單個雜質(zhì)峰面積不大于對照溶液主峰面積的1.5%由于復(fù)方制劑中幾種主成分含量相差較大，或者紫外響應(yīng)值不同，反映在HPLC相譜中，則表現(xiàn)為峰面積差別較大。這時，若以色譜峰積分面積較大的主成分作對照，計算所得制劑中有關(guān)物質(zhì)含量往往低于實際含量而會被忽略，即使其有關(guān)物質(zhì)實際含量較其單方制劑高出很多，總有關(guān)物質(zhì)的含量仍然符合申報的限度要求，致使復(fù)方制劑會因含有關(guān)物質(zhì)而存在安全隱患。例如，復(fù)方萘普生栓是由萘普生和己烯雌酚組成的復(fù)方制劑，其中含萘普生400mg和己烯雌酚4mg因己烯雌酚的含量只有萘普生的1%，并且在240nm處的紫外吸收弱于萘普生，這樣，選擇不同主成分作為對照品測定制劑中有關(guān)物質(zhì)含量將得出不同的結(jié)果；若選擇萘普生為對照品，有關(guān)物質(zhì)的測得量會低于實際量，而選擇己烯雌酚為對照品，則有關(guān)物質(zhì)的測得量會高于實際量。徐麗佳采用反相HPLC法測定復(fù)方萘普生栓中有關(guān)物質(zhì)含量時，以控制萘普生的有關(guān)物質(zhì)為主，用已知雜質(zhì)法測定萘普生中的6甲氧基-2茶乙酮，用萘普生自身對照法測定其他有關(guān)物質(zhì)。這樣所測得的有關(guān)物質(zhì)含量必定會低于實際值，易導(dǎo)致制劑出現(xiàn)安全性問題。

4 復(fù)方制劑雜質(zhì)研究的基本思路

復(fù)方制劑雜質(zhì)研究的目的與單方制劑一樣，是為了有效地控制制劑中雜質(zhì)的含量，特別是控制有毒有害雜質(zhì)的量不超過可接受的限度，并為制劑處方工藝選擇、貯藏條件的確定提供有用信息[1]。復(fù)方制劑進行雜質(zhì)研究，首先應(yīng)采用適當(dāng)?shù)姆椒?，分析確定各雜質(zhì)的來源，對雜質(zhì)進行定性研究和歸屬，因為雜質(zhì)限度的確定必須以明確的歸屬為基礎(chǔ)。對于毒性雜質(zhì)，需明確歸屬才能嚴格控制，制定合理的限度；即使對于一般的微量未知雜質(zhì)，由于來源于不同主藥，其可接受的限量可能不同，一般也應(yīng)確定其來源，除非雜質(zhì)的量小于制劑中含量最小藥物可接受的未知雜質(zhì)限量。復(fù)方制劑雜質(zhì)研究采用的檢測方法應(yīng)能有效分離各雜質(zhì)，方法的靈敏度除應(yīng)符合一般要求外，還要關(guān)注對制劑中含量較小的藥物產(chǎn)生的雜質(zhì)的檢出能力。

4.1 雜質(zhì)檢測

4.1.1 一般雜質(zhì)的檢測

氣相色譜法（GC）適用于易揮發(fā)且熱穩(wěn)定性的物質(zhì)，一般用于殘留溶劑的檢測。無機雜質(zhì)可能來源于原料藥、輔料或制劑的生產(chǎn)過程和環(huán)境污染物中。2015年版《中國藥典》加強了包括催化劑在內(nèi)的無機雜質(zhì)檢測方法的研究與修訂，提高了方法的準(zhǔn)確性。因在藥物生產(chǎn)中經(jīng)常會遇到鉛，且鉛易積蓄中毒，故藥物質(zhì)量控制中經(jīng)常以鉛作為重金屬的代表，用其限量表示重金屬限度。經(jīng)典的重金屬限度檢查法存在一定的局限性，已在2010年版《中國藥典》（一部）收錄，且在2015年版《中國藥典》第二、三部新增的電感耦合等離子體發(fā)射光譜法（ICP-OES）、電感耦合等離子體質(zhì)譜法（ICP-MS）、高效液相色譜-電感耦合等離子體質(zhì)譜法（HPLC-ICP-MS）可以同時定量檢測多種金屬元素的含量。不同化學(xué)形態(tài)的金屬雜質(zhì)在毒理學(xué)和生物學(xué)上的性質(zhì)可能有很大差異，HPLC-ICP-MS法對分析極低含量、不同形態(tài)的As和Hg有著靈敏度高、易于操作的優(yōu)勢。

