周智麗 林學(xué)正
【摘 要】目的:探討丙泊酚對(duì)hERG鉀通道及其突變體的抑制作用。方法:利用PCR定點(diǎn)突變技術(shù),全細(xì)胞膜片技術(shù),觀察丙泊酚對(duì)野生型hERG鉀通道的抑制作用對(duì)照組,觀察丙泊酚對(duì)突變型hERG鉀通道的抑制作為研究組。結(jié)果:丙泊酚濃度在60μM以上時(shí),會(huì)對(duì)野生型hERG鉀通道起到抑制作用,當(dāng)濃度在14.28μM以上時(shí)就會(huì)對(duì)突變型hERG鉀通道起到一定的抑制作用,當(dāng)丙泊酚的濃度對(duì)兩組的hERG鉀通道都起到抑制作用是,相同濃度的丙泊酚對(duì)研究組的突變hERG鉀通道抑制能力會(huì)增加。結(jié)論:當(dāng)丙泊酚達(dá)到一定濃度時(shí)對(duì)野生型hERG鉀通道和突變hERG鉀通道都會(huì)產(chǎn)生一定的抑制作用,需要在臨床應(yīng)用中進(jìn)行下一步研究。
【關(guān)鍵詞】丙泊酚;hERG鉀通道;突變;抑制
丙泊酚,也有人會(huì)稱其為異丙酚,是目前臨床上比較常用的全身性麻醉劑,有學(xué)者指出使用丙泊酚進(jìn)行麻醉會(huì)導(dǎo)致患者在進(jìn)行手術(shù)的時(shí)候會(huì)出現(xiàn)心電圖QT間期延長(zhǎng)的情況,所以就會(huì)導(dǎo)致出現(xiàn)在手術(shù)中心臟瘁死或發(fā)作性昏厥的醫(yī)療事故,但是關(guān)于丙泊酚的說(shuō)法并不是很一致,而且有學(xué)者提出使用丙泊酚不僅不會(huì)延長(zhǎng)心電圖的QT間期,還會(huì)起到一定的縮減作用,但是這些研究往往是在和其他藥物一起使用的基礎(chǔ)上進(jìn)行的,我們很難準(zhǔn)確的判定是不是因?yàn)楸捶赢a(chǎn)生的影響[1]。我們提出丙泊酚對(duì)心電圖QT間期的影響可能是因?yàn)閔ERG鉀通道受到抑制導(dǎo)致的,所以我們進(jìn)行的研究就是觀察丙泊酚對(duì)hERG鉀通道的抑制作用進(jìn)行探析。為今后丙泊酚在臨床上的應(yīng)用提供依據(jù)。
1 資料與方法
1.1材料
野生型hERG基因和突變型hERG基因,野生型hERG基因由英國(guó)醫(yī)科大學(xué)William JaffersonClinton教授惠贈(zèng),批號(hào)U13451260003,細(xì)胞株24;突變型hERG基因由美國(guó)加利福尼亞研究所惠贈(zèng),批號(hào)U13452000347,細(xì)胞株24。
1.2方法
利用PCR定點(diǎn)突變技術(shù),全細(xì)胞膜片技術(shù),觀察丙泊酚對(duì)野生型hERG鉀通道的抑制作用對(duì)照組,觀察丙泊酚對(duì)突變型hERG鉀通道的抑制作為研究組,以相同濃度的丙泊酚加入研究組與對(duì)照組。
1.3觀察指標(biāo)
觀察不同濃度的丙泊酚對(duì)hERG鉀通道的影響,在相同濃度是丙泊酚對(duì)野生型hERG鉀通道和突變型hERG鉀通道的影響。
1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS18.0進(jìn)行分析,其中計(jì)數(shù)進(jìn)行X2(%)檢驗(yàn),計(jì)量進(jìn)行t檢測(cè)(x±s)檢驗(yàn), P<0.05提示有顯著差異。
2 結(jié)果
2.1 不同濃度的丙泊酚對(duì)hERG鉀通道的影響,詳情見表1。
2.2 丙泊酚對(duì)野生型和突變型hERG鉀通道抑制率的影響,詳情見表2。
3 討論
