江艷華，王聯(lián)珠，許東勤,2，李風(fēng)鈴，翟毓秀，張 媛，姚 琳,*

（1.中國水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所，農(nóng)業(yè)部水產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測與評價重點實驗室，山東 青島 266071；2.上海海洋大學(xué)食品學(xué)院，上海 201306；3.獐子島集團(tuán)股份有限公司，遼寧 大連 116011）

蝦夷扇貝（Patinopecten yessoensis）隸屬于軟體動物門、瓣鰓綱、異柱目、扇貝科、扇貝屬，是一種冷水性貝類，經(jīng)過近20 a的養(yǎng)殖推廣，目前已在我國渤海及黃海北部形成規(guī)?；彤a(chǎn)業(yè)化養(yǎng)殖，創(chuàng)造了數(shù)十億元的產(chǎn)值，是我國北方最重要的經(jīng)濟(jì)海水養(yǎng)殖貝類之一[1]。蝦夷扇貝個體較大、味道鮮美、營養(yǎng)豐富，深受消費者的青睞[2]。蝦夷扇貝產(chǎn)品形式多樣，大多以貝柱為主，包括鮮凍貝柱、干貝、即食貝柱等。由于蝦夷扇貝柱組織細(xì)嫩、含水量高，在儲運過程中極易發(fā)生腐敗變質(zhì)，即使在較低溫環(huán)境下，有些微生物仍然可以繁殖，導(dǎo)致貝柱的變質(zhì)[3]。然而，微生物對蝦夷扇貝柱品質(zhì)變化的影響及作用機(jī)制目前尚不清楚。因此，有必要分析蝦夷扇貝柱中微生物的菌群結(jié)構(gòu)及其在貯藏過程中腐敗后的菌群結(jié)構(gòu)，了解相關(guān)微生物種類，為進(jìn)一步研究微生物在蝦夷扇貝柱品質(zhì)劣化中的作用提供基礎(chǔ)資料。

傳統(tǒng)的微生物菌群分析采用培養(yǎng)分離法，然而大多數(shù)環(huán)境微生物對培養(yǎng)條件要求苛刻，能夠培養(yǎng)分離出的微生物僅占樣品的1%～10%，無法解析微生物的組成及豐度情況[4]。隨著宏基因組學(xué)概念的提出和高通量測序技術(shù)的發(fā)展，使樣品中不可培養(yǎng)的微生物、低豐度的微生物均能被檢測出，更完整地反映樣品中微生物的群落特征，使菌群的分析更準(zhǔn)確和快速，目前已經(jīng)得到廣泛的應(yīng)用[5-8]。本研究采用宏基因組結(jié)合Illumina MiSeq高通量測序技術(shù)分析蝦夷扇貝柱的菌群和腐敗菌群，同時與平板分離結(jié)合高通量測序技術(shù)獲得可培養(yǎng)菌群和腐敗菌群的結(jié)構(gòu)特征進(jìn)行比對，為進(jìn)一步探討微生物與蝦夷扇貝柱品質(zhì)的相關(guān)性研究提供參考基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

蝦夷扇貝由獐子島集團(tuán)股份有限公司提供，為2016年5月采捕，規(guī)格為2 a齡，健康狀態(tài)良好。扇貝于低溫環(huán)境下運抵實驗室后立即處理，處理前仍保持鮮活狀態(tài)。

2216E瓊脂培養(yǎng)基 北京陸橋技術(shù)股份有限公司；土壤基因組DNA提取試劑盒、細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒 美國Omega公司；10×PCR buffer、dNTPs、Taq酶日本Takara公司；Qubit 2.0 DNA檢測試劑盒 美國Life公司；Agencourt AMPure XP磁珠核酸純化試劑盒德國Beckman公司。

1.2 儀器與設(shè)備

T1型聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction，PCR）擴(kuò)增儀 德國Biometra公司；PowerPac型電泳儀美國Bio-Rad公司；Infinity3000型凝膠成像系統(tǒng) 法國Vilber公司；Q32866型Qubit?2.0熒光計 美國Invitrogen公司；MiSeq高通量測序儀 美國Illumina公司；3K15型臺式離心機(jī) 德國Sigma公司。

