文/洪小栩

一、藥用輔料的概念

《中國藥典》規(guī)定，藥用輔料生產(chǎn)藥品和調(diào)配處方時使用的賦形劑和附加劑作為非活性物質(zhì)。藥用輔料除了充當載體、提高穩(wěn)定性外，還具有增溶、緩控釋等重要功能?！睹绹幍洹贰稓W洲藥典》以及國際藥用輔料協(xié)會（IPEC）則將藥物活性成分制備成藥物制劑的非藥物活性成分，除活性成分以外的所有成分均納入藥用輔料范疇。

國際上藥用輔料概念上涵蓋了除活性成分以外的所有成分，在一定程度上，相對弱化了藥用輔料的界限，擴大了輔料的范疇。意味著無論在制劑過程中使用，還是其他生產(chǎn)加工階段使用的制劑或物質(zhì)成分，制劑生產(chǎn)企業(yè)都應(yīng)根據(jù)其風(fēng)險程度，遵循相應(yīng)的管理制度和技術(shù)規(guī)范。我國當前實施的關(guān)聯(lián)審評審批制度，取消藥用輔料單獨注冊，是逐步向基于風(fēng)險管理理念，以制劑企業(yè)為責(zé)任主體的管理體制轉(zhuǎn)變。

二、藥用輔料的分類

藥用輔料可按來源、用途、用于制備的劑型、給藥途徑分類。常用的分類方式是按其用途分類，包括助溶劑、乳化劑、著色劑、崩解劑、填充劑、穩(wěn)定劑等。按來源性質(zhì)分類分為天然物、半合成和全合成物，天然物按其來源分為動物來源、植物來源和礦物質(zhì)來源的藥用輔料。2015年版《中國藥典》收載藥用輔料標準270個，動物來源輔料14個，約占總量的5 %（見表1）。盡管動物來源輔料占比不高，但對于制劑的安全性和有效性至關(guān)重要。

三、動物來源藥用輔料面臨的問題

動物來源的輔料不同于化工合成輔料，由于其來源和制備工藝復(fù)雜性，給質(zhì)量控制帶來很大挑戰(zhàn)，主要體現(xiàn)在：一是來源多樣。不同地域、不同種屬，甚至不同種群的同一物種，制備材料的來源存在一定差異；二是成分復(fù)雜。動物來源藥用輔料通常為多組分制品，成分復(fù)雜，穩(wěn)定性差，組分分離、批件控制難度較大；三是動物影響因素較多。動物的種群、飼養(yǎng)條件，衛(wèi)生狀況，動物的健康狀況以及地域性疾病的因素都應(yīng)重點考慮；四是生產(chǎn)工藝控制難度大。無論是動物組織、提取物，動物來源對藥用輔料，生產(chǎn)工藝對產(chǎn)品的質(zhì)量和穩(wěn)定性至關(guān)重要；五是外源因子污染的潛在風(fēng)險。無論是動物組織器官、生產(chǎn)工藝過程以及終端產(chǎn)品，存在污染外源因子的潛在風(fēng)險；六是質(zhì)量控制難度大。對多組分產(chǎn)品成分的評估及活性成分的控制，相關(guān)組分結(jié)構(gòu)的差異和評估都極具挑戰(zhàn)性。

四、動物來源材料的國內(nèi)外法規(guī)和技術(shù)要求

各國藥品監(jiān)管機構(gòu)對動物來源的用于藥品制備的材料均有相應(yīng)的法規(guī)要求和嚴格的技術(shù)規(guī)定，以最大程度控制這些材料的風(fēng)險，保障使用安全（見表2）。

表2 各國關(guān)于動物來源藥用材料的技術(shù)法規(guī)