篩選安全有效的臨床藥物為治療心律失常已經(jīng)成為當(dāng)今醫(yī)療界最熱門的研究課題,我國(guó)藥監(jiān)局也曾頒布過《化學(xué)藥物一般藥理學(xué)研究技術(shù)指導(dǎo)原則》,也曾明確的表示過,對(duì)于可以引起人類QT間期延長(zhǎng)的化合類藥物應(yīng)該需要進(jìn)行進(jìn)一步的研究,觀察藥物對(duì)人類QT間期的影響程度[2]。由此可以看出,目前化合物藥物對(duì)hERG鉀通道的影響已經(jīng)非常受到醫(yī)藥界的重視,這就使得對(duì)藥物是否真正影響QT間期以及所存在的風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行評(píng)估是非常有臨床價(jià)值的。臨床上對(duì)于hERG鉀通道的應(yīng)用不僅可以幫助我們開發(fā)安全有效的藥物,還可以幫助我們理解目前已經(jīng)在臨床應(yīng)用中治療心率失衡的藥物出現(xiàn)不良反應(yīng)的原因[3]?,F(xiàn)在醫(yī)藥學(xué)者主要提出了兩個(gè)藥物抑制hERG鉀通道的機(jī)制:一個(gè)是直接影響hERG鉀通道,減少鉀離子的外流;另外抑制是對(duì)hERG鉀通道慢性抑制作用,可以通過抑制hERG蛋白的方式減少鉀離子的外流。過此次研究發(fā)現(xiàn),丙泊酚可以直接抑制hERG鉀通道,控制鉀離子的外流,而且使用丙泊酚抑制hERG鉀通道具有濃度和時(shí)間的依賴性,丙泊酚的使用不會(huì)改變hERG鉀通道的特性。而研究的結(jié)果表明丙泊酚對(duì)hERG蛋白質(zhì)并沒有影響,這就說(shuō)明了丙泊酚只是單純的對(duì)抑制hERG鉀通道有作用。
曾經(jīng)有人拿蟾卵細(xì)胞做過實(shí)驗(yàn),提出只有高濃度的丙泊酚才能對(duì)hERG鉀通道起到抑制作用,但這有可能是因?yàn)樵谠囼?yàn)是選擇的細(xì)胞模型有關(guān)。目前丙泊酚在臨床治療的應(yīng)用中,一般使用后的血藥濃度為2.1-5.0μg/ml,也就是11-25μM,但是我們研究測(cè)得對(duì)hERG鉀通道起到抑制作用的濃度為60μM以上,所以在對(duì)丙泊酚的臨床應(yīng)用中要注意使用的濃度,防止出現(xiàn)丙泊酚對(duì)QT間期產(chǎn)生影響的風(fēng)險(xiǎn)。 QT 的間期長(zhǎng)短是患者機(jī)體維持動(dòng)作電位的主要因素,不僅僅只是有鉀離子的外流,還有鈣離子的內(nèi)流,兩者一直處于一種平衡的狀態(tài),如果我們只是單純的控制其中的鉀離子外流,這樣就會(huì)很容易出現(xiàn)心律失常,說(shuō)明了異丙酚在抑制鉀離子外流的同時(shí)也抑制了鈣離子的內(nèi)流,這樣丙泊酚對(duì)患者造成心律失常的風(fēng)險(xiǎn)就大大降低,但是在食用丙泊酚的前提是不要使用對(duì)鈣離子有拮抗作用的藥物,比如尼莫地平。
雖然目前我們對(duì)患者因?yàn)槭褂盟幬飳?dǎo)致的長(zhǎng)QT綜合癥還很難預(yù)測(cè),但是在患者出現(xiàn)因藥物導(dǎo)致長(zhǎng)QT綜合癥的同時(shí)一定還會(huì)伴隨著其他的危險(xiǎn)因素存在,QT間期是反映心肌復(fù)極的重要指標(biāo),屬于是動(dòng)態(tài)的生理變數(shù),其實(shí)該數(shù)值會(huì)受到很多因素的影響,比如患者的年齡、性別、藥物以及是否運(yùn)動(dòng)都會(huì)使QT間期出現(xiàn)波動(dòng),一般由藥物導(dǎo)致的QT間期變化都會(huì)對(duì)劑量有依賴性,我們此次的研究是為了探討丙泊酚對(duì)野生型hERG鉀通道和突變型hERG鉀通道所產(chǎn)生的抑制作用,研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)丙泊酚對(duì)野生型hERG鉀通道和突變型hERG鉀通道的抑制濃度分別為60.32±4.52μM和14.28±2.81μM,這就說(shuō)明了當(dāng)遺傳因素發(fā)生突變的情況下,丙泊酚對(duì)hERG鉀通道的抑制能力也會(huì)相應(yīng)的加強(qiáng)。