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        探討血液中乙醇檢測方法

        2018-10-21 04:09:36莫乃梅
        健康科學(xué) 2018年11期
        關(guān)鍵詞:重鉻酸鉀乙醛酶法

        莫乃梅

        關(guān)鍵詞:血液;乙醇;化學(xué)法;酶法;氣相色譜法;氣相色譜- 質(zhì)譜法;近紅外光譜法

        乙醇(分子式C2H6O)俗稱酒精,是酒的主要成分,乙醇進(jìn)入空胃后,可于30min~90min內(nèi)在胃及腸道內(nèi)被完全吸收入血,15min~90min內(nèi),血液中酒精濃度值(bloodalcoholconcentration,BAC)可達(dá)到峰值。其代謝主要是在肝臟內(nèi)被氧化分解,少部分以原形經(jīng)呼吸道、尿、汗直接排出體外。急性乙醇中毒多是暴飲、酗酒所致,也有少數(shù)把毒物投入酒中而造成中毒,需檢查酒精。乙醇的毒性主要是能嚴(yán)重地抑制中樞神經(jīng)系統(tǒng),首先是大腦功能,繼而皮層下中樞和小腦活動受累,最后因延腦血管運(yùn)動中樞和呼吸中樞麻痹而死亡。隨著科學(xué)的發(fā)展,血液中乙醇含量的檢測方法層出不窮,大體上有化學(xué)法、酶法,氣相色譜法、氣相色譜-質(zhì)譜法和近紅外光譜法等,現(xiàn)就這些方法在血液中乙醇含量檢測方面作一綜述。

        1、化學(xué)法

        化學(xué)法分為定性方法和定量方法。定性方法主要是碘仿反應(yīng)法,它的原理是乙醇與碘及氫氧化鉀反應(yīng),首先生成次碘酸鉀(KIO),然后由乙醇氧化的乙醛再與之作用,生成三碘乙醛,最后與過量的氫氧化鉀反應(yīng)生成黃色的碘仿沉淀。碘仿反應(yīng)法靈敏度為1:1000,但其反應(yīng)并非為乙醇特異反應(yīng),乙醛、丙酮甲基酮及能被次碘酸鹽氧化為乙醛或甲基酮的醇均能產(chǎn)生同樣反應(yīng)。另外化學(xué)定性的方法還可以通過苯酰氯反應(yīng)和Vitali反應(yīng)來檢測檢樣有沒有乙醇。定量方法主要有威得馬克(Widmark)氏法和重鉻酸鉀法,威得馬克(Widmark)氏法是利用Widmark乙醇定量瓶,將血液加熱60℃使乙醇揮發(fā),揮發(fā)出來的乙醇被重鉻酸鉀-硫酸混合液吸收,并使乙醇氧化成乙酸,用硫代硫酸鈉滴定由于剩余重鉻酸鉀將碘化鉀氧化所游離出來的碘,從而計(jì)算出乙醇含量。重鉻酸鉀法的原理是醇和重鉻酸鉀作用,使黃紅色的六價(jià)鉻變?yōu)榫G色的三價(jià)鉻,與標(biāo)準(zhǔn)比色定量。這兩個(gè)化學(xué)定量方法易受甲醛、甲醇等其它還原性物質(zhì)的干擾。左保林對人血中乙醇含量的分光光度法檢測中提到血液經(jīng)三氯乙酸沉淀蛋白、離心后取1ml加重鉻酸鉀-硫酸試劑,再經(jīng)100℃水浴10min后冷卻至室溫,在595nm處測吸光度值,其方法人血中乙醇含量在0μl/100ml~600μl/100ml時(shí)有良好線性關(guān)系,在檢案中要對血中乙醇進(jìn)行定性結(jié)果才可靠,所配的重鉻酸鉀濃度太低會使高含量乙醇血反應(yīng)不完全而至結(jié)果偏低。化學(xué)方法不需要特別精密和昂貴的儀器,成本低,在一般的實(shí)驗(yàn)室也可以完成檢測,容易普及,但是方法靈敏度低,易受干擾,準(zhǔn)確度低,已逐漸被淘汰了。