1.3 方法

1.3.1 樣品處理

用潔凈水將蝦夷扇貝外殼沖洗干凈，采用無菌手術(shù)刀小心將貝柱與其他組織分離開，用無菌水沖洗扇貝柱3 遍。將扇貝柱分別放入無菌樣品袋中，置于4、15、25 ℃放置至樣品腐?。ㄆ渲? ℃放置12 d、15 ℃放置4 d、25 ℃放置2 d，以感官和揮發(fā)性鹽基氮作為判定依據(jù)）。新鮮扇貝柱和不同溫度下腐敗的扇貝柱分別勻漿后用于基因組DNA的提取。

1.3.2 宏基因組DNA的提取

用土壤基因組DNA提取試劑盒提取新鮮扇貝柱及不同溫度下腐敗扇貝柱的宏基因組DNA，新鮮樣品的宏基因組DNA記為BZ，4、15、25 ℃腐敗樣品的宏基因組DNA分別記為BZ4、BZ15、BZ25。

1.3.3 可培養(yǎng)細(xì)菌基因組DNA的提取

無菌操作稱取新鮮樣品及25 ℃腐敗樣品各25 g，分別加入225 mL無菌生理鹽水，勻漿后制成1∶10勻液，進(jìn)行10 倍梯度稀釋，取適宜稀釋度勻液100 μL涂布2216E瓊脂平板，30 ℃培養(yǎng)48 h。用無菌的TE緩沖液收集平板上所有菌落，8 000 r/min離心20 min，沉淀用細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒提取基因組DNA，即為樣品中可培養(yǎng)細(xì)菌菌群的基因組DNA[9]。新鮮樣品的可培養(yǎng)細(xì)菌菌群的基因組DNA記為BZC，腐敗樣品的可培養(yǎng)細(xì)菌菌群的基因組DNA記為BZC25。

1.3.4 PCR擴(kuò)增及高通量測序

將提取的基因組DNA作為模板，擴(kuò)增16S rDNA序列的V3-V4可變區(qū)，引物序列上加有接頭序列和測序引物序列，以適應(yīng)MiSeq測序平臺使用，同時正向引物上接有不同堿基的標(biāo)簽（barcode）序列以區(qū)分不同樣品，引物如下：

341F：5’-CCCTACACGACGCTCTTCCGATCTG（barcode）CCTACGGGNGGCWGCAG-3’，805R：5’-GACTGGAGTTCCTTGGCACCCGAGAATTCCAGAC TACHVGGGTATCTAATCC-3’[10]。

通過兩輪PCR擴(kuò)增并完成接頭序列的連接。第1輪PCR體系為50 μL反應(yīng)液，含10×PCR buffer 5 μL，2.5 mmol/L dNTPs 2.0 μL，50 μmol/L引物各0.5 μL，5 U/μL Taq酶0.5 μL，DNA模板10 ng。PCR條件為：94 ℃預(yù)變性3 min；94 ℃變性30 s，45 ℃退火 20 s，65 ℃延伸30 s進(jìn)行5 個循環(huán)；之后94 ℃變性20 s，55 ℃退火 20 s，72 ℃延伸30 s進(jìn)行20 個循環(huán)，最后72 ℃延伸5 min。第2輪PCR體系同第1輪，模板為20 ng，PCR條件為：95 ℃預(yù)變性30 s，然后95 ℃變性15 s，55 ℃退火15 s，72 ℃延伸 30 s進(jìn)行5 個循環(huán)，最后72 ℃延伸5 min。PCR結(jié)束后，利用瓊脂糖電泳進(jìn)行鑒定，采用磁珠核酸純化試劑盒對PCR產(chǎn)物進(jìn)行回收。利用Qubit2.0 DNA檢測試劑盒對DNA進(jìn)行定量，依托生工生物工程（上海）股份有限公司的Illumina MiSeq測序平臺進(jìn)行高通量測序。

