牛德料，周緒斌

（天康生物股份有限公司，北京 豐臺 100161）

豬圓環(huán)病毒（PCV）是迄今發(fā)現(xiàn)最小的一種動物病毒，現(xiàn)已知PCV有2個血清型，即PCV1和PCV2，PCV1為非致病性的病毒；PCV2為致病性的病毒。PCV2可引起斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征（PMWS）、皮炎腎病綜合征、增生性壞死性肺炎、仔豬先天性震顫等多種疾病，同時PCV2還可使豬群產(chǎn)生嚴重的免疫抑制，臨床上以PMWS 最為常見，PMWS最早發(fā)現(xiàn)于加拿大（1991年）。由于PCV2在豬群中廣泛存在及疫苗的大量使用，如果單純檢測PCV2 IgG血清抗體無法判斷是疫苗抗體還是野毒感染，所以根據(jù)血清學變化規(guī)律同時檢測PCV2 IgM/IgG抗體并結(jié)合免疫時間進行綜合判斷疫苗免疫效果。

1 豬場基本情況

本場基礎母豬1200頭，自繁自養(yǎng)，使用國內(nèi)某企業(yè)生產(chǎn)的豬PCV-2全病毒滅活疫苗對豬群進行免疫；母豬執(zhí)行3次/年普防（2，6，10月），2 mL/次；仔豬14日齡肌注2 mL/次。本次檢測共采集46份血樣，包括1周、2周、3周、4周、6周、8周豬只，分別檢測PCV2 IgM/IgG血清抗體，根據(jù)檢測結(jié)果推斷疫苗免疫效果。

2 陰性/陽性判斷標準

2.1 本次檢測使用試劑盒

全部采用INGEZIM公司檢測試劑盒（貨號為1．1．PCV． K2），檢測溫度為37 ℃。

2.2 實驗結(jié)果有效前提

IgG和IgM陽性對照OD值＞0．7；IgG和IgM陰性對照OD值＜0．5

2.3 本次檢測陽性/陰性對照值

IgM陰性對照OD值=0．184，陽性對照OD值=2．9405；IgG陰性對照OD值=0．111，陽性對照OD值=2．821

2.4 IgM/IgG陰/陽性判斷標準

2.4.1 IgM陰/陽性判斷標準

IgM陽性：樣品OD值＞陽性對照OD 值×0．4=1．1762

IgM陰性：樣品OD值＜陽性對照OD 值×0．4=1．1762

2.4.2 IgG陰/陽性判斷標準

IgG陽性：樣品OD值＞陽性對照OD 值×0．3=0．8463

IgG陰性：樣品OD值＜陽性對照OD 值×0．3=0．8463

3 感染時間判斷標準

根據(jù)IgM/IgG OD值的變化來判斷感染時間，判斷標準為：

1）IgM OD值＞IgG OD值：感染初期——II

2）IgG OD值 ＞IgM OD 值， 且IgM滴度＞1：100(IgM為 + ）：近期感染（1-2個月內(nèi)）——III

3）IgG OD值＞IgM OD值 且IgM滴度＜1：100（IgM為-）：感染超過 2個月——IV

4 檢測結(jié)果分析

4.1 豬PCV2 IgM/IgG抗體OD值

從檢測結(jié)果（圖1）可以看出1～4周仔豬PCV2 IgG OD值均大于 IgM OD值（全部為陰性），并且在6 周和8 周時PCV2 IgG全部轉(zhuǎn)為陰性、PCV2 IgM繼續(xù)保持陰性。

圖1 豬PCV2 IgM/IgG抗體OD值

4.2 豬PCV2 IgM OD值分析圖

通過圖2可以看出，雖然在1 周、2 周、3 周、4 周、6周、8周時陽性率全部為零，但是PCV2 IgM OD值的平均值在4周及4 周以前隨著周齡的增大而變小，在6周和8周時PCV2 IgM OD值的平均值出現(xiàn)了1～4周相反的結(jié)果，平均值在不斷增大，同時離散度也在增大。

4.3 豬PCV2 IgG OD值分析圖

根據(jù)圖3可以看出，PCV2 IgG陽性 率 在 1 周（71．43%）、2 周（85．71%）、3周（100%）時隨著周齡的增加陽性率也在增加，4周時陽性率開始下降，并且到6周、8周時陽性率全部為零；平均值的趨勢和陽性率的趨勢基本吻合。

4.4 豬PCV2 IgM/IgG OD值平均值和陽性率對比圖

通過對比圖（圖4）可以看出IgM平 均 值 1 周（0．2545）＞ 2 周（0．2047）＞ 3周（0．1486）＞ 4周（0．1303）＜ 6周（0．188）＜ 8周（0．2877）；IgG 平均值1周（1．1616）＜ 2 周（1．7961）＞ 3 周（1．7087）＞ 4 周（0．7897）＞ 6 周（0．2839）＞ 8周（0．2526）。從此組數(shù)據(jù)可以看出，雖然IgM的陽性率全部為零，但平均值在1～4周是緩慢下降，并且在6～ 9周在緩慢上升，而IgG平均值1～2周逐漸上升，在2周時達到最大值（1．7961），3周及以后開始緩慢下降，并且陽性率也在6周和8周時全部為0。