4.1.2 特殊雜質(zhì)的檢測

在雜質(zhì)譜分析的基礎(chǔ)上，有針對性地選擇專屬靈敏的分析方法，以確保化學(xué)藥物雜質(zhì)的有效檢出。在有關(guān)物質(zhì)檢查方面，2015年版《中國藥典》加強了對化學(xué)藥物雜質(zhì)定性定量測定方法的研究，增加了正文所涉及的448個雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)式等分子信息，實現(xiàn)對已知雜質(zhì)和未知雜質(zhì)的區(qū)別控制，進一步提高有關(guān)物質(zhì)測定項目的科學(xué)性和合理性。雜質(zhì)檢測的方法學(xué)驗證主要包括專屬性、檢測限、溶液穩(wěn)定性、耐用性等定性試驗以及線性、準(zhǔn)確度、精密度等定量試驗，從不同角度、層面驗證分析方法的可行性和雜質(zhì)檢出的可靠性。近年來，色譜法在各國藥典中得到了廣泛應(yīng)用，其中有關(guān)物質(zhì)分析方法的主流還屬高效液相色譜技術(shù)。Wang等采用HPLC法定量測定艾普拉唑片有關(guān)物質(zhì)，并進行方法學(xué)驗證。HPLC測定有關(guān)物質(zhì)的定量方法主要有雜質(zhì)對照品法(外標(biāo)法)、加校正因子和不加校正因子的主成分自身對照法以及面積歸一化法。朱靜毅等建立了HPLC加校正因子的主成分自身對照法測定非洛地平及其片劑中3個有關(guān)物質(zhì)的含量，其校正因子分別為1.96、0.96和1.06，方法學(xué)驗證表明所建立的方法符合要求，加校正因子的主成分自身對照法與雜質(zhì)對照品法測定的結(jié)果無顯著性差異。

4.2 其他

復(fù)方制劑中各主藥的結(jié)構(gòu)千差萬別，其穩(wěn)定性亦不盡相同，在經(jīng)過嚴格的實驗驗證或有明確的文獻資料支持下，可將雜質(zhì)研究的重點轉(zhuǎn)移到不穩(wěn)定的主藥上。

復(fù)方制劑中若各主藥含量相差較大，但穩(wěn)定性均較好，可主要針對含量較大的主藥進行雜質(zhì)研究。但應(yīng)有明確的試驗或文獻支持含量較小組分不會產(chǎn)生毒性雜質(zhì)。若可能產(chǎn)生毒性雜質(zhì)，對毒性雜質(zhì)應(yīng)采用雜質(zhì)對照品法進行研究控制。對雙層或多層片但不同片層僅含單一組分的復(fù)方片劑，或含有多種色澤顆粒且不同色澤顆粒僅含單一組分的復(fù)方膠囊劑等，如能采用簡單的方法(如切開不同片層、將不同色澤顆粒分開等)將不同主藥組分簡單分離，則可參照各主藥單方制劑的雜質(zhì)研究方法分別進行研究[2]。

5 結(jié)語

藥物雜質(zhì)研究是藥品研究的重要方面，雜質(zhì)研究貫穿于整個藥品研究的始終。藥品中的雜質(zhì)是否能得到合理、有效的控制，直接關(guān)系到藥品的質(zhì)量可控性與安全性。雜質(zhì)研究應(yīng)重點關(guān)注以下方面：①雜質(zhì)檢測方法的選擇與驗證。②研究過程中所有批次的樣品，包括各種生產(chǎn)規(guī)模的樣品中的雜質(zhì)完整的記錄，這些數(shù)據(jù)將是制訂雜質(zhì)限度的重要依據(jù)。③在確定雜質(zhì)的限度時，一定要綜合考慮雜質(zhì)的安全性、生產(chǎn)的可行性與產(chǎn)品的穩(wěn)定性。