石 琴，袁立崗，蒲敬偉，沙 麗，柳 煒

（新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)第十二師畜牧獸醫(yī)工作站，新疆烏魯木齊 830009）

牛結(jié)核病是由牛型結(jié)核分支桿菌引起的一種人獸共患傳染病，奶牛最易感，水牛、黃牛、牦牛、鹿等多種動(dòng)物也易感。世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）將其列為必須報(bào)告的動(dòng)物疫病，我國(guó)將其列為二類動(dòng)物疫病。奶牛結(jié)核病是奶牛養(yǎng)殖中每年必檢的動(dòng)物疫病。我國(guó)規(guī)定的奶牛結(jié)核病檢測(cè)方法有牛型結(jié)核分支桿菌PPD皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)（GB/T 18645-2002）和外周血γ-干擾素體外釋放檢測(cè)（GB/T 32945-2016）。PPD檢測(cè)費(fèi)用低、敏感度高，但操作繁瑣、費(fèi)事費(fèi)力。γ-干擾素ELISA檢測(cè)試劑盒是外周血γ-干擾素體外釋放檢測(cè)法在實(shí)際中的應(yīng)用，與膠體金檢測(cè)方法同為通過(guò)采集牛血液進(jìn)行牛結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的方法，操作相對(duì)簡(jiǎn)單。本試驗(yàn)先通過(guò)PPD進(jìn)行牛結(jié)核病普檢，然后對(duì)檢測(cè)結(jié)果再通過(guò)γ-干擾素和和膠體金方法進(jìn)行復(fù)檢，然后比對(duì)這2種檢測(cè)方法與PPD檢測(cè)方法的符合率，以探討各種檢測(cè)方法的優(yōu)缺點(diǎn)，為實(shí)際操作提供理論支撐。

1 材料與方法

1.1 采樣地點(diǎn)

新疆烏魯木齊市近郊兩個(gè)規(guī)?；膛?chǎng)，共計(jì)存欄2 106頭。

1.2 檢測(cè)試劑

提純牛型結(jié)核菌素：哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司生產(chǎn)；牛結(jié)核γ-干擾素ELSIA檢測(cè)試劑盒：青島瑞爾生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)；牛結(jié)核病抗體膠體金檢測(cè)卡：深圳市綠詩(shī)源生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)。

1.3 檢測(cè)方法

先對(duì)規(guī)模化奶牛場(chǎng)的2 106頭奶牛用PPD進(jìn)行普檢，對(duì)第1次檢疫的陽(yáng)性牛和可疑牛過(guò)60 d后進(jìn)行復(fù)檢，如果仍為陽(yáng)性，則判為結(jié)核病陽(yáng)性牛。采集全部結(jié)核病陽(yáng)性牛和部分陰性牛（隨機(jī)采集）抗凝血和全血進(jìn)行牛結(jié)核γ-干擾素ELISA試驗(yàn)和牛結(jié)核病膠體金檢測(cè)，并對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析。

1.3.1 牛型結(jié)核菌素皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng) （PPD） 按照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《動(dòng)物結(jié)核病診斷技術(shù)》（GB/T 18645-2002）進(jìn)行操作，分別于注射前和注射后12、24和72 h測(cè)量皮膚厚度，并計(jì)算出皮厚差，按照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)判斷結(jié)果。

1.3.2 牛結(jié)核γ-干擾素ELISA試驗(yàn) 采集抗凝血，8 h內(nèi)送實(shí)驗(yàn)室，按照說(shuō)明書進(jìn)行檢測(cè)。

1.3.3 牛結(jié)核病膠體金檢測(cè) 將檢測(cè)卡恢復(fù)至室溫后，從密封鋁箔袋內(nèi)取出，放置于干燥平穩(wěn)桌面上，用所配吸管吸取待檢測(cè)血清3滴，加入檢測(cè)卡加樣孔中，15 min內(nèi)判讀結(jié)果。陰性：C線顯紅色條帶，T線不顯紅色條帶；陽(yáng)性：C、T線均顯紅色條帶；無(wú)效：C線與T線均無(wú)紅色條帶出現(xiàn)或者C線無(wú)紅色條帶出現(xiàn)，但T線有紅色條帶出現(xiàn)。

2 結(jié)果

用PPD皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)，對(duì)2個(gè)牛場(chǎng)2 106頭奶牛進(jìn)行普檢，對(duì)檢疫陽(yáng)性和可疑牛經(jīng)過(guò)復(fù)檢，確診26頭牛為結(jié)核病陽(yáng)性牛。陽(yáng)性牛未表現(xiàn)明顯臨床癥狀。

