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        閉鎖蛋白和閉鎖小帶蛋白在慢性胃炎組織中的表達(dá)和意義

        2018-11-17 02:38:58張瓊慧李俊紅徐桂濤徐衛(wèi)華
        胃腸病學(xué) 2018年10期

        陳 俊 張 慧 張瓊慧 李俊紅 徐桂濤 徐衛(wèi)華

        湖北孝昌縣第一人民醫(yī)院消化內(nèi)科(432900)

        背景:慢性胃炎發(fā)病的過程中,生物因子的改變可影響胃黏膜的生理屏障,增加細(xì)胞間連接的損傷風(fēng)險(xiǎn),導(dǎo)致黏膜上皮屏障破壞。目的:探討閉鎖蛋白(occludin)、閉鎖小帶蛋白-1(ZO-1)在慢性胃炎組織中的表達(dá)和意義。方法:選取2014年10月—2017年10月于孝昌縣第一人民醫(yī)院就診的慢性胃炎患者82例,根據(jù)內(nèi)鏡活檢病理結(jié)果分為慢性非萎縮性胃炎(CNAG)組和慢性萎縮性胃炎(CAG)組,選取同期健康志愿者40名作為正常對(duì)照組。采用免疫組化方法檢測胃黏膜組織occludin、ZO-1表達(dá)。幽門螺桿菌(Hp)陽性患者給予Hp根除治療,轉(zhuǎn)陰者復(fù)查occludin、ZO-1表達(dá)。結(jié)果:CNAG、CAG組occludin、ZO-1蛋白陽性表達(dá)率顯著低于正常對(duì)照組(P<0.05);CNAG組occludin、ZO-1蛋白陽性表達(dá)率顯著高于CAG組(P<0.05)。CNAG Hp陽性組occludin、ZO-1蛋白陽性表達(dá)率顯著低于Hp陰性組(P<0.05);CAG Hp陽性組ZO-1蛋白陽性表達(dá)率顯著低于Hp陰性組(P<0.05)。Occludin、 ZO-1蛋白表達(dá)與胃黏膜炎癥活動(dòng)度呈線性趨勢關(guān)系(P<0.05),隨著炎癥活動(dòng)度的增加,兩者表達(dá)顯著減弱。CNAG Hp陽性患者轉(zhuǎn)陰后,occludin、ZO-1蛋白陽性表達(dá)率較根除治療前顯著升高(P<0.05)。結(jié)論:Occludin、ZO-1在慢性胃炎組織尤其是CAG中表達(dá)減弱。兩者表達(dá)與Hp感染以及胃炎活動(dòng)度之間存在一定聯(lián)系。

        慢性胃炎發(fā)病的過程中,生物因子的改變可影響胃黏膜的生理屏障,增加細(xì)胞間連接的損傷風(fēng)險(xiǎn),導(dǎo)致黏膜上皮屏障破壞。閉鎖蛋白(occludin)是重要的細(xì)胞跨膜成分,作為細(xì)胞間緊密連接蛋白之一,參與細(xì)胞屏障功能和維持細(xì)胞極性。閉鎖小帶蛋白-1(zonula occluden-1, ZO-1)則是緊密連接的骨架成分,可連接occludin與細(xì)胞內(nèi)骨架蛋白,在緊密連接與細(xì)胞內(nèi)成分相連中起橋梁作用[1]。本研究通過檢測occludin、ZO-1在慢性萎縮性胃炎(CAG) 、慢性非萎縮性胃炎(CNAG)患者胃黏膜組織中的表達(dá),旨在為慢性胃炎的臨床診治提供理論依據(jù)。

