宋林珍，朱麗云*，高永生,3，李素芳，張擁軍

（1.中國(guó)計(jì)量大學(xué) 海洋食品加工質(zhì)量控制技術(shù)與儀器國(guó)家地方聯(lián)合工程實(shí)驗(yàn)室，浙江 杭州 310018；2.中國(guó)計(jì)量大學(xué)現(xiàn)代科技學(xué)院，浙江 杭州 310018；3.安徽漢芳生物科技有限公司，安徽 淮北 235000）

糖尿病是一種常見的、多病因的、有遺傳傾向的內(nèi)分泌代謝紊亂性疾病[1-2]，已成為當(dāng)今威脅人類健康的第三大疾病。目前糖尿病臨床治療主要是注射胰島素、口服磺酰脲類和雙胍類降血糖藥物，從而達(dá)到降低血糖的目的。這類藥物作用強(qiáng)、見效快，但都存在不同程度的毒副作用[3]，無(wú)法從根本上阻止胰島細(xì)胞的進(jìn)一步壞死，且往往導(dǎo)致胰島素依賴。口服降糖藥物導(dǎo)致低血糖，甚至因?yàn)閲?yán)重低血糖昏迷而遺留腦功能不全后遺癥或死亡是降糖藥物的不良反應(yīng)之一，而且其危險(xiǎn)性隨著年齡的增長(zhǎng)呈指數(shù)性增加。在中國(guó)及日本民間常用粗老茶治療糖尿病[4-5]。茶多糖是茶葉中一類水溶性復(fù)合多糖，以茶葉細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)成分形式存在，已有研究表明茶多糖具有抗氧化[6-7]、抗癌[8]、免疫調(diào)節(jié)[9]和降血糖[10]等作用。Nie Shaoping等[11]的小鼠實(shí)驗(yàn)中，茶多糖飲食顯著降低了小鼠的空腹血糖指數(shù)和糖基化血清蛋白含量。Zhou Xiaoling等[12]通過高效凝膠滲透色譜分析茶多糖的分子質(zhì)量分布和組成成分，發(fā)現(xiàn)100～120 kDa級(jí)組分有降血糖活性，并推測(cè)可溶性茶多糖是茶中主要的降血糖因子。綠茶、烏龍茶、紅茶的茶多糖均具有降血糖活性[13]，且在低劑量下半發(fā)酵烏龍茶和發(fā)酵紅茶降血糖活性優(yōu)于非發(fā)酵綠茶，茶葉產(chǎn)地、種類、工藝等對(duì)降血糖作用的發(fā)揮存在影響，可能是茶多糖結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性使降血糖功能存在差異。本研究選擇浙江龍井茶葉為原料，提取并探討了茶多糖的結(jié)構(gòu)及其降糖功能特性，從動(dòng)物體內(nèi)抗氧化活性、胰島β細(xì)胞損傷修復(fù)及其胰島素分泌功能變化等角度分析茶多糖的降糖機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、材料與試劑

ICR小鼠20 只，雄性，體質(zhì)量（20.0±1.1）g，由杭州師范學(xué)院動(dòng)物中心提供。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證：SCXK（滬）2012-0002，飼養(yǎng)房溫度（23±1）℃，相對(duì)濕度（55±2）%。遵循國(guó)家及提供實(shí)驗(yàn)動(dòng)物單位的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利規(guī)則和制度。

