葛文品 楊艷麗 朱濤,3 李鶴 王靜 楊俊 鄧欣雨

(1.重慶三峽醫(yī)藥高等專(zhuān)科學(xué)校，重慶 404120；2.重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院呼吸內(nèi)科，重慶 404000； 3.南方醫(yī)科大學(xué)珠江醫(yī)院呼吸內(nèi)科，廣東 廣州 510280)

支氣管哮喘(簡(jiǎn)稱(chēng)哮喘)是最常見(jiàn)的呼吸系統(tǒng)疾病之一，流行病學(xué)研究顯示，全球哮喘的發(fā)病率約為1%～18%，中國(guó)哮喘的發(fā)病率約為1%～5%[1-3]。雖然全球支氣管哮喘防治創(chuàng)議(Global Initiative for Asthma, GINA)已逐步推廣，且臨床醫(yī)生及患者對(duì)于哮喘的認(rèn)識(shí)較前已有明顯提高，但哮喘患者的臨床控制率仍然較低，且患者急診住院率及病死率未有明顯下降[1-3]。由于非特異性慢性氣道炎癥是哮喘病理生理的核心，故抗炎治療已成為哮喘治療的基石。目前研究認(rèn)為，細(xì)辛腦注射液(Asarone injection)具有較強(qiáng)的抗炎癥反應(yīng)活性，在我國(guó)廣泛應(yīng)用于2型糖尿病、社區(qū)獲得性肺炎、慢性阻塞性肺疾病、急性支氣管炎及哮喘等疾病的治療[4-7]。本臨床研究的目的是觀察細(xì)辛腦注射液治療對(duì)成年哮喘急性發(fā)作期患者氣道炎癥水平、肺功能及FeNO的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料 按照診斷標(biāo)準(zhǔn)[8]，將2013年3月～2017年10月在重慶醫(yī)藥高等專(zhuān)科學(xué)校附院和重慶醫(yī)科大學(xué)附屬二院住院的80例中到重度成年急性發(fā)作期支氣管哮喘患者，根據(jù)隨機(jī)數(shù)字表法分為對(duì)照組和觀察組各40例。對(duì)照組中男性18例，女性22例，平均年齡(53.1±22.4)歲；觀察組中男性19例，女性21例，平均年齡(55.6±20.4)歲。支氣管哮喘病史皆>5年。兩組患者的年齡、病程和病情等比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 治療方法 兩組患者均給予吸氧、支氣管舒張劑及白三烯調(diào)節(jié)劑等常規(guī)治療，并以布地奈德1mg (普米克令舒，英國(guó)阿斯利康)加生理鹽水2ml霧化吸入，2次/d。觀察組在常規(guī)治療的基礎(chǔ)上給予細(xì)辛腦注射液(桂林南藥股份有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字：H45021202)24 mg加入5 %葡萄糖溶液250 ml中靜脈滴注，3次/d。在治療過(guò)程中未出現(xiàn)過(guò)敏和藥物熱等嚴(yán)重不良反應(yīng)。

1.3 肺功能檢測(cè) 兩組均于治療前及治療7d后進(jìn)行肺功能測(cè)定：吸入200 μg沙丁胺醇15 min后測(cè)定FEV1占預(yù)計(jì)值%和PEF個(gè)人最佳值%。

1.4 呼出氣一氧化氮(FeNO) 兩組均于治療前及治療7d后使用FeNO測(cè)試儀(Nioxmino, Aerocine AB Solna, 瑞典)進(jìn)行FeNO測(cè)定。

1.5 血中IL-4、IL-5和IL-13水平檢測(cè) 取患者治療前與治療7d后清晨空腹靜脈血，根據(jù)ELISA試劑盒(R&D Systems, USA)說(shuō)明書(shū)方法，對(duì)血中IL-4、IL-5和IL-13水平進(jìn)行檢測(cè)。

1.6 血淋巴細(xì)胞中STAT6水平檢測(cè) 取患者治療前與治療7d后清晨空腹靜脈血，按照試劑盒操作要求，首先提取血淋巴細(xì)胞總蛋白，并進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)，然后轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素濾膜上，用脫脂奶粉封閉1h，分別加入鼠抗人單克隆抗體anti-STAT6 (1: 900)和anti-β-actin (1: 900)，4 °C孵育過(guò)夜，洗膜后加入相應(yīng)的辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的二抗(1:1000)，用ECL進(jìn)行顯色，用凝膠成像分析系統(tǒng)進(jìn)行掃描。使用STAT6/β-actin條帶灰度比值作為STAT6的相對(duì)表達(dá)量[9-10]。

