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        豬冷凍精液技術(shù)的應(yīng)用實踐與探索研究

        2018-11-22 03:41:32周先前張全生余群蓮
        豬業(yè)科學 2018年10期

        周先前,張全生,余群蓮

        (重慶農(nóng)投肉食品有限公司,重慶 401120)

        1 豬冷凍精液應(yīng)用的意義

        我國多年來主要依賴于國外引種,活體引種帶來多種疾病和成本的提高等諸多問題,隨著我國種豬聯(lián)合育種和地方品種培育工作的深入開展,豬的冷凍精液技術(shù)研究越來越顯得迫切,對豬冷凍精液的研究發(fā)展也很快,各地很多豬場都在探索應(yīng)用。由于凍精可以使優(yōu)良基因得到長期的保存,延長公豬使用年限,而不受該公豬死亡、損失、采精間隔或繁殖不育的限制,有利于人為地使用高性能水平的種公豬與較多數(shù)量的母豬配種,獲得更大的遺傳進展。引進國內(nèi)外高性能公豬凍精取代活體公豬的引進,使種豬選擇擴大到較大范圍各群體,不受時間和地理位置差異的限制,不但可降低育種成本,穩(wěn)定的遺傳發(fā)展,也是生物安全的保障。

        2 應(yīng)用材料與方法

        2.1 材料

        1)第一批凍精選購,2016年1月從英國選購優(yōu)質(zhì)英系凍精150頭份,公豬血緣4個,細管規(guī)格0.25 mL,每頭份10劑,精子活力50%以上,畸形率在20%以下,英國專家現(xiàn)場指導,4月開始隨機挑選英系母豬輸精。

        2)第二批凍精選購,2017年7月從加拿大選購凍精100頭份,3個公豬血緣,細管規(guī)格0.25 mL,每頭份10劑,精子活力50%以上,畸形率在20%以下。

        3)第三批凍精選購,2017年8月引進加系優(yōu)質(zhì)的凍精230頭份,8個優(yōu)質(zhì)血緣。細管規(guī)格0.25 mL,每頭份10劑,精子活力50%以上,畸形率在20%以下;此次選擇第二胎次的優(yōu)質(zhì)加系母豬作為輸精對象。

        2.2 凍精解凍方法

        豬精子結(jié)構(gòu)的特殊性使其對溫度變化特別敏感,在凍精解凍過程中極易受到損傷,不僅是導致豬冷凍精液的生產(chǎn)難度大、操作程序復雜,而且解凍過程必然十分精細,極大地限制了豬冷凍精液的推廣與應(yīng)用。為此我們探索了幾種解凍方法。

        2.2.1 英國凍精解凍方法

        1)實驗室室溫調(diào)到26 ℃;

        2)選擇公豬,確定1頭份量的精液;

        3)準備水浴鍋,加溫到37 ℃;

        4)準備好新鮮稀釋液,把準備好的稀釋液放在水浴鍋里至少1 h;

        5)在輸精瓶里加60 mL稀釋液;

        6)確定你需要的精液的位置;

        7)提起液氮罐里的存儲格,使用鑷子取出需要的精液(一次一個);

        8)把3只精液管放在水浴鍋里,解凍;

        9)把凍精液存儲格放回液氮罐,蓋好;

        10)3 min后取出精液管,使用干凈紙巾擦干;

        11)檢查凍精管上的公豬號,別搞錯公豬了;

        12)搖動,把氣泡趕到密封口一端(棉花一端);

        13)在棉花端剪開(使用干燥,消過毒的剪刀);

        14)把一端放到37 ℃的輸精瓶里;

        15)在37 ℃的輸精瓶里剪開精液管另一端,把精液吹入已經(jīng)加溫到37 ℃的輸精瓶;

        16)重復第7步,直到獲得1頭份精液;

        17)把輸精瓶放水浴鍋里30 min;

        18)取出輸精瓶后30 min內(nèi)給母豬配種;

        19)12 h后重復該動作;

        20)注意事項:第一是解凍過程需要約2 h,所以,在母豬最佳輸精時間開始前2 h進行;第二是評估解凍精液的活力,使用前,取出一滴精液,在預(yù)溫到35~38 ℃的玻璃片上鏡檢,檢查其精液活力情況。

        2.2.2 加系凍精解凍方法

        1)實驗室室溫調(diào)到26 ℃;

        2)解凍并恒溫稀釋液為36 ℃(水浴鍋調(diào)到36 ℃并用溫度計進行校準,因為有的水浴鍋的溫度不準);

        3)打開第二個水浴鍋,調(diào)到整50 ℃(解凍精液細管用)。也可以用保溫杯(采精杯)來代替,用溫度計調(diào)到50 ℃;