1.4 數(shù)據(jù)分析

對MiSeq測序得到的數(shù)據(jù)，首先取出引物接頭序列，再根據(jù)PE reads之間的overlap關(guān)系，將成對的reads拼接成一條序列，隨后根據(jù)barcode區(qū)分樣品得到各樣本數(shù)據(jù)，對各樣本序列進(jìn)行質(zhì)量控制，去除序列末端質(zhì)量值20以下的序列，切除含N部分序列，并去除數(shù)據(jù)中的短序列，再對低復(fù)雜度序列進(jìn)行過濾[11]。將多條序列按其序列間的距離進(jìn)行聚類，對相似性在0.97以上的序列進(jìn)行歸并，生成操作分類單元（operational taxonomic units，OTUs）。根據(jù)聚類分析結(jié)果，計算ACE、Chao1、Shannon、Simpson指數(shù)進(jìn)行alpha多樣性分析，其中ACE、Chao1指數(shù)是對菌群豐度進(jìn)行評估，Shannon、Simpson指數(shù)是對菌群多樣性進(jìn)行評估[12]。采用RDP classifier軟件對序列進(jìn)行物種分類，根據(jù)分類學(xué)分析比對結(jié)果，在門、屬等水平上對樣品的菌群結(jié)構(gòu)進(jìn)行種類和豐度分析[13]。

2 結(jié)果與分析

2.1 基因組DNA提取及PCR擴(kuò)增

提取的宏基因組DNA和可培養(yǎng)細(xì)菌基因組DNA的條帶清晰，有明顯主帶，其中宏基因組DNA有彌散拖尾現(xiàn)象。以提取的基因組DNA作為模板，用16S rDNA V3-V4區(qū)的通用引物均擴(kuò)增出目的片段（圖1），條帶清晰，滿足后續(xù)測序?qū)嶒灥囊蟆?/p>

圖1 PCR擴(kuò)增產(chǎn)物電泳圖Fig. 1 Electrophoretogram of PCR amplified products

2.2 菌群測序結(jié)果質(zhì)量分析

表1 蝦夷扇貝柱新鮮及腐敗樣品菌群的alpha多樣性比較Table 1 Alpha diversity of bacterial fl ora in fresh and spoiled adductors of P. yessoensis

樣品的基因組DNA經(jīng)PCR擴(kuò)增16S rDNA V3-V4區(qū)后進(jìn)行高通量測序，經(jīng)統(tǒng)計分析獲得序列的alpha多樣性，結(jié)果見表1。所有樣本的測序覆蓋率均在93%以上，表明樣品中序列未被測到的概率較低。所測試的樣本中，新鮮樣品的宏基因組（BZ）的測序量和OTUs數(shù)量最多，ACE和Chao1指數(shù)最低，表明新鮮樣品中菌群相對豐度最低，而Shannon指數(shù)最高、Simpson指數(shù)最低，表明菌群的多樣性最高。

2.3 細(xì)菌菌群結(jié)構(gòu)分析

2.3.1 基于門水平的細(xì)菌菌群結(jié)構(gòu)分析

表2 蝦夷扇貝柱新鮮及腐敗樣品菌群在門水平上的分布Table 2 Relative abundance of bacterial phyla in fresh and spoiled adductors of P. yessoensis%

宏基因組DNA樣本序列經(jīng)RDP classifier軟件進(jìn)行分類分析，在門水平上，如表2所示，新鮮樣品中的總細(xì)菌菌群主要包含變形菌門（Proteobacteria）、厚壁菌門（Firmicutes）、浮霉菌門（Planctomycetes）和擬桿菌門（Bacteroidetes），相對豐度分別為47.92%、14.99%、12.23%和7.58%，還包括少量的未分類菌（unclassified）、酸桿菌門（Acidobacteria）、綠彎菌門（Chloroflexi）、Ignavibacteriae、柔膜菌門（Tenericutes）等；樣品在4、15 ℃腐敗后的菌群以變形菌門（Proteobacteria）為主，相對豐度分別為98.38%和99.78%，在25 ℃腐敗后的菌群則以變形菌門、梭桿菌門（Fusobacteria）和厚壁菌門為主，相對豐度分別為69.97%、18.94%和11.06%。

對可培養(yǎng)細(xì)菌DNA樣本進(jìn)行測序后發(fā)現(xiàn)，新鮮樣品中的可培養(yǎng)細(xì)菌菌群99.98%歸屬于變形菌門，在25 ℃腐敗后的可培養(yǎng)菌群以變形菌門（82.57%）和厚壁菌門（17.40%）為主。

