周政

[摘要]目的：對(duì)多種測(cè)序技術(shù)進(jìn)行研究，探究多種測(cè)序技術(shù)在藥品檢測(cè)環(huán)境微生物鑒定分析中的作用。方法：在12個(gè)月中對(duì)微生物實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行連續(xù)的樣本采集，共采集了10株細(xì)菌和11株霉菌，把采集的細(xì)菌和霉菌采用一代測(cè)序技術(shù)、生化鑒定技術(shù)分別進(jìn)行測(cè)定，將這兩種方法所得的結(jié)果進(jìn)行交叉對(duì)比分析，保證是研究結(jié)果的準(zhǔn)確。結(jié)果：通過(guò)對(duì)一代測(cè)序技術(shù)和生化鑒定技術(shù)測(cè)定的測(cè)定結(jié)果的比較，發(fā)現(xiàn)了4株水平分類的細(xì)菌；通過(guò)生化鑒定測(cè)得了5株霉菌的信息；一代測(cè)序測(cè)得4株霉菌的信息，一代測(cè)序比生化鑒定少測(cè)了一種霉菌；結(jié)論：通過(guò)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的對(duì)比可知生化鑒定技術(shù)在鑒定特異性菌種時(shí)有著不俗的表現(xiàn)，但鑒定特異性不強(qiáng)的菌種時(shí)準(zhǔn)確率不高；一代測(cè)序技術(shù)可以對(duì)菌株進(jìn)行基因測(cè)序，但在特異性區(qū)分時(shí)不如生化測(cè)定的效果好，所以為了保證藥品生產(chǎn)時(shí)的安全，減少藥品被污染的可能性我們可以利用多種測(cè)序技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)結(jié)果的交叉對(duì)比，從而更好的對(duì)藥品檢測(cè)環(huán)境進(jìn)行微生物的鑒定分析，降低微生物污染。

[關(guān)鍵詞]多種測(cè)序技術(shù) 藥品檢測(cè)環(huán)境微生物鑒定分析 應(yīng)用

在藥品生產(chǎn)中很容易出現(xiàn)微生物污染藥品的情況，微生物污染藥品會(huì)對(duì)藥品的臨床作用造成影響，不利于病人的治療。但由于醫(yī)療技術(shù)和經(jīng)濟(jì)基礎(chǔ)的局限在生產(chǎn)藥品時(shí)很難做到無(wú)菌生產(chǎn)，而且在藥品生產(chǎn)的合格標(biāo)準(zhǔn)是對(duì)空氣中的浮游細(xì)菌的數(shù)量進(jìn)行判斷。這種標(biāo)準(zhǔn)很難查找細(xì)菌的源頭，不能從源頭上對(duì)細(xì)菌進(jìn)行控制，隨著生物學(xué)和分子學(xué)的共同發(fā)展，涌現(xiàn)了很多先進(jìn)的微生物測(cè)定方法，新一代的測(cè)序技術(shù)也開始出現(xiàn)，在微生物的測(cè)定和分析領(lǐng)域得到了很大的進(jìn)步，所以為了增加微生物檢測(cè)的準(zhǔn)確度，在進(jìn)行微生物檢測(cè)時(shí)逐步開始使用多種測(cè)序技術(shù)對(duì)藥品生產(chǎn)環(huán)境進(jìn)行檢測(cè)，并將檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行交叉對(duì)比來(lái)獲取最終的微生物檢測(cè)結(jié)果。本文通過(guò)多種測(cè)序技術(shù)進(jìn)行探究，利用多種測(cè)序技術(shù)對(duì)藥品生產(chǎn)環(huán)境中的微生物數(shù)量進(jìn)行測(cè)定，探討多種測(cè)序技術(shù)在藥品檢測(cè)中微生物含量檢測(cè)中應(yīng)用的意義，為藥品生產(chǎn)中減少細(xì)菌污染提供一定的技術(shù)支持。

一、資料與方法

（一）資料數(shù)據(jù)

本次實(shí)驗(yàn)中所應(yīng)用的菌種由本院微生物實(shí)驗(yàn)室不同的研究員在不同的位置使用胰蛋白胨大豆瓊脂平板進(jìn)行采集。本次實(shí)驗(yàn)所使用的菌株是本院在12個(gè)月內(nèi)所采集的，共采集了10株細(xì)菌和11株霉菌，所有的菌株標(biāo)本在采集后都經(jīng)過(guò)了純化，標(biāo)本不存在相互污染的現(xiàn)象。