        4)打開顯微鏡,準備載波片和蓋波片,待檢測精子活力;

        5)待稀釋液恒溫36 ℃,解凍水溫到整50 ℃;

        6) 打開液氮罐蓋;

        7)看準標簽,找到需要配種的品種豬號;

        8)拉動精液細繩,拉出精液包(注:精液包不能高于液氮灌口);

        9)快速熟練地解開精液包,拿出精液細管,將精液細管快速放到50 ℃水里,并同步打開秒表,計時16 s。同時用棍棒把精液包捅到液氮面下方。注:精液細管放到50 ℃水里,不漂浮,不粘連,不起霜;

        10)計時16 s到,拿出精液細管,并擦干;

        11)剪開精液細管空氣端,大概1 cm;

        12)用精液杵棒,杵棉塞端將精液杵進稀釋液;

        13)輕輕搖勻(動作不能太激烈);

        14)均勻取樣(精液瓶中下端);

        15)檢測精液活力;

        16)合格后,馬上配合深部輸精管去配種。

        圖1 精液自動檢測

        2.2.3 加拿大加系凍精解凍方法

        1)實驗室室溫調(diào)到26 ℃;

        2)在自動恒溫36 ℃的解凍杯里注滿蒸餾水并連接打開電源,加溫30 min以上;

        3)按1頭份稀釋液/(60 mL蒸餾水,3 G營養(yǎng)粉),準備好稀釋液,將準備好的稀釋液放入26 ℃的水浴鍋中,加溫40 min以上;

        4)將備用的輸精空瓶放在26 ℃的水浴鍋里預(yù)溫30 min,注意不要污染輸精瓶;

        5)將中轉(zhuǎn)杯(2升保溫杯)倒入三分之一的液氮,備用;

        6)打開液氮罐,選擇需要的公豬耳號,用鑷子取出1頭份量(8支)的精液,放入中轉(zhuǎn)杯中,蓋好液氮罐。取的過程中要核查公豬耳號,避免搞錯;

        7)從中轉(zhuǎn)杯中取2支精液放入36 ℃的自動恒溫解凍杯中,靜置20 s,取出,用干凈紙巾擦拭干凈;

        8)晃動精液管,把氣泡趕到密封口的一端(金屬球一端),用干凈的剪刀在金屬球下端剪開;

        9)將剪開端放入(注意不要與輸精瓶接觸)經(jīng)過26 ℃預(yù)溫的輸精瓶里,用專用的金屬棒捅管子的棉球,擠出精液,流入輸精瓶里;

        10)重復7-9步驟,直到獲得1頭份精液的量,向有精液的輸精瓶里倒入準備好并預(yù)溫26 ℃的稀釋液60 mL,并蓋好瓶蓋,在瓶身上寫好公豬耳號。在30 min內(nèi)進行配種為佳;

        11)將解凍好的精液瓶放入37 ℃的水浴鍋里放置15~30 min,進行精子復蘇;

        12)檢查精子活力:取出經(jīng)過復蘇的精液,取1滴精液,放在37 ℃的恒溫載物臺上,在精子密度儀上檢查活力;

        13)在從液氮罐中取精液的過程中,注意佩戴防護用具,避免凍傷。

        表1 精液自動分析情況

        2.3 精子活力雜透明度情況分析

        公豬精液稀釋后,檢查精子活力,取1滴精液,放在37 ℃的恒溫載物臺上,在精子密度儀上檢查活力情況。

        2.3.1 精液自動分析情況

        2.3.2 精液自動檢測圖片

        2.4 輸精方法的研究

        豬的凍精輸精方法有子宮頸輸精法、子宮輸精法和輸卵管輸精法;我們采用了前2種深部輸精法,稀釋液的選用按凍精要求自配稀釋液進行配制。

        2.4.1 內(nèi)軟噴管深部子宮頸輸精方法

        1)凍精解凍稀釋的精液在1 h內(nèi)必須使用;

        2)輸精前的準備和常規(guī)輸精法一樣;

        3)將深部輸精管頭插入子宮頸處鎖住,輸精時采用爆發(fā)力擠壓精液瓶進行輸精;

        4)輸精時圖片(見圖2)。

        圖2 輸精

        2.4.2 內(nèi)硬細管深部子宮體輸精方法

        1)凍精解凍稀釋的精液在1 h內(nèi)必須使用;

        2)輸精前的準備和常規(guī)輸精法一樣;

        3)將深部輸精管橡皮軟頭插入子宮體處,輸精時采用緩慢擠壓內(nèi)吸方式進行輸精;

