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心房顫動是目前臨床上最常見的持續(xù)性心律失常[1]，房顫是急性心肌梗死的獨立危險因素[2]，但機制尚未闡明。血小板在急性心肌梗死的發(fā)生發(fā)展中起著重要的作用[3]，越來越多的研究證明血小板在炎癥與血栓的相互作用中發(fā)揮著重要的角色。

NOD2(nucleotide-binding oligomerization domain 2)受體是近年來新發(fā)現(xiàn)的表達于血小板內(nèi)的模式識別受體，在體內(nèi)炎癥的狀態(tài)下，NOD2受體會激活，進而增強血小板的反應(yīng)性，引發(fā)血栓促進心血管事件的發(fā)生[4-5]。炎癥在房顫的發(fā)生發(fā)展中起著重要的作用，房顫是體內(nèi)的一種炎性狀態(tài)[6-7]，而血小板炎性NOD2在房顫病人中的表達及意義尚未有研究報道。

1 資料與方法

1.1 研究對象 選取2016年6月—2017年6月入住復(fù)旦大學(xué)附屬華山醫(yī)院心內(nèi)科的房顫病人80例(房顫組)，并選取同期非房顫病人80例作為對照組，房顫的診斷通過12導(dǎo)聯(lián)心電圖與24 h心電圖確診。排除標(biāo)準(zhǔn)：年齡<18歲或>80歲；有肺部感染、上呼吸道感染、其他部位感染者；正在服用抗炎藥物者；肝、腎、造血系統(tǒng)等嚴(yán)重終末期疾病者；妊娠或哺乳期婦女；風(fēng)濕性疾病或其他自身免疫性疾病者；腫瘤病人；無行為能力者。

1.2 標(biāo)本的采集與處理 所有入選病人入院第二日清晨采集血標(biāo)本。抽取肘靜脈血3 mL，以3 00 r/min速度離心4 min，獲得上清轉(zhuǎn)移至EP管，以700 r/min速度離心8 min，獲得血小板沉淀，用1 mL Trizol重懸。提取總RNA，加20 μL 無RNA酶水溶解，按照逆轉(zhuǎn)錄試劑說明書(TaKaRa公司， JAPAN) 操作合成cDNA，凍存于-80 ℃。

1.3 熒光定量PCR法檢測血小板NOD2 mRNA表達 房顫組與正常對照組血小板cDNA，采用熒光定量PCR方法檢測NOD2受體mRNA表達，PCR引物：NOD2-上游：5′-TGGTTCAGCCTCTCACGATGA-3′；下游：5′-CAGGACACTCTCGAAGCCTT-3′；產(chǎn)物長度157bp。GAPDH-上游：5′-GGAGCGAGATCCCTCCAAAAT-3′；下游：5′-GGCTGTTGTCATACTTCTCATGG-3′；產(chǎn)物長度：197bp。PCR建立總體積20 μL 反應(yīng)體系，反應(yīng)條件(40個循環(huán))：95 ℃ 10 min，95 ℃ 15 s，60℃ 1 min。每份標(biāo)本做3個復(fù)孔，復(fù)孔間Ct值差異控制在0.5以內(nèi)。目的基因的Ct值減去內(nèi)參的Ct值作為△Ct，目的基因mRNA表達水平由2-△△Ct表示。

1.4 ELISA法檢測炎癥因子 炎癥指標(biāo)血清超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)、白細胞介素-1β(IL-1β)、腫瘤壞死因子(TNF)與白細胞介素-6(IL-6)，通過ELISA法檢測，由醫(yī)院檢驗科完成。

2 結(jié) 果

2.1 房顫組與正常對照組基線資料比較 相較于正常對照組，房顫組左心房較大(P<0.05)，兩組在年齡、性別、高血壓病、糖尿病、冠心病、心功能不全、吸煙、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、阿司匹林使用、氯吡格雷使用、左室射血分數(shù)、白細胞計數(shù)、血小板計數(shù)與平均血小板體積等基線資料間相比無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。詳見表1。

2.2 房顫組與正常對照組血小板NOD2表達水平與相關(guān)炎癥因子水平比較 與正常對照組相比較，房顫組的炎癥指標(biāo)IL-1β、TNF、IL-6與hs-CRP明顯升高(P<0.05)，房顫病人的血小板NOD2 mRNA水平高于正常對照組(P<0.05)。詳見表2。

表2 心房顫動組與正常對照組間血小板NOD2表達水平與相關(guān)炎癥因子水平比較(±s)

2.3 血小板NOD2表達水平與炎癥因子之間的相關(guān)性分析 入組病人血小板NOD2表達水平與炎癥因子之間的相關(guān)性分析顯示：血小板NOD2 mRNA與炎癥因子IL-1β、TNF、IL-6與hs-CRP之間呈正相關(guān)，隨著IL-1β、TNF、IL-6與hs-CRP水平的升高，血小板NOD2表達水平升高。詳見圖1。

圖1 血小板NOD2表達水平與炎癥因子相關(guān)性分析

3 討 論

同Toll樣受體一樣，NOD2受體是近年來新發(fā)現(xiàn)的在血小板內(nèi)表達的一類模式識別受體，在炎癥與免疫中發(fā)揮著重要的作用，在炎癥狀態(tài)下NOD2受體會激活，會通過釋放炎癥因子引起一系列炎癥反應(yīng)。血小板既在血栓的發(fā)展中起著作用，又在炎癥免疫中發(fā)揮重要作用，血小板內(nèi)NOD2受體激活后可增強血小板的反應(yīng)性，并且促進血小板炎癥因子的釋放，促進動脈血栓的形成[6-8]。且越來越多的研究證明NOD2受體活化促進動脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展[9-10]，促進心血管事件的發(fā)生。

高血壓病、糖尿病、高脂血癥、吸煙等已被明確為急性心肌梗死的危險因素，目前對房顫的關(guān)注主要為房顫引起卒中事件的預(yù)防[11]，但研究證明對于CHA2DS2-VASc評分為0分或1分的房顫病人，房顫為急性心肌梗死的獨立危險因素[2]。所以研究房顫引起急性心肌梗死的機制有重要的臨床意義，而血小板在急性心肌梗死的發(fā)生發(fā)展中起著舉足輕重的作用。房顫是一種炎癥性疾病，多項研究證實房顫病人的炎癥因子表達水平較健康人群顯著升高[12-13]。本研究通過對房顫病人炎癥指標(biāo)的檢測發(fā)現(xiàn)，與正常對照組相比較，房顫病人的炎癥指標(biāo)IL-1β、TNF、IL-6與hs-CRP明顯升高。炎癥狀態(tài)下的房顫病人血小板NOD2受體表達水平高于正常對照組，作為炎癥反應(yīng)與血小板活化功能之間的橋梁，NOD2水平有希望成為預(yù)防房顫病人發(fā)生急性血栓事件的生物學(xué)標(biāo)記。但本研究樣本量較小，需要包含血小板活化指標(biāo)的更大樣本量的研究進行進一步證實，房顫病人NOD2水平與血小板活化指標(biāo)之間的量化關(guān)系值得深入探索。此外，關(guān)于房顫病人炎癥因子升高引起血小板NOD2受體表達水平增高的機制也有待明確。

心房顫動病人血小板NOD2受體表達升高，且與炎癥因子水平呈現(xiàn)相關(guān)性，NOD2水平可能對房顫病人急性心肌梗死發(fā)生具有預(yù)測意義。