馬天華 遼寧省撫順市新賓滿族自治縣衛(wèi)生監(jiān)督所 （遼寧 撫順 113200）

內(nèi)容提要： 目的：探究分析旋轉(zhuǎn)恒溫箱進行快速細菌和鑒定的實用性。方法：選取本縣人民醫(yī)院在2017年1月～2017年12月收治的懷疑沙門桿菌感染的敗血癥患者的血液標本，經(jīng)BACTEC9120儀培養(yǎng)確定為陽性的50株細菌為當做臨床標本，選取已知菌株和標準菌株組成模擬標本100份，隨機分為兩組，研究組采用旋轉(zhuǎn)恒溫箱進行培養(yǎng)，對照組采用普通恒溫培養(yǎng)箱進行培養(yǎng)。結(jié)果：研究組陽性顯示時間多在24h之內(nèi)，顯著低于對照組96h之內(nèi)（P＜0.05），兩組快速法判讀結(jié)果相同，快速法結(jié)果判讀所需時間少于常規(guī)法（P＜0.05）。結(jié)論：旋轉(zhuǎn)恒溫箱能夠減少快速細菌培養(yǎng)和鑒定的時間，應(yīng)用效果理想。

隨著醫(yī)學的發(fā)展，循證醫(yī)學得到了廣泛應(yīng)用，對細菌進行快速檢驗并得出相應(yīng)報告越來越重要。但是傳統(tǒng)細菌增菌培養(yǎng)耗時長，一般在18h～38h之間，傳統(tǒng)生化鑒定判斷結(jié)果也要在16h～24h之間才能得出。采用旋轉(zhuǎn)恒溫箱進行快速細菌培養(yǎng)及鑒定能夠有效減少所需時間，提高細菌快速培養(yǎng)和鑒定的效率，應(yīng)用效果理想，現(xiàn)報道如下。

1.材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌株。標準菌株：金黃色葡萄球菌（ATCC25923）、糞腸球菌（ATCC29212）、銅綠假單胞菌（ATCC27853）、大腸埃希菌（ATCC25922）、布魯菌（ATCC25964）。已知菌株：100株分離鑒定并保存的臨床標本以及全國和湖南省臨床檢驗中心微生物室間質(zhì)評下發(fā)的菌株[1]。

1.1.2 標本來源。臨床標本：本院在2017年1月～2017年12月收治的懷疑沙門桿菌感染的敗血癥的血液標本，經(jīng)BACTEC9120儀培養(yǎng)確定為陽性的50株細菌。模擬標本：已知菌株和標準菌株。

1.1.3 儀器THZ-92B恒溫振蕩器、恒溫培養(yǎng)箱。

1.1.4 培養(yǎng)基與生化管。選用杭州微生物試劑有限公司生產(chǎn)的常規(guī)血液增菌培養(yǎng)瓶，實驗室自制TTC琥珀酸鹽血液增菌培養(yǎng)瓶（TTC瓶），按照傳統(tǒng)配方將硝酸鹽、尿素酶、七葉苷底物擴大10倍，每管0.4mL～0.5mL之間，5.0g/L的L-苯丙氨酸配成苯丙氨酸脫氨酶，1.0g/L的色氨酸配成靛基質(zhì)[2]。

1.2 方法

1.2.1 制備模擬標本復(fù)蘇傳代已知菌株和準備菌株后，制成菌液，濃度為0.5McFarland，之后梯度稀釋為含菌濃度為10CFU/mL的菌液，將常規(guī)瓶加入正常人靜脈血，注入稀釋后菌液，置入普通恒溫箱培養(yǎng)；將分別置入旋轉(zhuǎn)恒溫箱和普通恒溫箱的兩瓶TTC瓶加入正常人靜脈血5mL，之后注入稀釋后菌液，分別在普通恒溫培養(yǎng)箱和旋轉(zhuǎn)恒溫箱進行培養(yǎng)監(jiān)測。生化實驗所用濃度懸液由濃度為10.McFarland的菌液配成。

1.2.2 檢出陽性瓶。普通恒溫箱、旋轉(zhuǎn)恒溫箱分別放入已接種臨床標本或模擬標本培養(yǎng)。常規(guī)瓶液體變渾濁，或TTC瓶液體變紅后記錄培養(yǎng)時間[3]。

1.2.3 接種生化管。接種針挑適量菌落用常規(guī)法接種，置于普通恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)；取一滿環(huán)上述濃菌液采用快速法接種，置于普通恒溫箱和恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)；恒溫培養(yǎng)箱溫度均為36°C。