        4)輸精時圖片(見圖3)。

        以上2種深部輸精法都可用,效果都較好。

        圖3 輸精

        3 結(jié)論與效益分析

        凍精可以使優(yōu)良基因得到無限期的保存(如本地豬種或優(yōu)良種豬資源保護),延長優(yōu)良公豬不受該公豬死亡、損傷、采精間隔或繁殖不育的限制,有利于人為使用高性能水平的優(yōu)良種公豬與較多數(shù)量的母豬配種,獲得更大的遺傳進展。

        3.1 凍精記錄情況

        3.1.1 配種產(chǎn)仔情況

        1)英系凍精共配種45頭,分娩5窩,總產(chǎn)仔數(shù)為25頭,其中產(chǎn)活仔數(shù)為20頭,死胎3頭,畸胎2頭,平均窩產(chǎn)仔數(shù)5頭,窩產(chǎn)活仔數(shù)為4頭,產(chǎn)活仔率為80%。

        2)加系凍精共配種26 頭,分娩19 窩,總產(chǎn)仔數(shù)為160頭,其中產(chǎn)活仔數(shù)為155頭,死胎5頭,畸胎0頭,平均窩產(chǎn)仔數(shù)8.42頭,窩產(chǎn)活仔數(shù)為8.16 頭,產(chǎn)活仔率為 96.88%。

        3)加拿大凍精共配種49頭,分娩29窩,總產(chǎn)仔數(shù)為203頭,其中產(chǎn)活仔數(shù)為194頭,死胎9頭,畸胎0頭,平均窩產(chǎn)仔數(shù)7頭,窩產(chǎn)活仔數(shù)為6.69頭,產(chǎn)活仔率為 95.57%。

        3.1.2 仔豬初生重高床豬舍53頭母豬總產(chǎn)活仔數(shù)369頭,仔豬總重為557kg,平均窩重10.51 kg,平均每頭重為1.51 kg。

        3.1.3 育成仔豬數(shù)

        到目前為此,仔豬23天斷奶計,高床豬舍有6 頭患有腹瀉情況,意外壓死4 頭,369頭總產(chǎn)活仔中總育成仔豬365頭,平均窩育成仔數(shù)6.89頭,育成率98.92%。

        3.1.4 斷奶窩重

        高床豬舍斷奶活仔365頭,仔豬總重量2829 kg,平均窩重53.38 kg,每頭仔豬 7.75 kg。

        3.2 結(jié)論與效益分析情況

        1)凍精可以使優(yōu)良基因得到無限期的保存(如本地豬種或優(yōu)良種豬資源保護),延長公豬使用年限,而不受該優(yōu)良公豬的死亡、損傷、采精間隔或繁殖不育的限制,有利于人為使用高性能水平的種公豬與較多數(shù)量的母豬配種,從而獲得更大的遺傳進展;

        2)優(yōu)良種豬選擇擴大到世界范圍成為可能,不受時間或地理位置差異的限制,引進國外高性能公豬凍精取代進行活體引進公豬,可節(jié)省部分資金的支出;

        3)凍精有利于人工授精體系的完善,公豬冷凍精液可以在后裔測定或疾病檢測后才開始大量應(yīng)用,為穩(wěn)定的遺傳進展和嚴格的生物安全提供額外保障。從生物安全及健康角度考慮,凍精為疾病檢測提供了足夠的時間,凍精還為大型的人工授精站暴發(fā)疾病時提供了穩(wěn)定的精液應(yīng)急供應(yīng)保障;

        4)提升效益:可助力養(yǎng)殖場繁殖性能提升30%以上的遺傳效益,將有助于中國豬產(chǎn)業(yè)高效持續(xù)健康發(fā)展;

        5)降低成本:可降低養(yǎng)殖場80%左右的引種及飼養(yǎng)成本;

        6)方便運輸:更方便企業(yè)優(yōu)質(zhì)基因的運輸、儲存和使用;

        7)數(shù)量相當:凍精產(chǎn)品有可能達到鮮精的分娩率及產(chǎn)仔數(shù)水平,最高窩產(chǎn)活仔17頭,凍精和鮮精有可能數(shù)量相當;

        8)有利于種豬的保種、育種,破解鮮精制約性瓶頸;

        9)助力擴繁:助力擴繁場和商品場的種豬永遠在高起點的基因軌道上騰飛。

        總之,開展豬的冷凍精液技術(shù)研究和應(yīng)用,對養(yǎng)殖業(yè)種豬聯(lián)合育種工作和地方豬種資源保護將具有較大的經(jīng)濟效益和積極的社會意義。

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