2 結(jié)果

2.1 治療前后FEV1占預(yù)計(jì)值%、PEF個(gè)人最佳值%和FeNO的比較 經(jīng)7d治療后，兩組患者FEV1占預(yù)計(jì)值%、PEF個(gè)人最佳值%和FeNO較治療前均有明顯改善，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；且觀察組較對(duì)照組改善更加顯著，差異亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表1。

表1 FEV1占預(yù)計(jì)值%、PEF個(gè)人最佳值%和FeNO比較Table 1 FEV1%, PEF% and FeNO in the two group

注：治療前比較，①P<0.05；與對(duì)照組對(duì)應(yīng)時(shí)間點(diǎn)比較，②P<0.05

2.2 外周血中IL-4、IL-5和IL-13水平測(cè)定結(jié)果比較 通過(guò)7d治療后，兩組患者血中IL-4、IL-5和IL-13水平均較治療前明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)；且觀察組患者下降更加顯著，差異亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)，見(jiàn)表2。

2.3 外周血淋巴細(xì)胞STAT6表達(dá)水平比較 通過(guò)7d治療后，兩組患者血淋巴細(xì)胞中STAT6/β-actin比值均較治療前明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；且觀察組患者STAT6/β-actin比值下降更加顯著，差異亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)，見(jiàn)表3、圖1。

表2 外周血中IL-4、IL-5和IL-13水平Table 2 The serum levels of IL-4, IL-5 and IL-13 in the two groups

注：與治療前比較，①P<0.05；與對(duì)照組對(duì)應(yīng)時(shí)間點(diǎn)比較，②P<0.05

表3 血淋巴細(xì)胞中STAT6蛋白表達(dá)量比較Table 3 The ratio of STAT6/β-actin in blood lymphocytes

注：與治療前比較，①P<0.05；與對(duì)照組對(duì)應(yīng)時(shí)間點(diǎn)比較，②P<0.05

圖1 血淋巴細(xì)胞中STAT6表達(dá)水平Figure 1 The protein expression of STAT6 in blood lymphocytes

3 討論

支氣管哮喘(bronchial asthma)是一種以可逆性氣流受限為主要病理生理特征的慢性氣道炎癥性疾病，目前推測(cè)全球不同地區(qū)的發(fā)病率為1%～18%左右，流行病學(xué)調(diào)查研顯示，我國(guó)哮喘的發(fā)病率約為5%左右，患病人數(shù)約為2000～3000萬(wàn)人[1, 8]，但與之相對(duì)的是，哮喘患者控制率卻并不令人滿(mǎn)意。

目前研究證實(shí)，控制氣道炎癥是治療哮喘的關(guān)鍵，尋求新的控制哮喘相關(guān)的氣道炎癥反應(yīng)的藥物將對(duì)于哮喘的治療具有重要的價(jià)值和意義[11]。α-細(xì)辛腦(α-asarone)，化學(xué)名為反式-2,4,5-三甲氧基-1-丙烯苯，是中草藥石菖蒲的主要生物活性成分，研究發(fā)現(xiàn)其具有較強(qiáng)的抗炎和抗過(guò)敏等藥理活性[12]。目前其成藥細(xì)辛腦注射液及細(xì)辛腦膠囊已廣泛應(yīng)用于成人及兒童的社區(qū)獲得性肺炎、毛細(xì)支氣管炎、支氣管哮喘和慢性阻塞性肺疾病等的臨床治療[4-7]。葉青等人的研究發(fā)現(xiàn)，細(xì)辛腦注射液輔助治療可有效改善慢性阻塞性肺疾病急性加重期患者的臨床癥狀、二氧化碳潴留以及降低患者血清降鈣素原(PCT)和C-反應(yīng)蛋白(CRP)水平[4]。張淳等的研究證實(shí)，細(xì)辛腦注射液聯(lián)合可必特霧化對(duì)于兒童毛細(xì)支氣管炎具有輔助治療價(jià)值，可以減少患兒的住院時(shí)間[5]。朱建勇等對(duì)細(xì)辛腦注射液在哮喘治療中的價(jià)值進(jìn)行了初步探討，結(jié)果顯示細(xì)辛腦注射液可有效改善哮喘急性發(fā)作期患者的肺功能，但并未對(duì)其機(jī)制進(jìn)行進(jìn)一步探討[7]。本研究結(jié)果顯示，在干預(yù)7d后,兩組患者肺功能指標(biāo)FEV1占預(yù)計(jì)值%和PEF個(gè)人最佳值%較治療前均明顯改善，且觀察組的FEV1占預(yù)計(jì)值%和PEF個(gè)人最佳值%改善更加明顯。FeNO是評(píng)估哮喘氣道炎癥反應(yīng)的檢測(cè)手段，由于其操作簡(jiǎn)單、無(wú)創(chuàng)、安全性高、重復(fù)性佳等原因，現(xiàn)已成為臨床上評(píng)估哮喘控制水平的重要檢測(cè)[13-14]。本研究還顯示，在干預(yù)7d后，兩組患者FeNO水平較治療前均明顯下降，且觀察組FeNO下降水平更加明顯，提示細(xì)辛腦注射液具有擴(kuò)張支氣管、改善肺功能、抑制氣道炎癥反應(yīng)的作用。

