何汝雯 ，張小川 ，何仕雯 ，溫小蓮 ，童大躍 ，莫秋華 ，3，張茲鈞

（1.廣東科登法醫(yī)物證司法鑒定所，廣東 珠海 519000；2.中山大學(xué)中山醫(yī)學(xué)院法醫(yī)系，廣東 廣州 510080；3.珠海國際旅行衛(wèi)生保健中心，廣東 珠海 519000）

1 案 例

1.1 簡要案情

夫妻二人因女兒移民，要求進(jìn)行親子鑒定，以確定他們之間的親生關(guān)系。

1.2 檢驗(yàn)過程

采集三人的指血到無菌濾紙上。先用人類STRtyper-21G擴(kuò)增熒光檢測試劑盒（寧波海爾施基因科技有限公司）進(jìn)行D3S1358等20個基因座檢測，發(fā)現(xiàn)女兒與母親之間在TPOX和D2S1338基因座上不符合孟德爾遺傳規(guī)律，按照司法部頒布的《親權(quán)鑒定技術(shù)規(guī)范》（SF/Z JD0105001-2016）的方法計算這些基因座的父權(quán)指數(shù)（paternity index，PI），累積父權(quán)指數(shù)為1.5615×102，需增加檢測基因座來達(dá)到判斷要求。

隨后采用人類STRtyper-10G擴(kuò)增熒光檢測試劑盒（珠?？频巧锕こ逃邢薰荆┖蚐TRtyper-23comp常染色體補(bǔ)充位點(diǎn)試劑盒（寧波海爾施基因科技有限公司），增加了20個基因座進(jìn)行檢測，又發(fā)現(xiàn)女兒與母親之間在D2S1772和D2S441基因座上不符合孟德爾遺傳規(guī)律。綜上所述，40個基因座累積父權(quán)指數(shù)為1.7990×105，除去4個不符合孟德爾遺傳規(guī)律的基因座，余36個STR基因座累積父權(quán)指數(shù)為5.179 5×1020?？梢耘袛酁橹С执嬖谟H生關(guān)系。雖然以上40個基因座檢測結(jié)果能夠支持親生關(guān)系，但4個不符合孟德爾遺傳規(guī)律的基因座均出現(xiàn)在2號染色體上。為了弄清母女之間不符合孟德爾遺傳規(guī)律的原因，再增加了12個X-STR基因座及12個2號染色體上的STR基因座進(jìn)行檢測。12個STR基因座用6%非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳分析產(chǎn)物，500V電泳1h左右。銀染顯色，對12個STR基因座擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行分析。將女兒的血樣送到廣州金域醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中心進(jìn)行染色體核型分析。

為了進(jìn)一步澄清每個基因座中父、母、女等位基因之間的序列差異，用T-Vector pMDTM19（Simple）試劑盒（大連寶生物工程有限公司）將每個等位基因片段進(jìn)行克隆，并送到上海鉑尚生物技術(shù)有限公司進(jìn)行Sanger雙脫氧鏈終止法測序分析。

1.3 檢測結(jié)果

用人類STRtyper-21G擴(kuò)增熒光檢測試劑盒等共檢測了40個常染色體基因座，發(fā)現(xiàn)母女在TPOX、D2S1338、D2S1772和D2S441基因座上不符合孟德爾遺傳規(guī)律（表1）。增加12個X-STR基因座進(jìn)行檢測，母女之間未發(fā)現(xiàn)不符合孟德爾遺傳規(guī)律的基因座（表2）。對新設(shè)計的12對2號染色體上的STR基因座引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增（圖1）。女兒的染色體數(shù)目或結(jié)構(gòu)未發(fā)現(xiàn)異常，排除了母源部分基因片段缺失的可能性。表3顯示，16個基因座涵蓋了2號染色體上各個區(qū)段，說明女兒的等位基因全部為純合子，而且全部能從父親的等位基因中找到來源，其中11個基因座（TPOX、D2S1338、D2S1772、D2S441、D2S429、D2S1399、D2S1387、D2S1790、D2S434、D2S1391 和 D2S1788）的等位基因可以肯定是父親遺傳的，從母親的等位基因中找不到來源。