龍井茶葉購(gòu)自杭州梅家塢；單糖標(biāo)準(zhǔn)品：鼠李糖、L-阿拉伯糖、D-葡萄糖、D-木糖、D-甘露糖、D-半乳糖、D-巖藻糖、D-葡萄糖醛酸、四氧嘧啶（alloxan，ALX）、格列本脲 美國(guó)Sigma公司；葡聚糖標(biāo)準(zhǔn)品（分子質(zhì)量分別為158 100、31 200、20 100、4 300、505、180 Da） 阿拉丁試劑（上海）有限公司；乙醇、氯化鈉、溴化鉀、硫酸、波恩試劑、石蠟、鹽酸、碳酸鋰、蘇木精、伊紅 杭州米克化工有限責(zé)任公司；胰島素定量檢測(cè)試劑盒 上海裕平生物科技有限公司；血糖測(cè)定試劑盒 北京中生生物工程技術(shù)公司；超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、谷胱甘肽還原酶（glutathione reductase，GR）、過氧化氫酶（catalase，CAT）、丙二醛（malonaldehyde，MDA）、一氧化氮（nitric oxide，NO）、一氧化氮合酶（nitricoxide synthase，NOS）檢測(cè)試劑盒 南京建成生物工程研究所。

1.2 儀器與設(shè)備

159型高效液相色譜儀、2014C氣相色譜儀 日本島津公司；I3型紫外（ultraviolet，UV）-可見分光光度計(jì) 濟(jì)南海能儀器股份有限公司；YXQ-LS-50G型立式壓力蒸汽滅菌器 上海博訊實(shí)業(yè)有限公司；DL-5M型離心機(jī) 湖南星科科學(xué)儀器有限公司；血糖監(jiān)測(cè)儀強(qiáng)生（上海）醫(yī)療器械有限公司。

1.3 方法

1.3.1 茶多糖的制備與純化

將龍井粗老茶葉粉碎，將茶粉與水以1∶20的料液比混合，80～90 ℃下恒溫水浴振蕩1～2 h，離心收集上清液，濾渣重新水提2～3 次，離心合并上清液并真空濃縮，以1∶4的體積比用乙醇溶液醇沉過夜，取沉淀干燥得粗茶多糖。取一定粗茶多糖，采用Sevag法（溶劑為氯仿-正丁醇（體積比5∶1））除去蛋白質(zhì)，重復(fù)3～5 次，直至溶液振蕩后水層上方不再有白色泡沫為止。將經(jīng)脫蛋白后的茶多糖溶解于水中，透析，經(jīng)Sephadex-G 100凝膠色譜柱分離純化后得到茶多糖溶液，50 ℃下真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮后冷凍干燥得到純化的茶多糖。

1.3.2 茶多糖分子質(zhì)量的測(cè)定

分子質(zhì)量的測(cè)定參考陳萍等[14]的高效凝膠滲透色譜法，選用TSK-GEL G4000（7.8 mm×300 mm）凝膠色譜柱，示差折光檢測(cè)器檢測(cè)，流動(dòng)相為蒸餾水，洗脫流速為0.4 mL/min，柱溫35 ℃，壓強(qiáng)60.1 MPa，進(jìn)樣量20 μL，樣品溶液用0.45 μm的濾膜過濾，洗脫液經(jīng)超聲脫氣處理。先后測(cè)定分子質(zhì)量為158 100、31 200、20 100、4 300、505、180 Da的葡聚糖，以保留時(shí)間與分子質(zhì)量的對(duì)數(shù)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。茶多糖的分子質(zhì)量以保留時(shí)間對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算。

1.3.3 茶多糖的單糖組成分析

取茶多糖20 mg溶于3 mL 2 mol/L HCl溶液，105 ℃水解4 h，55 ℃真空濃縮。衍生化處理：加入0.5 mL吡啶和10 mg鹽酸羥胺，90 ℃保溫反應(yīng)30 min，然后加入0.5 mL乙酸酐，90 ℃保溫30 min，待樣品冷卻后取上清液進(jìn)行氣相色譜分析。標(biāo)準(zhǔn)單糖烘干至質(zhì)量恒定，分別取10 mg經(jīng)衍生化處理后進(jìn)行氣相色譜分析，以標(biāo)準(zhǔn)單糖的保留時(shí)間對(duì)茶多糖中的單糖進(jìn)行定性，將標(biāo)準(zhǔn)單糖配成不同濃度進(jìn)樣，以標(biāo)準(zhǔn)單糖濃度與峰面積作標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)茶多糖中的單糖進(jìn)行定量。