圖2 PCV2 IgM OD值分析圖

圖3 PCV2 IgG OD值分析圖

圖4 PCV2 IgM/IgG OD值平均值和陽性率對比圖

圖5 PCV2感染時期百分比

4.5 豬PCV2感染時期百分比

根據(jù)PCV2 IgM/IgG OD值大小的比較來判斷圓環(huán)病毒感染時間，依據(jù)感染時間判斷標準推斷1周時2個月前感染率為71．43%；2周時2個月前感染率為85．71%；3周時2個月前感染率為100%；4周時2個月前感染率為42．86%。但是根據(jù)豬只日齡和PCV2 IgM/IgG OD值的走勢判斷1～4周 IgM抗體和1～8周 IgG抗體顯然是來自母源抗體，并非野毒感染產(chǎn)生，而PCV2 IgM OD值自6 周時開始上升：4 周（0．1303）＜6 周（0．188）＜ 8 周（0．2877），有可能是2周時疫苗免疫刺激機體所產(chǎn)生，以此推斷本豬群在8周前并未遭受圓環(huán)野毒的攻擊。

5 小結(jié)

1）張毅等（2012）的研究數(shù)據(jù)表明，試驗母豬產(chǎn)前免疫圓環(huán)病毒疫苗，對新生仔豬的母源抗體進行檢測，新生仔豬在哺乳前幾乎檢測不到PCV2母源抗體，吮初乳后則逐漸上升，10～20日齡時母源抗體水平最高并在20日齡左右達到高峰，30日齡以后迅速下降，40日齡左右降至臨界值，因此在14～20日齡免疫圓環(huán)病毒疫苗最佳。本場采用母豬普免3次/年，仔豬14日齡免疫，2 mL/次，基本符合張毅等（2012）的研究結(jié)果。

2）雖然母豬未做PCV2 IgM和IgG OD值檢測，根據(jù)母豬采取3次/年普防方案推斷1周、2周 PCV2 IgM和IgG抗體均來自母源抗體。并且PCV2 IgG抗體呈上升趨勢：1周（1．1616）＜2 周（1．7961）， 并 在 3 周逐漸下降，6周時陽性律為零，此變化規(guī)律符合張毅等（2012）的研究結(jié)果。

3）根據(jù)免疫學原理，感染（疫苗免疫或野毒感染）后第3～4 d IgM抗體開始產(chǎn)生，在第10 d時可以達到高峰。IgG抗體出現(xiàn)稍晚，感染（疫苗免疫或野毒感染）后10～14 d開始產(chǎn)生，21 d時具有保護效果。按此規(guī)律，本場仔豬14日齡免疫后，第3～4 d PCV2 IgM抗體產(chǎn)生，在3～4 周時PCV2 IgM抗體應達到高峰；PCV2 IgG抗體應在5～6周時達到高峰；本次檢測實際數(shù)據(jù)3周、4周PCV2 IgM抗體值逐漸衰減，并且在6周和8周時有緩慢升高，但仍是陰性。PCV2 IgG抗體平均值在6 周時均小于2周、3周、4周，并且6 周（0．2839）＞ 8周（0．2526）。 因 此 推 斷 在 2周時免疫PCV2疫苗沒有達到預期效果（PCV2 IgM和PCV2 IgG OD值上升），同時結(jié)合2周時PCV2 IgG OD值（較高），所以2周時進行圓環(huán)疫苗免疫時間過早，不能有效突破母源抗體的干擾。

4)單純根據(jù)檢測結(jié)果：PCV2 IgM OD平均值1周（0．2545）＞ 2周（0．2047）＞ 3周（0．1486）＞ 4周（0．1303）＜ 6周（0．188）＜ 8周（0．2877）；PCV2 IgG OD平均值1周（1．1616）＜ 2周（1．7961）＞ 3周（1．7087）＞ 4周（0．7897）＞ 6周（0．2839）＞ 8周（0．2526）和感染時間判斷標準推斷1周、2周、3周、4周時在2個月前感染率分別為71．43%、85．71%、100%、42．86%，如果再結(jié)合豬只日齡來綜合考慮此結(jié)論顯然不正確，此階段IgM/IgG抗體顯然來自母源抗體，因此要想借助IgM/IgG OD值的變化來判斷感染時間時要結(jié)合母豬免疫程序、被測豬只日齡、免疫時間等進行綜合考慮方可得出對生產(chǎn)有指導意義的結(jié)論。