2.3.2 基于屬水平的細(xì)菌菌群結(jié)構(gòu)分析

在屬水平上的統(tǒng)計分析結(jié)果見表3。基于宏基因組DNA測序的結(jié)果顯示，新鮮樣品中的細(xì)菌菌群包含的物種多達(dá)100余種，其中相對豐度大于1%的有未分類菌（unclassified）、Candidatus kuenenia、弧菌屬（Vibrio）、別弧菌屬（Aliivibrio）、芽孢桿菌屬（Bacillus）、科爾韋爾氏屬（Colwellia）、腸球菌屬（Enterococcus）、南極菌屬（Moritella）、希瓦氏菌屬（Shewanella）、黏著桿菌屬（Tenacibaculum）、陶厄氏菌屬（Thauera）、發(fā)光桿菌屬（Photobacterium）、弓桿菌屬（A r c o b a c t e r）、假交替單胞菌屬（Pseudoalteromonas）、Ignavibacterium、極地桿菌屬（Polaribacter）、Gp4，占總量的75.35%。當(dāng)樣品在4、15 ℃和25 ℃放置腐敗后，與新鮮樣品比較，菌群多樣性降低、菌群結(jié)構(gòu)發(fā)生了變化，對于一些在新鮮樣品中占比較高的菌，如C. kuenenia在腐敗后未有檢出；而在新鮮樣品中含量較低的發(fā)光桿菌屬、別弧菌屬、假交替單胞菌屬、乳酸菌屬（Lactobacillus）、梭桿菌屬（Fusobacterium）等則顯著增多。4 ℃的腐敗優(yōu)勢菌為發(fā)光桿菌屬（46.91%）、別弧菌屬（36.82%）和假交替單胞菌屬（11.01%），15 ℃的腐敗優(yōu)勢菌為發(fā)光桿菌屬（46.97%）和別弧菌屬（43.33%），25 ℃的腐敗優(yōu)勢菌為發(fā)光桿菌屬（41.94%）、別弧菌屬（23.10%）、梭桿菌屬（18.61%）和乳酸菌屬（10.60%）。

表3 蝦夷扇貝柱新鮮及腐敗樣品菌群在屬水平上的分布Table 3 Relative abundance of bacterial genus in fresh and spoiled adductors of P. yessoensis%

對可培養(yǎng)細(xì)菌DNA樣本進(jìn)行測序后發(fā)現(xiàn)，新鮮樣品的可培養(yǎng)細(xì)菌菌群多樣性降低，89.46%為假交替單胞菌屬，此外含有少量弧菌屬、別弧菌屬、嗜冷桿菌屬（Psychrobacter）等。在25 ℃放置腐敗后，可培養(yǎng)的腐敗優(yōu)勢菌為弧菌屬（50.98%）、希瓦氏菌屬（17.43%）、乳酸菌屬（10.68%）。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在總細(xì)菌菌群中占優(yōu)勢的發(fā)光桿菌屬、別弧菌屬和梭桿菌屬在可培養(yǎng)細(xì)菌菌群中比例大大下降，說明這幾類菌不適宜在分離培養(yǎng)基上生長，而弧菌屬、希瓦氏菌屬、乳酸菌屬則易培養(yǎng)分離，成為可培養(yǎng)的腐敗優(yōu)勢菌。

3 討 論

由于環(huán)境中微生物物種多樣性極其豐富，傳統(tǒng)培養(yǎng)分離法能夠分離出的微生物僅占樣品中總菌群的很小一部分。宏基因組學(xué)概念的提出，使環(huán)境中不可培養(yǎng)的微生物、低豐度的微生物等均能被檢測出，更完整地反映樣品中微生物的群落特征[6]。高通量測序技術(shù)能夠一次對幾十萬到幾百萬條DNA分子進(jìn)行序列測定，目前的Illumina MiSeq二代測序技術(shù)具有高準(zhǔn)確性、高通量、高靈敏度和低運行成本等特點，結(jié)合宏基因組學(xué)技術(shù)，使環(huán)境中微生物菌群的分析變得更加準(zhǔn)確和快速，在生態(tài)、醫(yī)藥、農(nóng)業(yè)、食品等各個領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用[5,14-15]。