續(xù)表

《中國藥典》2015年版凡例規(guī)定，來源于動物組織提取的藥品，其所用動物種屬要明確，所用臟器均應(yīng)來自經(jīng)檢疫的健康動物，涉及牛源的應(yīng)取自無牛海綿狀腦病地區(qū)的健康牛群；來源于人尿提取的藥品，均應(yīng)取自健康人群?！吨袊幍洹?015年版三部增訂了《生物制品生產(chǎn)用原輔材料及輔料質(zhì)量控制規(guī)程》，并在凡例規(guī)定：生產(chǎn)及檢定用動物規(guī)定，培養(yǎng)細胞用牛血清應(yīng)來源于無牛海綿狀腦病地區(qū)的健康牛群，其質(zhì)量應(yīng)符合本版藥典的有關(guān)規(guī)定。消化細胞用的胰蛋白酶應(yīng)證明無外源性或內(nèi)源性病毒污染。《歐洲藥典》9.0在細胞產(chǎn)品和基因治療產(chǎn)品生物來源的原材料技術(shù)要求中，對血清和血清替代品、重組蛋白制品（包括生長素、細胞素類、激素、酶類、單抗制品）、生物材料提取蛋白（酶、多克隆抗體）的來源、生產(chǎn)工藝（包括外源因子去除滅活工藝、工藝驗證、外源因子檢查）、鑒別、檢查做出了相應(yīng)的規(guī)定。

四、全面加強動物來源輔料的質(zhì)量控制

2008年發(fā)生在美國的“肝素”事件；2010年，口服輪狀病毒疫苗（Rotarix和RotaTeq）檢測出豬環(huán)狀病毒（porcine circovirus）DNA；2015年， 我國藥品監(jiān)管部門查處了違法生產(chǎn)小牛血去蛋白提取物注射液等問題，暴露出藥品生產(chǎn)用動物來源的輔料和原料存在潛在的風(fēng)險，加強對動物來源的藥用輔料的控制不容忽視。

（一）關(guān)于動物來源藥用輔料質(zhì)量控制的考慮

1. 生產(chǎn)起始材料的控制

一是明確動物來源。對于不同來源制備的藥用輔料，應(yīng)明確其制備用動物的種類，如生產(chǎn)膠囊用的明膠，應(yīng)明確其來源是牛源還是豬源，或者豬、牛混合來源或含有其他批準使用的動物來源的成分；二是規(guī)范動物材料提取的過程控制要求，包括動物臟器提取的操作過程、臟器篩選、收集、保存運輸?shù)冗^程；三是加強外源因子的控制，根據(jù)不同工藝階段樣品的特性，選擇和建立靈敏度適宜的檢測方法完善檢測結(jié)果的評估；四是對供應(yīng)商的審計。加強對動物原料來源的供應(yīng)商進行常規(guī)審計，特別是對動物的飼養(yǎng)設(shè)施和環(huán)境、動物的健康狀況、動物免疫接種情況、日常病原體的監(jiān)測、相關(guān)機構(gòu)出具的動物檢疫檢驗合格證明等。國家藥品監(jiān)督管理局藥品審評中心“關(guān)于公開征求《藥用輔料登記需求》（征求意見稿）”中，對申報藥用空心膠囊、膠囊用明膠、藥用明膠等牛源性藥用輔料進口的，須提供制備膠囊的主要原料——明膠的制備原料的來源、種類等相關(guān)資料和證明，并提供設(shè)備原料來源于沒有發(fā)生瘋牛病疫情的國家政府證明文件。

2. 工藝過程控制

動物來源材料間存在較大差異，生產(chǎn)工藝必須經(jīng)過嚴格的驗證，強化過程質(zhì)控，才能保證質(zhì)量的穩(wěn)定性和批間一致性?；谕晟频墓に囼炞C，確定關(guān)鍵工藝質(zhì)控點，確定相應(yīng)的工藝參數(shù)；建立相應(yīng)的理化特性質(zhì)控項目和指標，以保證工藝處理的效果；生產(chǎn)過程中對外源因子污染的控制和檢查，比成品控制更加有效；同時建立符合藥用輔料的生產(chǎn)管理規(guī)范（GMP），控制生產(chǎn)過程中可能引入的內(nèi)源和外源性污染，并實現(xiàn)生產(chǎn)全過程可追溯。

3. 建立可靠的病毒滅活工藝

對于動物來源的藥用輔料，最大限度地殺滅或去除已知或未知的外源因子，建立可靠度病毒滅活工藝，是保障產(chǎn)品安全性的重要工藝步驟，尤其是針對采用動物組織、多組分提取物制成的產(chǎn)品。當然，對于單一成分的提取成分加工產(chǎn)物，其生產(chǎn)工藝中的病毒滅活/去除的程度也應(yīng)充分了解，應(yīng)為產(chǎn)品生產(chǎn)過程中，也存在交叉污染的風(fēng)險。