我們可以看出在發(fā)生突變后丙泊酚對(duì)hERG鉀通道的一直濃度剛好處于平時(shí)醫(yī)用濃度之間,前面我們提到一般的使用濃度為11-25μM,而這個(gè)對(duì)于抑制野生型hERG鉀通道來(lái)說(shuō)還相差很多。有人用兔子做過實(shí)驗(yàn),對(duì)變異的兔子使用丙泊酚可以是兔子的心跳加快進(jìn)而引發(fā)心顫,這就充分的說(shuō)明了當(dāng)hERG發(fā)生突變時(shí)會(huì)增加兔子對(duì)于丙泊酚的敏感程度,使兔子在受到丙泊酚刺激后出現(xiàn)心律失常的癥狀。但是有些患者本身的疾病就會(huì)到導(dǎo)致長(zhǎng)QT綜合癥,比如患者有心動(dòng)緩慢、自主性神經(jīng)緩慢或者是有低鉀血癥,這些病癥都有可能會(huì)出現(xiàn)長(zhǎng)QT綜合癥的癥狀,所以針對(duì)這一類患者在使用丙泊酚的時(shí)候一定要格外謹(jǐn)慎。此次研究表明,丙泊酚在一定濃度是對(duì)野生型hERG鉀通道和突變型hERG鉀通道都會(huì)起到一定的抑制作用,但是在相同濃度的丙泊酚對(duì)研究組的突變hERG鉀通道抑制能力會(huì)增加。當(dāng)丙泊酚達(dá)到一定濃度是對(duì)野生型hERG鉀通道和突變hERG鉀通道都會(huì)產(chǎn)生一定的抑制作用,而且丙泊酚對(duì)于突變后的hERG鉀通道抑制能力更強(qiáng)。
綜上所述,在正常的醫(yī)學(xué)使用濃度范圍內(nèi)丙泊酚對(duì)hERG鉀通道的抑制作用不會(huì)出現(xiàn)場(chǎng)QT綜合癥,但是當(dāng)濃度達(dá)到一定標(biāo)準(zhǔn)的時(shí)候使丙泊酚的抑制能力加強(qiáng);當(dāng)hERG鉀通道出現(xiàn)突變的情況下,正常的醫(yī)用濃度也會(huì)對(duì)hERG鉀通道產(chǎn)生很強(qiáng)的抑制作用,致使患者出現(xiàn)長(zhǎng)QT綜合癥,所以在丙泊酚的使用上還不是很安全,所以值得我們進(jìn)一步的研究和探討。
參考文獻(xiàn)
[1]王朝輝,徐世琴,馮善武,等.瑞芬太尼復(fù)合丙泊酚聯(lián)合無(wú)正壓通氣誘導(dǎo)技術(shù)在5分鐘剖宮產(chǎn)中的應(yīng)用[J].臨床麻醉學(xué)雜志, 2016, 32(8):745-747.
[2]Kaye A, Anwar M, Banister R, et al. Responses to propofol in the pulmonary vascular bed of the rat[J]. Acta Anaesthesiologica Scandinavica, 2016, 60(3):431-437.
[3]蔣艷東,趙素敏.瑞芬太尼聯(lián)合丙泊酚麻醉對(duì)腹腔鏡膽囊切除術(shù)患者應(yīng)激反應(yīng)、血?dú)庵笜?biāo)的影響[J].海南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào), 2016, 22(7):677- 679.
[4]李真,金寧,萬(wàn)靜潔,等.腦電雙頻指數(shù)監(jiān)測(cè)小兒丙泊酚復(fù)合瑞芬太尼靜脈麻醉維持劑量的臨床研究[J].中國(guó)醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào), 2016, 45(1):17-20.