表1 40個常染色體STR基因座中4個不符合遺傳規(guī)律的基因分型結(jié)果及父權(quán)指數(shù)

表2 12個X-STR基因座等位基因分型結(jié)果

用Sanger法對上述所有等位基因片段進(jìn)行序列分析，在原有基礎(chǔ)上又發(fā)現(xiàn)D2S1327和D2S2960完全與父親的序列相同，與母親的序列有所差異（表4）。剩下的 3 個基因座（D2S2952、D2S2961、D2S1360）中雖可從母親的結(jié)果中找到女兒的等位基因，但其父親也有相同的等位基因。

表3 2號染色體上16個STR基因座的位置

圖1 2號染色體上12個STR基因座PCR擴(kuò)增銀染檢測結(jié)果

表4 2號染色體上16個STR基因座的Sanger測序結(jié)果

2 討 論

STR等位基因分型是目前公認(rèn)的親子鑒定方法，但由于遺傳的原因，分型過程中可觀察到STR基因突變的現(xiàn)象，而表現(xiàn)出不符合孟德爾遺傳規(guī)律的情況[1-3]。本案發(fā)現(xiàn)1例4個STR基因座上女兒的等位基因中找不到母親的來源，而且都在2號染色體上，因此高度懷疑是單親二倍體遺傳[4]。

通過染色體核型分析，未發(fā)現(xiàn)女兒的染色體數(shù)目或結(jié)構(gòu)異常，排除了母源部分基因片段缺失的可能性。對涵蓋了2號染色體上不同區(qū)段的16個STR基因座用熒光或銀染法進(jìn)行檢測，結(jié)果顯示女兒的等位基因全部為純合子，而且全部能從父親的等位基因中找到來源，其中 11 個基因座（TPOX、D2S1338、D2S1772、D2S441、D2S429、D2S1399、D2S1387、D2S1790、D2S434、D2S1391和D2S1788）的等位基因可以肯定是父親遺傳的，從母親的等位基因中找不到來源。用Sanger法對上述所有等位基因片段進(jìn)行序列分析，在原有基礎(chǔ)上又發(fā)現(xiàn)D2S1327和D2S2960完全與父親的序列相同，與母親的序列有所差異。剩下的3個基因座（D2S2952、D2S2961、D2S1360）中雖可從母親的結(jié)果中找到女兒的等位基因，但其父親也有相同的等位基因。因此，推斷這3個基因座的等位基因很可能是由父親傳給女兒的，而不是來源于母親。從上述結(jié)果可以看出，在16個2號染色體基因座中沒有一個能肯定是母親遺傳的，而且這16個基因座涵蓋了2號染色體上不同區(qū)段（圖3），基本上能代表整個2號染色體的基因類型。由此分析女兒的2號染色體屬于父系單親二倍體遺傳，母親沒有將2號染色體的基因遺傳給女兒。因此，在本案中4個不符合遺傳規(guī)律的STR檢測結(jié)果不屬于親子鑒定中常見的等位基因變異，而是2號染色體單親二倍體遺傳變異[5-8]。所以筆者認(rèn)為，TPOX、D2S1338、D2S1772 和 D2S441 這 4個 STR基因座的檢測結(jié)果不應(yīng)該納入PI計算，而其余36個STR基因座的累積父權(quán)指數(shù)5.1795×1020才是更準(zhǔn)確的結(jié)果。

迄今為止，雖然單親二倍體遺傳變異的報道不是很多見，但在親子鑒定中仍需引起重視，以免造成誤判。特別是出現(xiàn)同一染色體上多基因座不符合孟德爾遺傳規(guī)律，而且突變步驟多（≥3）的案例時，更應(yīng)引起高度重視。