        2、酶法

        酶法的原理是血液樣本中的乙醇分別被乙醇脫氫酶(ADH)和乙醛脫氫酶(ALDH)催化,同時(shí)產(chǎn)生還原型輔酶(NADH),通過測定NADH在340nm處的吸光度值,定量測算乙醇含量。本方法的檢體一般要用全血,如用血清或血漿,測定結(jié)果要偏高10%,酶法易受酶的保存和反應(yīng)溫度等實(shí)驗(yàn)條件的影響,某些藥物、人體內(nèi)的乳酸和乳酸脫氫酶、相關(guān)的醇類化合物(例如異丙醇等)也會對實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生影響。胡云良等通過改良乙醇脫氫酶法測定血清中微量乙醇,方法:選擇Tris-HCl緩沖液作為乙醇脫氫酶法測定乙醇的反應(yīng)條件,通過優(yōu)化反應(yīng)體系及自動生化分析儀分析參數(shù),采用兩點(diǎn)終點(diǎn)法對乙醇進(jìn)行檢測,線性范圍可達(dá)1200mg/L,批內(nèi)變異系數(shù)(CV)小于2.8%,批間變異系數(shù)(CV)小于3.9%,平均回收率為99.8%。膽紅素159.1mol/L、甘油三酯7.4mmol/L、血紅蛋白11.6g/L、乙醛0.3g/L、異丙醇0.2g/L、甲醇0.7g/L、甲醛0.6g/L以下對此法測定乙醇結(jié)果無明顯干擾,此法測定血清中乙醇無需除蛋白,具有快速、簡便、靈敏、特異等優(yōu)點(diǎn),適合于自動生化分析儀檢測。

        3、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法

        氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀是利用氣相色譜對混合物的高效分離能力和質(zhì)譜對經(jīng)純化的物質(zhì)的準(zhǔn)確鑒定能力而開發(fā)的分析儀器。GC/MS法的原理是經(jīng)氣相色譜分離出來的組分在質(zhì)譜儀的離子源中發(fā)生電離,生成不同荷質(zhì)比的帶正電荷的離子,經(jīng)加速電場的作用,形成離子束,進(jìn)入質(zhì)量分析器,通過測量離子荷質(zhì)比(電荷-質(zhì)量比)來確定物質(zhì)的含量周枝鳳用自動頂空-氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用檢測血液中乙醇含量,使用乙醇的特征離子(m/z)有:45,46,31,29,所用方法的線性范圍為0.01g/L~10.00g/L,檢出限(3S/N)為0.6mg/L,測定下限(10S/N)為1.0mg/L乙醇的回收率在92%~105%之間,測定值的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(n=6)小于7%氣相色譜-質(zhì)譜(GC-MS)聯(lián)用法結(jié)合了色譜定量和質(zhì)譜定性的強(qiáng)大功能,快速、簡單、靈敏、特異性強(qiáng),已廣泛用于分析揮發(fā)性有機(jī)物,但是方法的檢出限比不上頂空氣相色譜法,而且氣相色譜-質(zhì)譜儀比較昂貴,維護(hù)保養(yǎng)麻煩,不能普及使用。

        4、小結(jié)

        綜上所述,在血液中乙醇含量檢測的方法中,不同發(fā)展階段和不同實(shí)驗(yàn)室發(fā)揮了不同的作用。為今后的鑒定工作提供方法和數(shù)據(jù),及參考價(jià)值。

        參考文獻(xiàn):

        [1]白路,廖林川,顏有儀,等.乙醇相關(guān)問題的綜合探討[J].刑事技術(shù),2004,(2) : 25 -27.

        [2]劉志民.現(xiàn)代實(shí)用毒物分析[M].北京: 人民衛(wèi)生出版社, 1984:111 - 122.

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