我國頒布的《血液制品去除/滅活病毒技術(shù)方法及驗證指導(dǎo)原則》（國藥監(jiān)注〔2002〕160號）中就去除/滅活病毒方法的選擇、常用的去除/滅活病毒方法評價。特定的去除/滅活病毒方法驗證、生產(chǎn)工藝去除/滅活病毒能力的驗證、去除/滅活病毒方法的再驗證等做出明確的規(guī)定。

（1） 病毒滅活驗證的目的

對病毒滅活工藝去除/滅活外源因子的有效性進行充分評估；針對已知和未知外源因子加入指示病毒，應(yīng)對每一步生產(chǎn)工藝的去除和滅活病毒的效果和能力進行評估，并應(yīng)選擇適當?shù)臋z測方法。由于動物來源材料的不同，人血、動物血清、動物組織，可能感染不同類型的病毒以及外源因子，因此，病毒滅活工藝應(yīng)能夠去除各種類型的病毒；通常情況下，動物來源起始材料外源因子污染的程度很低，應(yīng)選擇更為靈敏的檢測方法，或者對檢測樣品僅處理擴增后進行檢測。病毒滅活/去除工藝應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品的種類（包括動物來源種類、起始材料使用的器官或部位、原材料的差異以及材料的穩(wěn)定性和活性）以及生產(chǎn)工藝的不同而不同。

（2）病毒滅活驗證設(shè)計

病毒滅活驗證設(shè)計要考慮指示針對病毒滅活或去除工藝的能力（并不需要對每一個無關(guān)的生產(chǎn)工藝的能力進行評估）、驗證的環(huán)境要求（GMP或GLP），生產(chǎn)規(guī)模、相關(guān)工藝參數(shù)以及可能出現(xiàn)的偏差；建立工藝的病毒滅活/去除的曲線，生產(chǎn)工藝步驟、工藝偏差、生產(chǎn)規(guī)模工藝的轉(zhuǎn)化對病毒滅活/去除效果的影響；一個工藝不能滿足病毒滅活、去除的需要，可以采用多個工藝聯(lián)合方式；加入指示病毒量應(yīng)滿足工藝評價的需要，考慮指示病毒模型在評價過程中復(fù)制的問題，檢測樣品的影響，毒性物質(zhì)的干擾；定量檢驗檢測方法的可靠以及檢測結(jié)果的評估，如PCR檢測，如何評估其是否具有感染性等。

（3）驗證病毒的選擇

首先是應(yīng)選擇容易污染材料的病毒，理化特性明確，有利于檢測評估，同時應(yīng)慎重選擇評價用的毒株，不同來源檢測用的毒株存在特性的差別；建立相應(yīng)的病毒模型，病毒選擇上，對于人血漿制品，如HIV病毒；感染或不感染嚙齒類動物內(nèi)源性反轉(zhuǎn)錄病毒；通常選擇的病毒，如SV40，副流感病毒有包膜RNA，鼠逆轉(zhuǎn)錄病毒，皰疹病毒（DNA病毒），病毒選擇上應(yīng)包括脂包膜病毒和非脂包膜，核算類型應(yīng)包括單鏈RNA病毒和雙聯(lián)DNA病毒對于羊＼牛來源材料還應(yīng)關(guān)注BSE的風(fēng)險。選擇評價方法的有效性、靈敏度、可靠性進行評估。

（4）病毒滅活方法

基于產(chǎn)品的類型選擇相應(yīng)可靠的病毒滅活方法。在選擇病毒滅活方法時，應(yīng)考慮病毒滅活工藝可能對組織成分或組織提取成分及其活性產(chǎn)生的影響。目前病毒滅活常用酸堿處理、有機溶劑表面活性劑（S/D），熱滅活、γ射線照射等方法。對于提取含有酶類、脂類或蛋白質(zhì)等具有生物活性成分的工藝，應(yīng)采用比較溫和的病毒滅活工藝，如S/D法、低pH孵放法、γ射線照射、紫外線照射等方法減少對活性成分的破壞。在生產(chǎn)工藝中，針對材料引入外源因子的風(fēng)險程度、種類、工藝步驟以及提取成分的耐受性，如果一種病毒滅活工藝不夠充分，可以采用兩種或兩種以上的方式，達到病毒滅活的效果。