氣相色譜條件：O V-1 7 0 1中等極性色譜柱（30 m×0.53 mm，1.0 μm），氫火焰檢測(cè)器，程序升溫：150 ℃（7 ℃/min）→190 ℃（15 ℃/min）→250 ℃保持7 min；進(jìn)樣量：0.1 μL，載氣流速：1.5 mL/min。

1.3.4 光譜分析

UV光譜的檢測(cè)：稱取樣品各3 mg，用蒸餾水配制成一定質(zhì)量濃度的溶液，在200～400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行全掃描。

紅外（infrared，IR）光譜分析：取茶多糖樣品1～2 mg，KBr壓片進(jìn)行IR光譜分析。光譜測(cè)定范圍4 000～400 cm-l。

1.3.5 小鼠糖尿病模型（ALX模型）的建立與分組

小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d，第4天禁食不禁水12 h，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)1% ALX-生理鹽水溶液對(duì)ALX模型組、陽(yáng)性組和藥物組小鼠進(jìn)行腹腔注射，注射劑量為200 mg/kg，陰性組注射等量生理鹽水。72 h后測(cè)血糖，以血糖濃度在11.1～25.0 mmol/L之間的小鼠為成功的ALX模型小鼠。根據(jù)小鼠血糖濃度與體質(zhì)量隨機(jī)分為4 組（陰性組、模型組、藥物組和陽(yáng)性組，每組5 只），以苦味酸為標(biāo)記物，藥物組對(duì)ALX模型小鼠每日茶多糖灌胃100 mg/kg，連續(xù)6 周，陰性組和模型組以等劑量生理鹽水灌胃，陽(yáng)性組以20 mg/kg格列本脲灌胃[9,15]。每天觀察小鼠體征，如采食、飲水、精神狀態(tài)、毛色等。

1.3.6 生理指標(biāo)測(cè)定

藥物作用6 周后，斷頸脫臼法處死小鼠，解剖取胰、腎和肝，稱質(zhì)量。分別取各組小鼠血漿、肝臟和胰臟進(jìn)行血糖濃度、肝糖原含量、胰島素水平等生化指標(biāo)的測(cè)定，實(shí)驗(yàn)設(shè)兩組平行。給藥后8.0 h尾靜脈采血，使用血糖監(jiān)測(cè)儀測(cè)定小鼠的血糖濃度。肝糖原含量采用苯酚-硫酸法測(cè)定。胰島素水平參照小鼠胰島素定量檢測(cè)試劑盒說明書進(jìn)行測(cè)定。

1.3.7 體內(nèi)抗氧化指標(biāo)測(cè)定

測(cè)定血清與肝臟的抗氧化相關(guān)指標(biāo)。SOD、GR、CAT、NOS活力和MDA、NO含量均按照試劑盒說明書的方法檢測(cè)。

1.3.8 胰島、肝臟組織切片觀察

分別取各組小鼠新鮮胰臟、肝臟浸泡于波恩試液中固定24 h，經(jīng)乙醇梯度脫水、二甲苯透明、預(yù)融的石蠟包埋、修塊、切片、固定、蘇木精-伊紅（hematoxylin and eosin，HE）染色后顯微鏡下觀察。

1.4 數(shù)據(jù)處理

采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，所有結(jié)果表示為±s。使用單因素方差分析（One-way ANOVA）進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，通過t檢驗(yàn)確定差異性，以P＜0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 凝膠柱色譜分析茶多糖分子質(zhì)量結(jié)果

圖 1 茶多糖分子質(zhì)量測(cè)定結(jié)果Fig. 1 Molecular mass determination of the polysaccharide by high performance liquid chromatography