進(jìn)一步的研究顯示，Th2淋巴細(xì)胞的過(guò)度活化及釋放的Th2相關(guān)性細(xì)胞因子如IL-4、IL-5和IL-13等，是導(dǎo)致哮喘發(fā)生和發(fā)展的重要原因[2, 11]。肺組織中IL-4、IL-5和IL-13的過(guò)度合成與釋放可誘導(dǎo)肥大細(xì)胞(Mast cells)的激活和脫顆粒導(dǎo)致氣道內(nèi)組胺(Histamine)水平升高，氣道平滑肌痙攣，同時(shí)誘導(dǎo)血管通透性，增加氣道周?chē)[；另一方面Th2相關(guān)性細(xì)胞因子還可趨化嗜酸性粒細(xì)胞(Eosinophils)和巨噬細(xì)胞(Macrophages)等炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)；同時(shí)IL-4、IL-5和IL-13對(duì)漿細(xì)胞(Plasma cells)產(chǎn)生IgE具有重要的調(diào)控作用；且IL-4和IL-13還是誘導(dǎo)氣道假?gòu)?fù)層纖毛柱狀上皮(Airway pseudostratified ciliated columnar epithelium)化生(Metaplasia)為杯狀細(xì)胞(Goblet cells)的關(guān)鍵因素，后者是導(dǎo)致氣道粘液過(guò)度分泌阻塞小氣道的根本原因[2-3, 11]。有研究證實(shí)，抑制IL-4、IL-5和IL-13的表達(dá)與釋放，可明顯改善哮喘的氣道炎癥水平及哮喘患者的控制水平[15-16]。我們對(duì)哮喘患者血中IL-4、IL-5和IL-13的表達(dá)使用ELISA進(jìn)行檢測(cè)后發(fā)現(xiàn)，治療7d后，兩組患者血中IL-4、IL-5和IL-13水平均明顯下降，患者血中IL-4、IL-5和IL-13水平較對(duì)照組降低更加明顯。大量基礎(chǔ)研究證實(shí)，信號(hào)傳導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子6 (Signal transducer and activator of transcription 6, STAT6)是Th0淋巴細(xì)胞向Th2淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的關(guān)鍵核轉(zhuǎn)錄因子，抑制STAT6的表達(dá)可以有效減少Th2淋巴細(xì)胞的分化及數(shù)量，同時(shí)減少I(mǎi)L-4、IL-5和IL-13水平[17-20]。本研究中我們使用western blot對(duì)血淋巴細(xì)胞STAT6的表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)后發(fā)現(xiàn)，通過(guò)7d治療后，兩組患者血淋巴細(xì)胞中STAT6/β-actin比值均較治療前明顯下降，且觀察組STAT6/β-actin比值下降更加顯著。該結(jié)果表明，細(xì)辛腦注射液對(duì)于哮喘氣道炎癥的改善作用與抑制Th0淋巴細(xì)胞向Th2淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化及Th2相關(guān)性細(xì)胞因子釋放密切相關(guān)。但仍需基礎(chǔ)和臨床研究進(jìn)一步證明該結(jié)論。

4 結(jié)論

本研究結(jié)果顯示，細(xì)辛腦注射液可以通過(guò)抑制Th0淋巴細(xì)胞向Th2淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化下調(diào)支氣管哮喘急性發(fā)作期的氣道炎癥水平，改善患者的肺功能。同時(shí)為細(xì)辛腦注射液廣泛應(yīng)用于支氣管哮喘的治療奠定了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。由于該臨床實(shí)驗(yàn)觀察時(shí)間較短，且入選人數(shù)規(guī)模較少，仍需要多中心和隨機(jī)的臨床對(duì)照研究進(jìn)一步證實(shí)細(xì)辛腦注射液在哮喘治療中的作用和意義。