4. 外源病毒因子的檢查

生產(chǎn)的全過程，應(yīng)對外源因子進行監(jiān)測。外源因子包括污染的細菌、真菌、支原體、病毒。其中，難度最大的是外源病毒的檢測。根據(jù)來源動物的種類、組織器官、生產(chǎn)方式建立完善的外源病毒檢測方法和評價動物模型，是對動物健康狀況、組織器官篩選、病毒滅活驗證工藝的驗證和防止終端產(chǎn)品污染外源病毒的重要手段。

傳統(tǒng)的外源病毒外源因子檢查方法通常包括透射電鏡法、體外感染法、生化法、體內(nèi)法（動物法）；隨著現(xiàn)代檢測技術(shù)和分子生物學(xué)檢測技術(shù)的發(fā)展，一些成熟的現(xiàn)代檢測技術(shù)應(yīng)用于外源因子的監(jiān)測，如逆轉(zhuǎn)錄酶活性（PERT法）、聚合酶鏈式反應(yīng)法（polymerase chain reaction，PCR）、DNA 測序 方 法、DNA微 陣 列（DNA Microarrays） 以 及PCR與 質(zhì)譜連用技術(shù)（PCR paired with mass spectrometry）。 新 型 檢驗檢測技術(shù)的應(yīng)用，大大提升了外源因子監(jiān)測的靈敏度，提高檢測效率，能夠捕捉到樣品中極微小的信號。與此同時，這些檢測信號的確證以及是否具有感染性，也給檢測結(jié)果判定帶來一定挑戰(zhàn)。2013年，世界衛(wèi)生組織（WHO）發(fā)布了《上市疫苗產(chǎn)品中檢測出外源因子的評估原則和考慮要點》，指導(dǎo)對檢測結(jié)果進行科學(xué)合理的評估，在防范風(fēng)險的同時，避免結(jié)果誤判所帶來不必要的損失。

表3 牛源材料病毒滅活驗證采用的病毒的選擇

5. 質(zhì)量控制

對于動物來源的材料，特別是多組分或復(fù)雜成分的產(chǎn)品，應(yīng)建立相應(yīng)活性成分或指征成分的控制，保證產(chǎn)品的穩(wěn)定性和批間一致性。同時對動物組織中的殘留物質(zhì)以及動物組織中有害物質(zhì)或在生產(chǎn)工藝總使用的化學(xué)試劑或殘留溶劑進行相應(yīng)的控制。

6. 包裝、保存和運輸

動物來源藥用輔料特別是對具有生物活性的材料特定的溫度下保存，如牛血清在2～8℃ ，蛋黃卵磷脂在-20℃保存，整個運輸過程中都必須在嚴格的冷鏈運輸。動物來源的材料一般容易引起細菌滋生，因此，必須有嚴格的包裝，避免外界微生物污染。因此對于動物來源的材料，通常應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品的特性采用相應(yīng)的包裝、保存和運輸方式。

五、結(jié)束語

動物來源的藥用輔料僅憑終產(chǎn)品的鑒定遠不能達到的質(zhì)量控制。我國對動物來源的材料規(guī)定無論在法規(guī)層面和技術(shù)層面與國際上相關(guān)要求相比存在一定差距，有待系統(tǒng)化完善。目前，國家藥典委員會正在積極開展動物來源的藥用輔料標準的制定，以加強對此類藥用輔料生產(chǎn)用原料的來源、生產(chǎn)工藝、外源因子檢測、病毒滅活以及方法驗證、生產(chǎn)管理體系，以及包裝、保存和運輸?shù)热^程控制要求，最大程度控制此類材料在生產(chǎn)源頭和過程可能引入的風(fēng)險，保證產(chǎn)品成分的均一性和穩(wěn)定性，提升產(chǎn)品的質(zhì)量。