采用凝膠色譜分析不同分子質(zhì)量的葡聚糖，以保留時(shí)間為橫坐標(biāo)，以分子質(zhì)量的對(duì)數(shù)為縱坐標(biāo)，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線y＝-0.258 4x+7.831 4，線性相關(guān)系數(shù)為0.963 9，線性良好，可滿足分子質(zhì)量測(cè)定要求。凝膠滲透法和高效液相色譜法的測(cè)定結(jié)果表明，從粗老茶葉中分離得到的水溶性多糖為均一多糖，根據(jù)保留時(shí)間（t＝10.599 3 min）從回歸方程中求得茶多糖的分子質(zhì)量為119 600 Da。

2.2 氣相色譜分析茶多糖的單糖組成結(jié)果

圖 2 標(biāo)準(zhǔn)單糖的氣相色譜測(cè)定結(jié)果Fig. 2 Gas chromatogram of monosaccharides in standard sample

如圖2所示，混標(biāo)中各單糖的出峰順序依次為D-葡萄糖醛酸、鼠李糖、D-巖藻糖、L-阿拉伯糖、D-木糖、D-甘露糖、D-葡萄糖和D-半乳糖。混標(biāo)進(jìn)樣6 次，得到其出峰時(shí)間及面積相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于5%，表明該乙?；椒尚小⒏鲉翁窍♂尦刹煌臐舛冗M(jìn)樣，得到峰面積y與濃度x的標(biāo)準(zhǔn)曲線如下：D-葡萄糖醛酸：y＝4 207.80x-528.77，R2＝0.997 4；鼠李糖：y＝56 047.0x+5 347.6，R2＝0.998 5；D-巖藻糖：y＝88 196.0x-6 171.4，R2＝0.997 4；L-阿拉伯糖：y＝46 820.0x+2 713.9，R2＝0.999 0；D-木糖：y＝55 832.0x-2 590.0，R2＝0.996 4；D-甘露糖：y＝84 690.0x-2 731.0，R2＝0.999 9；D-葡萄糖：y＝90 347x-12 953，R2＝0.995 7；D-半乳糖：y＝82 177x-10 792，R2＝0.995 9。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得到D-葡萄糖醛酸、鼠李糖、D-巖藻糖、L-阿拉伯糖、D-木糖、D-甘露糖、D-葡萄糖和D-半乳糖的濃度分別為2.915、0.089、0.488、0.727、0.343、0.212、1.373、0.672 mmol/mL。

圖 3 茶多糖的單糖組成氣相色譜測(cè)定結(jié)果Fig. 3 Gas chromatogram of monosaceharides in the polysaccharide

如圖3所示，根據(jù)各峰保留時(shí)間對(duì)應(yīng)各單糖標(biāo)準(zhǔn)品，可知茶多糖由D-葡萄糖醛酸、鼠李糖、D-巖藻糖、L-阿拉伯糖、D-木糖、D-甘露糖、D-葡萄糖和D-半乳糖8 種單糖組成，根據(jù)各單糖的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得到各單糖的物質(zhì)的量比為32.61∶1.00∶5.46∶8.13∶3.84∶2.37∶15.36∶7.52。

2.3 UV和IR光譜結(jié)果

圖 4 茶多糖的UV光譜掃描結(jié)果Fig. 4 UV absorption spectrum of the polysaccharide

由圖4可知，在220～400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)，多糖溶液的吸光度呈下降趨勢(shì)。在280 nm和260 nm波長(zhǎng)處基本沒有吸收峰，說明本實(shí)驗(yàn)分離得到的茶多糖不含蛋白質(zhì)和核酸。