（二）方法

采用一代測(cè)序技術(shù)、生化鑒定技術(shù)分別進(jìn)行測(cè)定，將這兩種方法所得的結(jié)果進(jìn)行交叉對(duì)比分析。

（1）生化鑒定技術(shù)測(cè)定：首先對(duì)10株細(xì)菌進(jìn)行常規(guī)的生化檢測(cè)，在對(duì)10株細(xì)菌樣本進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，檢測(cè)操作嚴(yán)格遵守相關(guān)規(guī)定和說(shuō)明書。

（2）一代測(cè)序技術(shù)：首先要對(duì)所有菌株的DNA進(jìn)行擴(kuò)增鑒定，在操作過(guò)程中要嚴(yán)格按照操作標(biāo)準(zhǔn)和基因分析鑒定系統(tǒng)的試劑、說(shuō)明書進(jìn)行操作。在操作時(shí)要對(duì)菌株的DNA進(jìn)行提、擴(kuò)增和純化，利用數(shù)據(jù)庫(kù)中的菌株信息對(duì)10個(gè)菌株的種屬進(jìn)行對(duì)比鑒定。

將所有的菌株按照以上兩種方式進(jìn)行測(cè)定，對(duì)這兩種方式進(jìn)行分析，確定鑒定結(jié)果的科學(xué)有效。

（三）評(píng)價(jià)指標(biāo)

使用兩種方法對(duì)10株細(xì)菌和11株霉菌的種屬進(jìn)行測(cè)定，驗(yàn)證多種測(cè)序技術(shù)的有效性。

二、結(jié)果

（1）細(xì)菌的種屬測(cè)定結(jié)果：把一代測(cè)序技術(shù)和生化鑒定技術(shù)測(cè)定的測(cè)定結(jié)果進(jìn)行交叉比較發(fā)現(xiàn)，有4株水平分類的細(xì)菌；

（2）霉菌的種屬測(cè)定結(jié)果：通過(guò)生化鑒定測(cè)得了5株霉菌的信息；一代測(cè)序測(cè)得了4株霉菌的信息，比生化鑒定少測(cè)了一種霉菌；

三、討論

目前的藥品生產(chǎn)企業(yè)在生產(chǎn)藥品時(shí)很容易出現(xiàn)藥品被微生物污染的情況，藥品被微生物污染會(huì)嚴(yán)重影響藥品的質(zhì)量，如果患者服用被污染過(guò)的藥物不僅不能治療自身的疾病而且還有可能會(huì)引發(fā)并發(fā)癥，威脅自身的健康。所以對(duì)藥品生產(chǎn)進(jìn)行監(jiān)管是十分重要的，但由于醫(yī)療技術(shù)和經(jīng)濟(jì)基礎(chǔ)的局限在生產(chǎn)藥品時(shí)很難做到無(wú)菌生產(chǎn)，而且在藥品生產(chǎn)的合格標(biāo)準(zhǔn)水對(duì)空氣中的浮游細(xì)菌的數(shù)量進(jìn)行判斷的，這種檢驗(yàn)保準(zhǔn)有很大的漏洞，不能保證藥品不受污染。通過(guò)本文的研究發(fā)現(xiàn)，不同的微生物檢測(cè)技術(shù)都有著自己的優(yōu)勢(shì)和弱項(xiàng)，通過(guò)對(duì)多種測(cè)序技術(shù)的結(jié)果進(jìn)行交叉對(duì)比可以嘉禾每種衛(wèi)生我檢測(cè)技術(shù)的優(yōu)勢(shì)和弱勢(shì)進(jìn)行優(yōu)勢(shì)互補(bǔ)，從而更好的檢測(cè)藥品生產(chǎn)環(huán)境中微生物的數(shù)量，降低藥品被微生物污染的概率提高藥品安全。本文通過(guò)對(duì)多種測(cè)序技術(shù)在藥品檢測(cè)環(huán)境中進(jìn)行微生物鑒定分析得知，生化鑒定技術(shù)在鑒定特異性菌種時(shí)準(zhǔn)確率很高，但鑒定特異性不強(qiáng)的菌種時(shí)準(zhǔn)確率不高；一代測(cè)序技術(shù)可以對(duì)菌株進(jìn)行基因測(cè)序，但對(duì)菌種進(jìn)行特異性區(qū)分時(shí)不如生化測(cè)定的效果好。所以，在對(duì)藥品檢測(cè)環(huán)境中進(jìn)行微生物鑒定分析時(shí)可以將多種測(cè)序技術(shù)進(jìn)行應(yīng)用，上文提及的兩種微生物檢測(cè)方法各有優(yōu)劣，通過(guò)交叉檢測(cè)可以使這兩種方式進(jìn)行互補(bǔ)，提高檢測(cè)精度。