        對(duì)象與方法

        一、研究對(duì)象

        選取2014年10月—2017年10月于湖北孝昌縣第一人民醫(yī)院就診的慢性胃炎患者82例,根據(jù)內(nèi)鏡活檢病理結(jié)果分為CNAG組和CAG組。納入標(biāo)準(zhǔn):①經(jīng)電子胃鏡檢查確診;②入組前3個(gè)月內(nèi)未服用非甾體消炎藥、抗菌藥物、鉍劑;③經(jīng)快速尿素酶試驗(yàn)(RUT)明確幽門螺桿菌(Hp)感染狀態(tài)。排除標(biāo)準(zhǔn):①胃大部切除術(shù)史;②活動(dòng)性上消化道出血、嚴(yán)重心肺疾病、消化道穿孔等疾?。虎蹮o法耐受胃鏡檢查。選取40名同期健康志愿者作為正常對(duì)照組。根據(jù)RUT結(jié)果進(jìn)一步將CNAG、CAG患者分別分為Hp陽性組和陰性組。研究方案經(jīng)湖北孝昌縣第一人民醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn),入組者均簽屬知情同意書。

        二、方法

        1. 免疫組化染色:胃黏膜內(nèi)鏡活檢標(biāo)本石蠟切片脫蠟至水,反復(fù)洗滌,加入牛奶液體封閉5 min,加入occludin、ZO-1 抗體(Abcam公司,滴度均為1∶1 000), 37 ℃孵育2 h,PBS洗滌3次,加入熒光標(biāo)記的二抗(Abcam公司),37 ℃ 孵育 30 min,PBS洗滌,DAB顯色,封片,光學(xué)顯微鏡下觀察。以PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。

        結(jié)果判斷:Occludin、ZO-1陽性表達(dá)定位于細(xì)胞膜,陽性細(xì)胞比例<5%為0分,5%~25%為1分,25%~50%為2分,50%~75%為3分,≥76%為4分;無染色為0分,淡黃色為1分,棕黃色為2分,棕褐色為3分。總分為陽性細(xì)胞比例評(píng)分與染色強(qiáng)度評(píng)分的乘積,≤6分為陰性表達(dá),≥7分為陽性表達(dá)。

        2. 胃黏膜炎癥活動(dòng)度分級(jí):參照《中國慢性胃炎共識(shí)意見(2006,上海)》中的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分級(jí)[2]。

        3. Hp根除治療:對(duì)Hp陽性患者給予Hp根除治療(鉍劑四聯(lián)療法)。治療結(jié)束后4~6周行13C-尿素呼氣試驗(yàn),CNAG組Hp轉(zhuǎn)陰患者復(fù)查胃黏膜occludin、ZO-1表達(dá)。

        三、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

        結(jié) 果

        一、 一般情況

        82例患者中CNAG組44例,其中男27例,女17例,年齡30~69歲 ,平均(55.0±9.2)歲;CAG組38例,其中男20例,女18例,年齡29~70歲 ,平均(54.8±8.4)歲。正常對(duì)照組40例,其中男25例,女15例,年齡30~70歲 ,平均(55.1±9.1)歲。三組間性別構(gòu)成、年齡差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

        二、CNAG、CAG患者occludin、ZO-1蛋白表達(dá)情況

        CNAG、CAG組occludin、ZO-1蛋白陽性表達(dá)率顯著低于正常對(duì)照組(P<0.05);CNAG組occludin、ZO-1蛋白陽性表達(dá)率顯著高于CAG組(P<0.05)(表1)。

        三、Hp陽性與陰性CNAG、CAG患者occludin、ZO-1蛋白表達(dá)情況

        CNAG患者中Hp陽性21例,Hp陰性23例。Hp陽性組occludin、ZO-1蛋白陽性表達(dá)率顯著低于Hp陰性組(P<0.05)(表2)。

        CAG患者中Hp陽性17例,Hp陰性21例。Hp陽性組ZO-1蛋白陽性表達(dá)率顯著低于Hp陰性組(P<0.05);兩組間occludin蛋白陽性表達(dá)率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(表2)。

        四、不同炎癥活動(dòng)度患者occludin、ZO-1蛋白表達(dá)情況

        82例患者occludin、 ZO-1蛋白表達(dá)與胃黏膜炎癥活動(dòng)度呈線性趨勢關(guān)系(P<0.05),隨著炎癥活動(dòng)度的增加,occludin、ZO-1蛋白表達(dá)顯著減弱(表3)。

