（魯南制藥集團(tuán)股份有限公司，山東 臨沂 276000）

阿齊沙坦是血管緊張素Ⅱ受體（AT1）拮抗劑（ARB），能競(jìng)爭(zhēng)性、可逆地阻斷血管緊張素Ⅱ與AT1受體的結(jié)合，起到降低血壓作用，其與血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑（ACEI）類降壓藥物相比，具有平穩(wěn)降壓、不會(huì)引起干咳的優(yōu)點(diǎn)[1-4]。阿齊沙坦作為新一代雙重功能的ARB，不僅能高選擇性阻斷AT1受體，單獨(dú)或聯(lián)合用藥均具有平穩(wěn)持久降血壓作用，還能通過部分激活過氧化物酶體增殖物激活受體γ（PPAR-γ）而對(duì)糖尿病患者產(chǎn)生潛在的保護(hù)作用，顯示出良好的治療前景[5-6]。2011年2月，阿齊沙坦的前藥阿齊沙坦酯（azilsartan medoxomil，商品名：Edarbi）由美國食品與藥品管理局（FDA）批準(zhǔn)在美國上市[7]；2012年1月，阿齊沙坦（商品名：Azilva，アジFI（Ⅲ））由藥品與醫(yī)療器械管理局（PMDA）批準(zhǔn)在日本上市[8]。目前，國內(nèi)尚無本品上市。

按中國藥典以及相關(guān)要求[9-10]，本文經(jīng)過反復(fù)摸索，建立了反相高效液相色譜法（RP-HPLC）測(cè)定阿齊沙坦片含量的方法，測(cè)得結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可用于阿齊沙坦片的含量測(cè)定。

1 儀器與試藥

Agilent 1100高效液相色譜儀（安捷倫）；XS205DU型十萬分之一電子天平（Mettler Toledo）；乙腈為色譜純，磷酸二氫鈉為分析純，戊烷磺酸鈉為分析純，水為純化水；阿齊沙坦對(duì)照品（標(biāo)定純度：99.8 %，批號(hào)：151001，魯南制藥），阿齊沙坦中間體1﹛2-乙氧基-1-[[2’-(羥基脒基聯(lián)苯-4-取代)甲基]-苯并咪唑]-7-羧酸甲酯，標(biāo)定純度：99.1 %，批號(hào)：151001A，魯南制藥﹜，阿齊沙坦片（規(guī)格：20 mg，批號(hào)：151201，151202，151203，魯南制藥）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：Welch Ultimate XB C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈-緩沖液（pH 2.8）（取1.56 g磷酸二氫鈉和0.87 g戊烷磺酸鈉，加入1000 ml水使溶解，用磷酸調(diào)節(jié)pH 2.8）（45:55）；檢測(cè)波長：251 nm；流速：1.0 ml/min；進(jìn)樣量：10 μl。取阿齊沙坦對(duì)照品適量，用甲醇溶解并稀釋制成每1 ml含0.2 mg的溶液，理論板數(shù)按阿齊沙坦峰計(jì)算不低于30 000。

2.2 溶液制備

取本品20片，混勻，研細(xì)，精密稱取細(xì)粉適量（約相當(dāng)于阿齊沙坦20 mg），置入100 ml量瓶，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。另取阿齊沙坦對(duì)照品適量，加甲醇溶解并稀釋制成每1 ml約含0.2 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。取本品空白輔料適量（約相當(dāng)于阿齊沙坦20 mg的處方比例量），置入100 ml量瓶，加甲醇適量，振搖并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為陰性空白溶液。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 專屬性試驗(yàn) 按上述色譜條件，取阿齊沙坦對(duì)照品和阿齊沙坦中間體1，精密稱定，加甲醇溶解并稀釋制成每1 ml約含0.2 mg的溶液，作為系統(tǒng)適用性溶液。分別取系統(tǒng)適用性溶液、對(duì)照品溶液、供試品溶液及陰性空白溶液各10 μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，HPLC圖譜見圖1。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：阿齊沙坦和阿齊沙坦中間體1的分離度為2.45，理論板數(shù)按阿齊沙坦峰計(jì)為51 254，符合規(guī)定；空白輔料在阿齊沙坦主成分保留時(shí)間處無輔料峰，對(duì)阿齊沙坦的含量測(cè)定無干擾。

圖1 阿齊沙坦片含量測(cè)定HPLC圖譜

2.3.2 線性與范圍試驗(yàn) 稱取阿齊沙坦對(duì)照品適量，加甲醇溶解并稀釋制成每1 ml約含1 mg的溶液，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液。精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液1，2，5，3，10，5，50 ml，分別置入50，50，50，20，50，20，100 ml量瓶，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。精密量取上述溶液各10 μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，量取主峰面積，以濃度C（mg/ml）對(duì)主峰面積A進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為：A=10 981C+11.98，r=1.0000。結(jié)果表明：阿齊沙坦?jié)舛仍?.021～0.5232 mg/ml范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。