圖 5 茶多糖的IR掃描結(jié)果Fig. 5 IR spectrum of the polysaccharide

樣品在4 000～400 cm-1區(qū)具有多糖類物質(zhì)的一般特征峰（圖5），在3 423.36、2 939.52、2 345.44、1 737.86、1 622.13、1 431.18、1 247.94、1 085.00、1 022.99 cm-1處均有特征吸收。3 423 cm-1附近的強(qiáng)寬譜帶是多糖分子中羥基的伸縮振動(dòng)吸收峰；2 345 cm-1處為CO2氣體的伸縮振動(dòng)引起的雜峰；2 939 cm-1附近的吸收峰是甲基或亞甲基的C—H伸縮振動(dòng)峰；在1 622 cm-1處的寬帶與吸收的水相關(guān)，表明茶多糖對(duì)水分子具有較強(qiáng)的親和力；在1 450～1 200 cm-1之間的峰是C—H的變角振動(dòng)，與C—H的伸縮振動(dòng)構(gòu)成了糖環(huán)的特征吸收；1 075 cm-1處為主鏈上的半乳糖吡喃環(huán)的伸縮振動(dòng)；1 025 cm-1處為側(cè)鏈阿拉伯呋喃環(huán)；1 730 cm-1附近為糖醛酸的特征吸收峰。IR測(cè)定結(jié)果與糖醛酸氣相色譜測(cè)定結(jié)果一致，表明茶多糖很可能為一種酸性雜多糖。

2.4 各組小鼠生化指標(biāo)的測(cè)定結(jié)果

由表1可知，造模后小鼠出現(xiàn)了多飲、多食、多尿的狀況，飼養(yǎng)6 周后體質(zhì)量沒有明顯增加，并有反應(yīng)相對(duì)遲鈍、被毛雜亂無(wú)光等癥狀，在給予200 mg/（kg·d）茶多糖治療后小鼠以上癥狀得到改善，且血糖濃度降為正常水平。陰性組小鼠體質(zhì)量增加顯著，并呈現(xiàn)肥胖狀態(tài)，飼養(yǎng)6 周后血糖濃度有所增加。陰性組、模型組和藥物組小鼠經(jīng)6 周飼養(yǎng)后肝臟質(zhì)量無(wú)顯著差異性（P＞0.05），而藥物組小鼠肝糖原含量顯著升高（P＜0.05），達(dá)到41.62 mg/g肝質(zhì)量，表明茶多糖在降低糖尿病小鼠血糖濃度的同時(shí)促進(jìn)葡萄糖轉(zhuǎn)變?yōu)楦翁窃ＤＰ徒M小鼠胰臟質(zhì)量與陰性組、藥物組小鼠無(wú)顯著差異，但血漿中胰島素水平均顯著低于陰性組和藥物組小鼠（P＜0.05），可能是ALX在體內(nèi)能選擇性地作用于小鼠的胰島β細(xì)胞，所產(chǎn)生的過量自由基能破壞β細(xì)胞的結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致小鼠的胰腺腫脹肥大、損傷和壞死，使胰島素水平降低，而藥物組茶多糖可能對(duì)胰臟存在保護(hù)作用。

表 1 各組小鼠生化指標(biāo)測(cè)定結(jié)果Table 1 Biochemical parameters of mice from different groups

2.5 各組小鼠生化指標(biāo)的測(cè)定結(jié)果

表 2 茶多糖對(duì)糖尿病小鼠血清及肝臟中抗氧化指標(biāo)的影響Table 2 Effect of the polysaccharide on antioxidant indexes in serum and liver of diabetic mice

如表2所示，藥物組和陽(yáng)性組小鼠血清中GR、SOD和CAT活力均高于模型組，與模型組相比，藥物組和陽(yáng)性組的SOD活力顯著升高（P＜0.05），且與陰性組無(wú)顯著差異。而GR和CAT活力各組間均無(wú)顯著差異。

肝臟是動(dòng)物和人體內(nèi)最重要的器官，它是糖類、脂肪、蛋白等代謝的最主要的場(chǎng)所之一。肝臟能促進(jìn)糖原合成、利用葡萄糖，對(duì)糖異生等途徑有抑制作用，從而使血糖降低，還能清除體內(nèi)毒素及促進(jìn)分泌性蛋白質(zhì)合成。