本實驗通過宏基因組結(jié)合Illumina MiSeq高通量測序技術(shù)分析了新鮮蝦夷扇貝柱的總菌群結(jié)構(gòu)及在4、15 ℃和25 ℃腐敗后的總菌群結(jié)構(gòu)，其中4 ℃代表冷藏保存溫度，15 ℃代表工廠加工環(huán)境溫度，25 ℃代表室溫。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，新鮮蝦夷扇貝柱中的細(xì)菌菌群多樣性顯著高于腐敗樣品的細(xì)菌菌群。當(dāng)樣品放至腐敗后，菌群結(jié)構(gòu)發(fā)生了變化，在4、15 ℃和25 ℃三個溫度條件下的腐敗優(yōu)勢菌均含有發(fā)光桿菌屬和別弧菌屬，此外，在4 ℃條件下，假交替單胞菌屬相對豐度也較高，在25 ℃條件下，優(yōu)勢菌群還包括梭桿菌屬和乳酸菌屬。為與宏基因組樣本的結(jié)果進(jìn)行比對，本實驗還采用平板分離結(jié)合高通量測序分析了新鮮樣品中可培養(yǎng)菌群及25 ℃條件下腐敗的可培養(yǎng)菌群結(jié)構(gòu)。新鮮蝦夷扇貝柱可培養(yǎng)菌群的多樣性顯著低于宏基因組測序獲得的總細(xì)菌菌群，菌群結(jié)構(gòu)也顯著不同，例如可培養(yǎng)細(xì)菌中占89.46%的假交替單胞菌屬僅占總細(xì)菌菌群的1.73%。25 ℃條件下的可培養(yǎng)腐敗菌群與總腐敗菌群多樣性沒有顯著差異，優(yōu)勢菌群則不同，以弧菌屬、希瓦氏菌屬和乳酸菌屬為主。雖然不同細(xì)菌由于生長速率不同，在瓊脂平板上的菌落大小會稍有差異，提取平板上收集的菌落的基因組DNA不能準(zhǔn)確反映樣品中各種細(xì)菌的比例，但該方法省時省力，可以確定樣品中可培養(yǎng)細(xì)菌的種類，并粗略估算它們的相對豐度，結(jié)果可作為參考。

