陳凌云 陳坤 王華寧

摘要：目的 建立復(fù)方扶正養(yǎng)肝顆粒的定性鑒別方法。方法 采用薄層色譜法對(duì)處方茵陳、白芍、郁金、甘草進(jìn)行定性鑒別。結(jié)果 薄層鑒別色譜斑點(diǎn)清晰、專(zhuān)屬性強(qiáng)，陰性對(duì)照無(wú)干擾。結(jié)論 該方法專(zhuān)屬性強(qiáng)、重現(xiàn)性好、操作簡(jiǎn)便，可用于復(fù)方扶正養(yǎng)肝顆粒的定性鑒別。

關(guān)鍵詞：復(fù)方扶正養(yǎng)肝顆粒;薄層鑒別;茵陳;白芍;郁金;甘草

中圖分類(lèi)號(hào)：R286.0 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1007-2349（2018）08-0075-03

扶正養(yǎng)肝湯由黃芪、白術(shù)、柴胡、白芍、土茯苓等11味藥物組成，具有扶正固本，清熱利濕、解毒化濁之功效。該方為云南省中醫(yī)醫(yī)院脾胃病科用于治療病毒性肝炎的協(xié)定處方，前期臨床及實(shí)驗(yàn)研究表明，扶正養(yǎng)肝方對(duì)病毒性肝炎患者肝功能具有較好改善作用，明顯降低Con A誘導(dǎo)免疫性肝損傷模型小鼠血清ALT和AST，下調(diào)細(xì)胞因子IFN-γ表達(dá)[1-2]，其作用機(jī)制可能與下調(diào)Fas mRNA基因表達(dá)，抑制肝細(xì)胞凋亡有關(guān)[3]。該方原為湯劑，為使患者服用方便，便于攜帶，本研究擬將其開(kāi)發(fā)成醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑。為更好的對(duì)該制劑進(jìn)行質(zhì)量控制，本研究采用薄層色譜法，建立了扶正養(yǎng)肝顆粒中茵陳、白芍、郁金、甘草的薄層鑒別方法，為扶正養(yǎng)肝的的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的完善、充實(shí)提供了依據(jù)。

1 儀器與試藥

KMDOS-SK250H超聲儀（上海科導(dǎo)超聲儀器有限公司），SartoriusBT25S電子分析天平（Xs25A瑞士普利賽斯儀器公司，d=0.00001 g）;雙槽展開(kāi)缸（20cm × 10cm）;硅膠G薄層板;茵陳對(duì)照藥材（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：120950-201608）;白芍對(duì)照藥材（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：120905-201109）;郁金對(duì)照藥材（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：120949-201407）;甘草對(duì)照藥材（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：120904-201519）;院內(nèi)自制扶正養(yǎng)肝顆粒（編號(hào)：20170801、20170802、20170803）。

2 方法與結(jié)果

2.1 茵陳薄層鑒別[4-5] 取本品粉末5 g，加石油醚30 mL，超聲處理10 min，濾過(guò)，棄去石油醚，藥渣揮干，加稀鹽酸1 mL與乙酸乙酯30 mL，超聲處理30 min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)? mL甲醇溶解，作為供試品溶液。另取茵陳對(duì)照藥材2 g及缺茵陳藥材的陰性對(duì)照樣品5 g，同法制成對(duì)照藥材溶液及陰性對(duì)照溶液。照薄層色譜法（《中國(guó)藥典》2015年版四部通則0502）試驗(yàn)，吸取陰性對(duì)照溶液和供試品溶液各20 μL，對(duì)照品溶液4 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-氯仿-丙酮（40：75：25）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，氨熏后置紫外光燈（365 nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的顏色斑點(diǎn)，且陰性無(wú)干擾。結(jié)果見(jiàn)圖1。

1.陰性對(duì)照;2.茵陳對(duì)照藥材;3.扶正養(yǎng)肝顆粒 20170801;4.扶正養(yǎng)肝顆粒 20170802;5.扶正養(yǎng)肝顆粒 20170803;吸附劑：硅膠G;展開(kāi)劑：甲苯-氯仿-丙酮（40：75：25）;顯色方法：氨熏;檢視條件：紫外燈下365nm

圖1 郁金TLC色譜圖

2.2 白芍薄層鑒別[6-8] 取本品粉末5 g，加乙醇25 mL，振搖5 min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)右掖? mL使溶解，作為供試品溶液。另取白芍對(duì)照藥材1 g，同法制成對(duì)照藥材溶液。再取陰性樣品5 g，同法制成陰性對(duì)照品溶液。照薄層色譜法（《中國(guó)藥典》2015版四部附錄0502）試驗(yàn)，吸取上述3種溶液各2 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（40：5：10：0.2）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的顏色斑點(diǎn)，且陰性無(wú)干擾。結(jié)果見(jiàn)圖2。