        五、Hp陽性轉(zhuǎn)陰后occludin、ZO-1蛋白表達(dá)比較

        21例CNAG組Hp陽性患者均成功根除Hp,根除治療后occludin、ZO-1蛋白陽性表達(dá)率較根除治療前顯著升高(P<0.05)(表4)。

        討 論

        胃黏膜上皮慢性損傷和代償性修復(fù)過程可引起腺上皮細(xì)胞生理功能退化,導(dǎo)致黏膜變薄,間質(zhì)成分減少[2]。緊密連接、黏附連接、縫隙連接、橋粒等是胃黏膜上皮細(xì)胞間的主要連接方式,其結(jié)構(gòu)中包含多種細(xì)胞骨架成分,后者可保護(hù)胃壁或胃腺體細(xì)胞,避免其發(fā)生萎縮性變化。Occludin除作為細(xì)胞間緊密連接的重要組分,還能促進(jìn)胃腺體細(xì)胞間質(zhì)成分持續(xù)性增生,降低炎癥細(xì)胞對(duì)胃上皮基底膜的滲透,以及抑制胃腺體、間質(zhì)成分的代償性纖維化。ZO-1則通過形成細(xì)胞橋接蛋白成分,提高細(xì)胞間連接的緊密程度。

        表1 CNAG、CAG患者occludin、ZO-1蛋白表達(dá)比較n(%)

        *與正常對(duì)照組比較

        表2 Hp陽性與陰性CNAG、CAG患者occludin、ZO-1蛋白表達(dá)比較n(%)

        *Fisher精確檢驗(yàn)

        表3 不同炎癥活動(dòng)度患者occludin、ZO-1蛋白表達(dá)n(%)

        表4 Hp陽性轉(zhuǎn)陰患者occludin、ZO-1蛋白表達(dá)變化n(%)

        本研究發(fā)現(xiàn),在CNAG、CAG患者的炎癥黏膜組織中, occludin、ZO-1表達(dá)顯著下降,提示兩者表達(dá)缺失可能參與了慢性胃炎的發(fā)生過程。Occludin、ZO-1低表達(dá)可能通過下述幾個(gè)方面發(fā)揮作用:occludin低表達(dá)降低細(xì)胞間的物理性連接力度,細(xì)胞間質(zhì)成分分解增加,促進(jìn)黏膜上皮萎縮;ZO-1表達(dá)下降可直接影響細(xì)胞間連接的數(shù)量,導(dǎo)致上皮細(xì)胞基底膜直接暴露于Hp、膽汁等刺激因素下。本研究結(jié)果顯示,在CNAG伴Hp感染患者的胃黏膜組織中,occludin、 ZO-1表達(dá)均明顯下降,顯著低于不伴Hp感染的患者。Hp感染對(duì)occludin、ZO-1的影響可能與其分泌的尿素酶、CagA、VacA等致病因子的破壞作用有關(guān)[3-4]。本組Hp陽性CAG患者的occludin無上述改變,考慮可能與樣本量偏小導(dǎo)致的偏倚有關(guān),亦可能與免疫組化染色過程中的操作誤差有關(guān)。此外,本研究發(fā)現(xiàn),隨著胃黏膜炎癥活動(dòng)度的增加,occludin、ZO-1表達(dá)明顯減弱。炎癥反應(yīng)對(duì)兩者表達(dá)的影響,可能與單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等對(duì)黏膜屏障的損傷作用有關(guān)。Hp陽性轉(zhuǎn)陰后,CNAG患者occludin、ZO-1陽性表達(dá)率較根除治療前顯著升高,與國內(nèi)樊葉等[5]的研究發(fā)現(xiàn)相一致,進(jìn)一步證實(shí)occludin、ZO-1表達(dá)與Hp感染之間存在一定聯(lián)系,但具體機(jī)制尚未明確,有待探討。

        綜上所述,本研究分析了occludin、ZO-1的表達(dá)與慢性胃炎伴Hp感染以及炎癥活動(dòng)度的關(guān)系。Occludin、ZO-1在慢性胃炎組織中表達(dá)減弱,尤其是在CAG中表達(dá)降低更為明顯。此外,occludin、ZO-1表達(dá)與Hp感染以及胃炎活動(dòng)度之間存在一定聯(lián)系。進(jìn)一步對(duì)相關(guān)內(nèi)容進(jìn)行研究,有望為探索慢性胃炎的治療提供新方向。

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