水產(chǎn)品的腐敗變質(zhì)主要是由微生物產(chǎn)生的酶對蛋白質(zhì)等的分解作用引起，在酶的作用下，蛋白質(zhì)分解為氨基酸，然后進(jìn)一步分解為胺類物質(zhì)，最后生成硫化氫、氧化三甲胺等[16]。研究表明，在水產(chǎn)品腐敗過程中只有少數(shù)部分特定種類細(xì)菌占主導(dǎo)地位，造成產(chǎn)品的腐敗劣變，這類細(xì)菌被稱為特定腐敗菌[17]。發(fā)光桿菌屬屬于變形菌門、弧菌科，竇妍等[18]的研究發(fā)現(xiàn)發(fā)光桿菌屬廣泛存在于健康和患病的蝦夷扇貝柱中，而在本實驗中，發(fā)光桿菌則主要存在于腐敗的扇貝柱中，新鮮扇貝柱中的豐度則很低，可能與不同養(yǎng)殖區(qū)域的樣品有關(guān)。有研究報道，發(fā)光桿菌能夠分解蛋白產(chǎn)生氧化三甲胺，是水產(chǎn)品的特定腐敗菌[19]，本實驗不同溫度下腐敗樣品的總菌群中，發(fā)光桿菌豐度均大于40%，表明該菌可能是蝦夷扇貝柱的特定腐敗菌。然而，測定的可培養(yǎng)細(xì)菌菌群中，發(fā)光桿菌豐度極低甚至在新鮮樣品中未檢測出，表明這類菌不易培養(yǎng)。假交替單胞菌屬是1995年從交替單胞菌屬（Alteromonas）中分出來的一個新屬[20]，該菌僅分布于海洋環(huán)境中，能產(chǎn)生蛋白酶等，已被證實是魚貝類低溫貯藏過程中的特定腐敗菌，分解水產(chǎn)品后能夠產(chǎn)生強烈的氨臭味[17,21]。但是目前關(guān)于該菌的研究，尤其在引起水產(chǎn)品腐敗變質(zhì)方面的報道較少。本實驗發(fā)現(xiàn)，假交替單胞菌屬在低溫腐敗樣品的總菌群中相對豐度較高，表明該菌較適合低溫的環(huán)境，在新鮮樣品的可培養(yǎng)菌群中相對豐度高達(dá)近90%，而在腐敗樣品中可培養(yǎng)的比例則極低，表明這類菌大部分不可培養(yǎng)。乳酸菌屬是一類可以發(fā)酵碳水化合物，并產(chǎn)生大量乳酸的細(xì)菌，廣泛存在于人和動物腸道以及食品中，多數(shù)作為益生菌使用，但實際上乳酸菌能夠分解蛋白質(zhì)以及糖類，可引起肉類的腐敗變質(zhì)[22]，但目前鮮見乳酸菌引起水產(chǎn)品腐敗的相關(guān)研究報道。本實驗中，乳酸菌在25 ℃腐敗后的總菌群和可培養(yǎng)菌群中的豐度結(jié)果一致，表明該菌可能是該溫度下的特定腐敗菌，需要進(jìn)一步實驗證實。別弧菌屬屬于變形菌門、弧菌科，據(jù)報道該菌可能引起水產(chǎn)動物的疾病[18,23]，梭桿菌屬屬于梭桿菌門、梭桿菌科，常寄生于人或動物的口腔、上消化道、腸道及泌尿生殖道和土壤中，目前鮮見別弧菌和梭桿菌引起水產(chǎn)品腐敗的相關(guān)報道，然而，扇貝柱在不同溫度下腐敗后，別弧菌在總菌群中的相對豐度均很高，在25 ℃梭桿菌的相對豐度也較高，而別弧菌在可培養(yǎng)菌群中的相對豐度則極低，梭桿菌則不可培養(yǎng)，它們是否是扇貝柱的特定腐敗菌，還需要進(jìn)一步證實。已有的報道表明，弧菌屬的細(xì)菌在海洋環(huán)境中廣泛存在，種類多，是海洋環(huán)境和生物體內(nèi)最常見的一類條件致病菌，此外，弧菌還具有較強的蛋白質(zhì)分解能力，是水產(chǎn)品的特定腐敗菌[17,24]。希瓦氏菌屬屬于變形菌門、弧菌科，能夠分解蛋白產(chǎn)生氧化三甲胺和硫化氫，造成魚、蝦、貝等水產(chǎn)品腐敗和不良?xì)馕懂a(chǎn)生，是目前研究得最多的水產(chǎn)品特定腐敗菌之一[25-28]。通過實驗發(fā)現(xiàn)，弧菌屬、希瓦氏菌屬和乳酸菌屬的細(xì)菌在蝦夷扇貝柱的可培養(yǎng)菌群中的相對豐度較高，尤其是弧菌的比例高達(dá)50%，表明這幾類細(xì)菌易培養(yǎng)分離。

蝦夷扇貝生活在海洋環(huán)境中，能夠附著或通過濾食富集海洋環(huán)境的微生物，這些微生物在加工或儲運過程中影響著產(chǎn)品的質(zhì)量安全[29-30]。本實驗通過兩種方法測定了蝦夷扇貝柱在新鮮及腐敗狀態(tài)下的總菌群結(jié)構(gòu)和可培養(yǎng)菌群結(jié)構(gòu)，兩種方法獲得的結(jié)果不同。通過平板分離獲得的可培養(yǎng)菌為活菌，可以進(jìn)一步研究菌株的致腐能力及機(jī)制，目前在防腐保鮮的研究中仍占有重要地位。基于宏基因組獲得的菌群結(jié)構(gòu)多樣性和豐度更完整地反映樣品中實際菌群的特征，但部分優(yōu)勢菌不易培養(yǎng)分離，獲得的優(yōu)勢菌群是否為特定腐敗菌還需要進(jìn)一步驗證，如果經(jīng)驗證腐敗優(yōu)勢菌與品質(zhì)劣化呈正相關(guān)性，該方法將在水產(chǎn)品的品質(zhì)變化及保鮮技術(shù)研發(fā)中得到更廣泛應(yīng)用。下一步將通過開展基于宏基因組的高通量測序技術(shù)分析蝦夷扇貝柱在腐敗過程中菌群變化與品質(zhì)下降的相關(guān)性、腐敗優(yōu)勢菌對扇貝柱的降解作用等相關(guān)研究，從而揭示微生物在蝦夷扇貝柱品質(zhì)劣化中的作用機(jī)制，并為蝦夷扇貝柱保鮮工藝的研究提供基礎(chǔ)。