GR、SOD和CAT是肝臟中主要的抗氧化活性酶，從表2中可知，茶多糖藥物組小鼠肝臟中GR、CAT和SOD活力均顯著高于模型組及陰性組（P＜0.05）。NOS活力的升高將導(dǎo)致NO含量的增加。NO和MDA是肝臟中主要的有毒氧化產(chǎn)物，這兩個(gè)指標(biāo)在模型組中達(dá)到最高，說明模型組小鼠在ALX作用下可能引起肝損傷，影響肝臟功能。而經(jīng)過茶多糖或陽(yáng)性藥物治療的小鼠肝臟中NOS活力和MDA含量接近正常組水平，且NO含量顯著低于模型組（P＜0.05），說明茶多糖和陽(yáng)性藥物發(fā)揮了抗氧化的作用，可能與GR、SOD和CAT活力的升高有關(guān)。由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，茶多糖藥物組和陽(yáng)性組小鼠均具有較好的體內(nèi)抗氧化效果。

2.6 茶多糖對(duì)小鼠胰島組織、肝臟的影響

ALX進(jìn)入機(jī)體內(nèi)可迅速被β細(xì)胞攝取，產(chǎn)生氧自由基，選擇性地?fù)p傷多種動(dòng)物的胰島β細(xì)胞，引起實(shí)驗(yàn)性糖尿病。糖尿病小鼠胰島結(jié)構(gòu)被明顯破壞，胰島細(xì)胞明顯減少，胰島β細(xì)胞的細(xì)胞器明顯受損、分泌顆粒明顯減少，胰島素分泌降低。

胰島細(xì)胞為胰腺的內(nèi)分泌細(xì)胞，分布于腺泡之間，HE染色切片中胰島色淺，為球形的細(xì)胞團(tuán)，細(xì)胞間毛細(xì)血管豐富。陰性組胰島組織學(xué)檢查顯示外分泌腺中腺泡細(xì)胞的結(jié)構(gòu)正常，內(nèi)分泌區(qū)域的胰島外觀完整，胰島細(xì)胞內(nèi)的小深藍(lán)紫色顆粒和少量粉紅色顆粒分布一致（圖6A）。模型組與陽(yáng)性組胰島細(xì)胞結(jié)構(gòu)不清，胰腺具有許多不規(guī)則的腺泡細(xì)胞，出現(xiàn)空泡化和細(xì)胞壞死（圖6B、D）。藥物組胰島細(xì)胞排列成團(tuán)狀，細(xì)胞圓潤(rùn)飽滿，從圖6C中可看出已得到修復(fù)。

圖 7 茶多糖對(duì)小鼠肝臟組織形態(tài)的影響（×100）Fig. 7 Effect of the polysaccharide on liver tissue morphology in mice (× 100)

如圖7所示，正常組與藥物組肝細(xì)胞體積大、胞質(zhì)豐富、HE染色較紅，胞質(zhì)內(nèi)含有粒狀或小塊狀的嗜堿性物質(zhì)。而模型組肝細(xì)胞呈現(xiàn)碎片狀，有部分壞死現(xiàn)象。

3 討 論

3.1 茶多糖的分子結(jié)構(gòu)

多糖結(jié)構(gòu)與功能的研究中，一般結(jié)構(gòu)上從多糖分子質(zhì)量范圍、單糖組成、糖鏈中糖苷鍵連接類型和連接順序等一級(jí)結(jié)構(gòu)著手，進(jìn)一步分析單糖殘基類型、主鏈和支鏈組成與連接位點(diǎn)、重復(fù)單元等多糖結(jié)構(gòu)[16-17]。Wang Yuanfeng等[18]發(fā)現(xiàn)茶葉多糖分子質(zhì)量分布范圍分別為3.67×103～7.58×105Da，與本研究所測(cè)茶多糖分子質(zhì)量約為119 600 Da基本一致。倪德江等[19]認(rèn)為烏龍茶多糖是富含糖醛酸和少量蛋白質(zhì)的三元糖復(fù)合物，相對(duì)分子質(zhì)量為8.877×104，糖基由半乳糖、葡萄糖、阿拉伯糖、巖藻糖和鼠李糖組成，與本研究中茶多糖的單糖組成存在差異性，可能為原料來源和提取方法不同所致。多糖的相對(duì)分子質(zhì)量、單糖組成等基本理化參數(shù)對(duì)多糖的結(jié)構(gòu)起基礎(chǔ)性決定作用，與其生物活性緊密相關(guān)[20]，即使同一來源原料后續(xù)純化方法不同，也會(huì)獲得理化特性各異的茶多糖（組分），從而造成其生物活性的差異，這是茶多糖純化及生物活性研究中探索其組效關(guān)系和構(gòu)效關(guān)系方面值得注意的環(huán)節(jié)。