采集26頭陽(yáng)性?？鼓⑷?，分離血清，同時(shí)在2個(gè)牛場(chǎng)隨機(jī)采集結(jié)核病檢疫陰性牛血清20份，共計(jì)46份，進(jìn)行牛結(jié)核γ-干擾素ELISA檢測(cè)和牛結(jié)核病膠體金檢測(cè)。γ-干擾素ELISA檢測(cè)檢出陽(yáng)性32份、陰性14份，膠體金檢測(cè)檢出陽(yáng)性20份、陰性26份（表1）。

表1 3種方法的牛結(jié)核病檢測(cè)結(jié)果

據(jù)表1的檢測(cè)結(jié)果統(tǒng)計(jì)，PPD和γ-干擾素ELISA檢測(cè)相比，均為陽(yáng)性的23頭，陽(yáng)性符合率為88%（23/26），均為陰性的11頭，陰性符合率為55%（11/20）。PPD和膠體金檢測(cè)相比，均為陽(yáng)性的19頭，陽(yáng)性符合率為73%（19/26），均為陰性的19頭，陰性符合率為95%（19/20）。

3 討論

PPD（牛型結(jié)核菌素皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)）是國(guó)際推薦的牛結(jié)核病診斷方法。其優(yōu)點(diǎn)是對(duì)人員的專業(yè)水平要求低（一般經(jīng)過(guò)簡(jiǎn)單培訓(xùn)就能操作[2]），所需儀器設(shè)備簡(jiǎn)單（僅需要卡介苗注射器和游標(biāo)卡尺），結(jié)核菌素抗原便宜，檢疫費(fèi)用較低，易于在基層推廣；缺點(diǎn)是該方法操作步驟多、繁瑣，費(fèi)時(shí)費(fèi)力，容易出現(xiàn)非特異性反應(yīng)，人為因素影響大，重復(fù)性差。

γ-干擾素ELISA試驗(yàn)主要是通過(guò)檢測(cè)牛感染牛分支桿菌后，機(jī)體通過(guò)細(xì)胞免疫產(chǎn)生的高水平IFN-γ含量的多少，來(lái)反映機(jī)體是否感染結(jié)核病[3]。其優(yōu)點(diǎn)是操作相對(duì)簡(jiǎn)單、敏感性高，可檢測(cè)出早期感染牛，可以區(qū)分牛分支桿菌和副結(jié)核或禽分支桿菌感染，而且重復(fù)性好，易于標(biāo)準(zhǔn)化；缺點(diǎn)是采血后必須在8 h內(nèi)進(jìn)行[4]，試劑盒價(jià)格貴，成本高，需要酶標(biāo)儀，且對(duì)操作人員專業(yè)技術(shù)要求高，不利于在基層推廣使用。

抗體膠體金檢測(cè)法是對(duì)血清或血漿中牛結(jié)核分支桿菌抗體進(jìn)行檢測(cè)，操作簡(jiǎn)便（僅需采血分離血清）、快速（15 min內(nèi)即可出結(jié)果），敏感性和特異性高，適合于在基層推廣；缺點(diǎn)是試劑盒較貴，檢測(cè)成本較高。

3種方法檢測(cè)均為陽(yáng)性的16份，均為陰性的10份，總符合率并不高，僅為57%，說(shuō)明每種檢測(cè)方法各有優(yōu)缺點(diǎn)。γ-干擾素ELISA試驗(yàn)和PPD比較，陽(yáng)性符合率最高（88%），說(shuō)明其敏感性較高，可用于結(jié)核病早期感染的檢測(cè)。膠體金和PPD比較，陽(yáng)性符合率為73%，陰性符合率為95%，說(shuō)明特異性較高，可用于引種時(shí)的快速檢疫。

4 結(jié)論

通過(guò)檢測(cè)結(jié)果的對(duì)比，可以發(fā)現(xiàn)這3種方法符合率較低，每種檢測(cè)方法各有優(yōu)點(diǎn)：PPD試劑最便宜，費(fèi)用低，適合奶牛場(chǎng)結(jié)核病普檢；γ-干擾素ELISA試驗(yàn)敏感性較高，僅需抗凝血就可以進(jìn)行檢測(cè)，適合實(shí)驗(yàn)室診斷和結(jié)核病的早期診斷；膠體金檢測(cè)特異性較高，操作方便快捷，可以用于外購(gòu)牛的結(jié)核病快速診斷。PPD仍為我國(guó)牛結(jié)核病檢疫國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，其它檢測(cè)方法都是輔助手段，因此在實(shí)際操作中，可以根據(jù)實(shí)際情況進(jìn)行相應(yīng)檢測(cè)方法的選擇。