1.2.4 判讀生化管。2～6h普通培養(yǎng)快速法判讀，1～4h旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)快速法判讀，24h后常規(guī)法加入相應(yīng)試劑，陽性七葉苷變黑色，苯丙氨酸脫氨酶變綠色，尿素酶（不加試劑）、靛基質(zhì)、硝酸鹽變紅色，陰性則不變色[4]。

1.2.5 統(tǒng)計學處理。數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS18.0進行分析，其中計數(shù)進行χ2檢驗，計量進行t檢驗，P＜0.05提示有顯著差異。

2.結(jié)果

2.1 比較兩組培養(yǎng)箱顯示陽性所用時間

研究組陽性顯示時間多在24h之內(nèi)，對照組陽性顯示時間多在96h之內(nèi)，研究組培養(yǎng)箱顯示陽性所需時間顯著低于對照組，研究組效果顯著優(yōu)于對照組（P＜0.05），見表1。

2.2 比較快速法與常規(guī)法生化結(jié)果判斷所用時間

研究組快速法七葉苷4h、尿素酶1h不加試劑判讀結(jié)果，硝酸鹽、苯丙氨酸脫氨酶、靛基質(zhì)1h加入試劑判讀結(jié)果。對照組快速法七葉苷6h，尿素酶2h不加試劑判讀結(jié)果，靛基質(zhì)、硝酸鹽、苯丙氨酸脫氨酶2h加入試劑判讀結(jié)果，常規(guī)法則要16～24h培養(yǎng)后加入試劑判讀結(jié)果。研究組和對照組快速法判讀結(jié)果相同，快速法結(jié)果判讀所需時間少于常規(guī)法，研究組效果顯著優(yōu)于對照組（P＜0.05），見表2。

3.討論

在臨床上，由于傳統(tǒng)微生物學檢驗結(jié)果判讀耗時長，醫(yī)生往往根據(jù)以往經(jīng)驗給藥，容易產(chǎn)生耐藥菌株，影響患者病情，浪費醫(yī)療資源。本文研究發(fā)現(xiàn)用旋轉(zhuǎn)恒溫箱進行快速細菌培養(yǎng)和鑒定，效果較好，同時發(fā)現(xiàn)，樹脂、琥珀酸鹽、氯化-235三苯基四氮唑（TTC）加入傳統(tǒng)培養(yǎng)瓶中與旋轉(zhuǎn)恒溫箱效果相同，但是成本降低。旋轉(zhuǎn)恒溫培養(yǎng)箱能夠使肉湯不斷流動，為細菌提供足夠營養(yǎng)物質(zhì)和氧氣，同時樹脂會清除掉其代謝廢物，為培養(yǎng)細菌提供適宜環(huán)境。本文數(shù)據(jù)顯示，研究組陽性顯示時間多在24h之內(nèi)，對照組陽性顯示時間多在96h之內(nèi)，研究組培養(yǎng)箱顯示陽性所需時間顯著低于對照組。因為琥珀酸脫氫酶具有活化作用，伴隨細菌繁殖，培養(yǎng)基變紅色，顯示細菌生長狀況。傳統(tǒng)培養(yǎng)是靜止的，肉湯不流動，細菌生長狀況難以判斷且耗時長。本文研究中，最快可在6h內(nèi)旋轉(zhuǎn)恒溫箱TTC瓶培養(yǎng)細菌就會顯示陽性結(jié)果普通恒溫箱則高于6h，旋轉(zhuǎn)恒溫箱培養(yǎng)時間短。旋轉(zhuǎn)恒溫箱中，1～4h高濃度底物和高濃度細菌懸液培養(yǎng)后就能得到結(jié)果，在普通恒溫箱培養(yǎng)中，則要1～4h才能獲得結(jié)果，并且快速法和常規(guī)法結(jié)果相同，但是快速法所需時間短。

綜上所述，旋轉(zhuǎn)恒溫箱在快速細菌培養(yǎng)和鑒定中能減少所需時間，降低醫(yī)療資源消耗，效果理想。

表1. 比較兩組培養(yǎng)箱顯示陽性所用時間(例)

表2. 比較快速法與常規(guī)法生化結(jié)果判斷所用時間(h,±s)

表2. 比較快速法與常規(guī)法生化結(jié)果判斷所用時間(h,±s)

組別 靛基質(zhì) 苯丙氨酸脫氨酶 七葉苷 尿素酶 硝酸鹽還原研究組 1.0±0.2 1.0±0.3 4.0±0.4 1.1±0.1 0.9±0.4對照組(快速法) 2.0±0.1 2.0±0.2 6.0±0.2 2.0±0.1 2.0±0.2對照組(常規(guī)法) 16.8±0.5 16.2±0.3 24.2±0.6 18.6±0.7 17.5±0.4 t 10.023 9.998 13.256 12.025 11.987 P＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05