1.白芍對(duì)照藥材;2.扶正養(yǎng)肝顆粒 20170801;3.扶正養(yǎng)肝顆粒 20170802;4.扶正養(yǎng)肝顆粒 20170803;5.陰性對(duì)照;吸附劑：硅膠G板;展開(kāi)劑：三氯甲烷：乙酸乙酯：甲醇：甲酸（40：5：10：0.2）;顯色條件：5%香草醛硫酸溶液;檢視條件：日光

圖2 白芍TLC色譜圖

2.3 郁金薄層鑒別[9-10] 取本品粉末5 g，加石油醚（60-90℃）50 mL，超聲10 min，過(guò)濾，濾液揮干，殘?jiān)蛹状?mL使

1.郁金對(duì)照藥材;2.扶正養(yǎng)肝顆粒 20170801;3.扶正養(yǎng)肝顆粒 20170802;4.扶正養(yǎng)肝顆粒 20170803;5.陰性對(duì)照;吸附劑：硅膠G板;展開(kāi)劑：石油醚（60-90℃）-乙酸乙酯（9：1）;顯色條件：10%硫酸乙醇溶液;檢視條件：紫外燈下365nm

圖3 郁金TLC色譜圖

溶解，作為供試品溶液。另取郁金藥材2 g，加石油醚（60-90℃）20 mL，同法制成對(duì)照藥材溶液。再取陰性樣品5 g，同法制成陰性對(duì)照品溶液。照薄層色譜法（《中國(guó)藥典》2015版四部附錄0502）試驗(yàn)，吸取對(duì)照品溶液20 μL、供試品溶液和陰性對(duì)照溶液各10μL，點(diǎn)于同一硅膠G板上，以石油醚（60-90℃）-乙酸乙酯（9：1）為展開(kāi)劑，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置紫外燈（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的顏色斑點(diǎn)，陰性無(wú)干擾。結(jié)果見(jiàn)圖3。

2.4 甘草薄層鑒別[11] 取本品粉末1 g，加乙醚40 mL，加熱回流1 h，濾過(guò)，棄去醚液，藥渣加甲醇30 mL，加熱回流1 h，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0 mL使溶解，用正丁醇提取3次，每次20 mL，合并正丁醇液，用水洗滌3次，棄去水液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状?mL使溶解，作為供試品溶液。另取甘草對(duì)照藥材lg，同法制成對(duì)照藥材溶液。再取陰性樣品1 g，同法制得為陰性對(duì)照溶液。照薄層色譜法（《中國(guó)藥典》2015版四部附錄0502）試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各4μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水（15：1：1：2）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色淸晰，置紫外光燈（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的顏色熒光斑點(diǎn)，且陰性對(duì)照無(wú)干擾。

1.甘草對(duì)照藥材;2.扶正養(yǎng)肝顆粒 20170801;3.扶正養(yǎng)肝顆粒 20170802;4.扶正養(yǎng)肝顆粒 20170803;5.陰性對(duì)照;吸附劑：硅膠G板;展開(kāi)劑：乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水（15：1：1：2）;顯色條件：10%硫酸乙醇溶液;檢視條件：紫外燈下365nm

圖4 甘草TLC色譜圖

3 討論

本品由黃芪、茵陳、牡丹皮、土茯苓等11味藥組成，成分較為復(fù)雜，本次質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究中對(duì)黃芪、茵陳、牡丹皮、土茯苓、垂盆草、甘草、郁金、丹參、薏苡仁、牡丹皮等10味藥的TLC鑒別方法進(jìn)行了研究，其中垂盆草、丹參、牡丹皮、薏苡仁、土茯苓未能找到合適的TLC鑒別方法，而黃芪因測(cè)定了其含量，因此，選取了茵陳、白芍、郁金、甘草4味藥的進(jìn)行TLC鑒別。在茵陳的薄層鑒別中，先后采用乙酸乙酯-甲酸-水（16：3：6）、甲苯-醋酸乙酯-甲酸（10：3：0.2）、石油醚（60-90℃）-乙酸乙酯-丙酮（6：3：0.5）為展開(kāi)系統(tǒng)，但結(jié)果顯色供試品斑點(diǎn)不明顯且不清晰，或陰性有干擾，經(jīng)摸索，用調(diào)整后的方法結(jié)果斑點(diǎn)清晰、重復(fù)性好。

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（收稿日期：2018-03-19）