3.2 天然多糖降血糖活性與機(jī)制

ALX在體內(nèi)能選擇性地作用于小鼠胰島β細(xì)胞，所產(chǎn)生的過量自由基能破壞β細(xì)胞的結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致小鼠的胰腺損傷和壞死，胰島素水平降低，出現(xiàn)糖尿病癥狀[21]。根據(jù)文獻(xiàn)[15,22]報(bào)道，多糖的降糖主要作用機(jī)制為降低肝糖原含量、刺激胰島素分泌、調(diào)節(jié)機(jī)體代謝相關(guān)酶活力（如與抑制葡萄糖運(yùn)轉(zhuǎn)載體競(jìng)爭(zhēng)；使α-淀粉酶、蔗糖酶活力降低；α-葡萄糖苷酶對(duì)糖原異生與分解的調(diào)節(jié)[23]；6-磷酸葡萄糖苷酶體系的作用等），或者通過減弱氧化應(yīng)激等方面來發(fā)揮有益作用。

本研究從龍井粗老茶葉中提取、純化獲得的茶多糖通過灌胃給藥取得了較好的降糖效果，經(jīng)過42 d作用后，藥物組小鼠血糖濃度從18.98 mmol/L降為5.80 mmol/L，達(dá)到正常范圍（3.90～6.20 mmol/L），與陰性組無(wú)顯著差異（P＞0.05），表現(xiàn)出茶多糖極好的降血糖活性，與江和源等[24]的研究結(jié)果相似。Niedowicz等[25]報(bào)道糖尿病患者和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型均顯示持續(xù)性和慢性高血糖癥引起高氧化應(yīng)激，使抗氧化防御系統(tǒng)活性下降并促進(jìn)自由基產(chǎn)生?？寡趸瘎┍徽J(rèn)為通過抑制過氧化反應(yīng)鏈來減輕β細(xì)胞的破壞[26]，與本研究中茶多糖具有促進(jìn)ALX糖尿病小鼠胰島β細(xì)胞的修復(fù)、胰島素分泌增加、肝臟SOD、CAT和GR活力提高、保護(hù)肝臟組織免受ALX引起的氧化損傷的功能的研究結(jié)果一致。胰島β細(xì)胞功能異常和凋亡是糖尿病發(fā)病過程中的關(guān)鍵步驟[27-29]，改善β細(xì)胞功能、促進(jìn)β細(xì)胞再生應(yīng)是糖尿病治療的重點(diǎn)。從胰島組織切片結(jié)果觀察，茶多糖藥物組胰島細(xì)胞排列成團(tuán)狀，細(xì)胞圓潤(rùn)飽滿，顯著修復(fù)了模型組胰島β細(xì)胞結(jié)構(gòu)不清、胰腺具有許多不規(guī)則的腺泡細(xì)胞、出現(xiàn)空泡化和細(xì)胞壞死等病理形態(tài)，預(yù)示茶多糖對(duì)胰島細(xì)胞的修復(fù)及胰島素分泌具有積極的作用。

茶多糖在體內(nèi)的降血糖活性受到許多因素的影響，包括化學(xué)成分、分子質(zhì)量、糖苷鍵的配置和位置、分支點(diǎn)和單糖序列[30]，以及劑量、用藥時(shí)間和作用途徑等，茶多糖的吸收方式及降糖作用靶點(diǎn)等有待于進(jìn)一步研究。