吳福鴻，李 娟

（寧夏康亞藥業(yè)股份有限公司，寧夏銀川 750002）

奧拉西坦膠囊為奧拉西坦的膠囊劑，奧拉西坦是一種新的GABA的衍生物，是近幾年來研制開發(fā)的新型促智藥。該藥對腦血管病、腦損傷、腦瘤（術(shù)后）、顱內(nèi)感染、癡呆、腦變性疾病等引起的意識障礙、記憶和智能障礙、神經(jīng)功能缺損等均有良好療效[1]。

奧拉西坦有關(guān)物質(zhì)測定方法多為高效液相色譜法，奧拉西坦酸為奧拉西坦的水解雜質(zhì)，目前只有2014年發(fā)布的奧拉西坦以及奧拉西坦膠囊的征求意見稿中有該雜質(zhì)的檢測方法，本研究通過對方法的優(yōu)化，建立了采用高效液相色譜法測定奧拉西坦酸的方法，該方法操作簡便、靈敏、準確。

1 儀器與材料

高效液相色譜儀（Chromaster 5110輸液泵、Chro master 5210自動進樣器、Chromaster 5310柱溫箱、Chromaster 5410紫外檢測器，日本Hitachi公司），ABS-135電子天平（梅特勒-托利多）。

奧拉西坦對照品（批號101032-200901）購自中國食品藥品檢定研究院；奧拉西坦酸雜質(zhì)對照品（批號2010-12-8）購自深圳市雅索科技有限公司；奧拉西坦膠囊（規(guī)格：400 mg，石藥集團歐意藥業(yè)有限公司，批號：000101201；寧夏康亞藥業(yè)股份有限公司，批號20121207、20121208、20121209）；磷酸（色譜純），購自天津大茂化學試劑廠；水為實驗室二次純蒸水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以水（用磷酸調(diào)pH至3.6）為流動相，檢測波長為210 nm，流速為1.0 mL/min，柱溫為25℃。

2.2 溶液的制備

雜質(zhì)對照品溶液：取奧拉西坦酸雜質(zhì)對照品，精密稱定，用水溶解稀釋制成每1 mL中約含1 μg的溶液，作為雜質(zhì)對照品溶液。

對照溶液及供試溶液：精密稱取奧拉西坦膠囊適量，加水稀釋制成每1 mL中約含奧拉西坦1 mg的溶液，作為供試品溶液；精密量取供試品溶液適量，用水稀釋制成每1 mL中約含奧拉西坦1 μg的溶液作為對照溶液。

2.3 專屬性實驗

精密稱取奧拉西坦膠囊，進行高溫、酸、堿、氧化以及光照破壞實驗，并配制成1 mg/mL的溶液，作為供試品溶液。過濾，進樣，記錄色譜圖。在上述色譜條件下，奧拉西坦在高溫、酸、堿、氧化和光照破壞條件下所產(chǎn)生的降解產(chǎn)物與主峰均能達到基線分離，與各有關(guān)物質(zhì)峰的分離度符合要求，說明該方法專屬性良好。

2.4 檢測限與定量限的確定

分別以3倍信噪比及10倍信噪比作為檢測限和定量限，測得奧拉西坦酸雜質(zhì)的檢測限為5 ng/mL；定量限為20 ng/mL。

2.5 線性關(guān)系考察

取奧拉西坦酸雜質(zhì)對照品，精密稱定，加水溶解并稀釋制成含雜質(zhì)分別為 0.02 μg/mL、0.6 μg/mL、0.9 μg/mL、1.2 μg/mL、1.5 μg/mL、1.8 μg/mL、2.1 μg/mL的系列線性溶液。按照上述色譜條件，分別精密量取上述溶液20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以峰面積（A）對濃度（C）進行線性回歸，得回歸方程為A=22 501.624C-370.740 9，r=0.999 9，由實驗結(jié)果可知，雜質(zhì)Ⅲ在濃度范圍 0.02 μg/mL～2.10 μg/mL 內(nèi)呈良好的線性相關(guān)性。

2.6 精密度實驗

精密稱取奧拉西坦酸雜質(zhì)對照品，置量瓶中，加水溶解并稀釋制成每1 mL約含1 μg的溶液，按“2.1”項下色譜條件連續(xù)進樣6次，記錄峰面積，RSD為1.05%，表明精密度良好。

2.7 溶液穩(wěn)定性實驗

按“2.2”項制備雜質(zhì)對照溶液和供試品溶液，于室溫、避光條件下放置，在 0 h、2 h、4 h、6 h、8 h、10 h 和12 h，按“2.1”項色譜條件進樣分析，記錄峰面積。奧拉西坦酸雜質(zhì)平均峰面積為23 636，RSD為1.91%。表明奧拉西坦膠囊有關(guān)物質(zhì)檢查配制溶液室溫、避光放置12 h穩(wěn)定性良好。

2.8 回收率實驗

精密稱取奧拉西坦膠囊適量，平行配制9份，分別加入奧拉西坦酸雜質(zhì)對照品適量，加水稀釋配制成低（80%）、中（100%）、高（120%）三個濃度的溶液，進行加樣回收率實驗。實驗結(jié)果（見表1）。由表1實驗可知方法準確度良好。

2.9 重復(fù)性實驗

精密稱取奧拉西坦膠囊適量，加水稀釋并制成濃度為1 mg/mL的溶液，搖勻，過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液，配制6份，分別注入液相色譜儀，考察奧拉西坦膠囊有關(guān)物質(zhì)檢查重復(fù)性。由實驗可知，按上述方法測定，雜質(zhì)奧拉西坦酸的平均含量為0.06%，RSD為0.05%，奧拉西坦膠囊中雜質(zhì)檢查重復(fù)性良好。

表1 奧拉西坦膠囊有關(guān)物質(zhì)檢查方法3準確度實驗結(jié)果（n=9）

表2 奧拉西坦膠囊有關(guān)物質(zhì)檢查結(jié)果

2.10 供試品測定

取奧拉西坦膠囊（批號000101201、20121207、2012 1208、20121209），按照“2.1”及“2.2”項下色譜條件及試驗方法，對有關(guān)物質(zhì)進行測定，結(jié)果（見表2）。

3討論

（1）分別考察了柱溫以及流動相pH值對奧拉西坦有關(guān)物質(zhì)測定的影響，結(jié)果柱溫對測定結(jié)果無影響，但是流動相pH值會影響出峰時間以及分離度，故規(guī)定流動相pH值為3.6。

（2）所用色譜條件，根據(jù)征求意見稿，其流動相為0.02 mol/L的磷酸二氫鈉溶液，對色譜條件進行優(yōu)化，將流動相改為水（磷酸調(diào)節(jié)pH值至3.6），操作簡便，靈敏度高。

（3）奧拉西坦膠囊經(jīng)酸、堿、氧化、高溫和光照破壞后均產(chǎn)生了一定的降解，說明樣品在以上條件下不穩(wěn)定；主峰與降解產(chǎn)物在本文建立的色譜條件下均能得到良好分離，本方法可用于奧拉西坦膠囊中有關(guān)物質(zhì)的檢查。