2.3.3 精密度試驗(yàn) 取線性與范圍試驗(yàn)項(xiàng)下對(duì)照品儲(chǔ)備液，分別精密量取8，10，12 ml，各置入50 ml量瓶，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為0.1674 mg/ml（80 %），0.2092 mg/ml（100 %），0.251 mg/ml（120 %）的溶液，各配制3份。依法測(cè)定，記錄色譜圖。以峰面積考察精密度，計(jì)算RSD分別為0.23 %，0.09 %，0.16 %。表明精密度良好。

2.3.4 中間精密度試驗(yàn) 由不同操作者，在不同時(shí)間，用不同儀器照重復(fù)性項(xiàng)下測(cè)定方法測(cè)定本品含量，平均含量為99.6 %，RSD為0.46 %（n=6）。

2.3.5 溶液穩(wěn)定性試驗(yàn) 取供試品溶液，在配制后0～8 h每隔1 h進(jìn)樣，按含量測(cè)定項(xiàng)下的方法測(cè)定，記錄峰面積，以0 h的峰面積作為100 %含量，其他時(shí)間與0 h峰面積相比，計(jì)算變化值。經(jīng)試驗(yàn)，供試品溶液在8 h內(nèi)峰面積變化最大值為0.92 %<2.0 %，峰面積RSD為0.73 %，溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.6 回收率試驗(yàn) 取阿齊沙坦對(duì)照品適量與處方量的輔料，混合均勻，精密稱取適量，用甲醇制成每1 ml約含阿齊沙坦0.16，0.2，0.24 mg的溶液（80 %，100 %，120 %），各3份，作為供試品溶液，另精密稱取阿齊沙坦對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇溶解并稀釋制成每1 ml約含阿齊沙坦0.2 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。分別精密量取供試品溶液及對(duì)照品溶液各10 μl，注入色譜儀，記錄色譜圖。根據(jù)峰面積，按外標(biāo)法計(jì)算回收率，平均回收率為100.15 %，RSD為0.65 %（n=9）。

2.3.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取本品20片，混勻，研細(xì)，取細(xì)粉適量（約相當(dāng)于阿齊沙坦20 mg），置入100 ml量瓶，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。另取阿齊沙坦對(duì)照品適量，加甲醇溶解并稀釋制成每1 ml約含0.2 mg的溶液，搖勻，作為對(duì)照品溶液。分別精密量取供試及對(duì)照液各10 μl，注入色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算其含量，平均含量為100.8 %，RSD為0.82 %（n=6）。

2.3.8 耐用性試驗(yàn) 取含量測(cè)定項(xiàng)下對(duì)照品溶液及供試品溶液，通過改變流速，調(diào)整流動(dòng)相比例，更換同系列不同批的色譜柱進(jìn)行試驗(yàn)（改變其中一項(xiàng)條件時(shí)，其余條件均保持標(biāo)準(zhǔn)條件不變），計(jì)算含量，衡量本方法在微調(diào)各種色譜條件時(shí)的耐用性，結(jié)果見表1。

表1 阿齊沙坦片含量測(cè)定方法耐用性試驗(yàn)結(jié)果

由表1可見，微調(diào)色譜條件后，測(cè)得含量符合規(guī)定，且無明顯變化，本方法耐用性較好。

2.3.9 樣品測(cè)定 取本品3批樣品（批號(hào)：151201，151202，151203）及對(duì)照品，依法測(cè)定，含量分別為99.23 %，99.78 %，99.58 %，均符合規(guī)定。

3 討論

在方法摸索過程中，當(dāng)以乙腈-緩沖液（pH 2.8）（稱取1.56 g磷酸二氫鈉，加入1000 ml水使溶解，用磷酸調(diào)節(jié)pH 2.8）（20:80）為流動(dòng)相時(shí)，色譜圖運(yùn)行至30 min仍未出主峰；當(dāng)以乙腈-緩沖液（pH 2.8）（稱取1.56 g磷酸二氫鈉，加入1000 ml水使溶解，用磷酸調(diào)節(jié)pH 2.8）（35:65）為流動(dòng)相時(shí)，主峰保留時(shí)間約為17 min，對(duì)稱因子1.83，主峰與各雜質(zhì)都達(dá)到基線分離。當(dāng)以乙腈-pH 2.8緩沖液（稱取1.56 g磷酸二氫鈉和0.87 g戊烷磺酸鈉，加入1000 ml水使溶解，用磷酸調(diào)節(jié)pH至2.8）（45:55）為流動(dòng)相時(shí)，主峰保留時(shí)間約為9 min，對(duì)稱因子0.95，與未增加離子對(duì)相比，峰形更對(duì)稱，即增加離子對(duì)試劑改善了主峰峰形。

方法學(xué)研究表明：通過線性與范圍試驗(yàn)、精密度試驗(yàn)、溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)、回收率試驗(yàn)、重復(fù)性試驗(yàn)、中間精密度試驗(yàn)、耐用性試驗(yàn)等研究，本法的精密度良好，回收率高，線性范圍廣，耐用性及溶液穩(wěn)定性良好，表明本方法適合阿齊沙坦片的含量測(cè)定。