齊瑩，王博，譚美玉，朱海燕，李榮，岳化葵，盛慧明，駱建云，阮強(qiáng)

（1. 中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院病毒室，沈陽(yáng) 110004； 2. 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬同仁醫(yī)院檢驗(yàn)科，上海 200336；3. 中國(guó)人民解放軍海軍總醫(yī)院婦產(chǎn)科，北京 100048；4. 重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院婦產(chǎn)科，重慶 630014；5. 深圳市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東 深圳 518001）

微小病毒B19 （簡(jiǎn)稱(chēng)B19病毒） 是具有致病性的、體積最小、結(jié)構(gòu)最簡(jiǎn)單的單鏈DNA病毒，通常感染后會(huì)產(chǎn)生終身免疫。B19病毒主要通過(guò)呼吸道分泌物或手-口接觸途徑傳播；血液制品的輸注以及胎盤(pán)傳播也會(huì)導(dǎo)致感染［1］。其感染呈世界范圍分布，一年四季均可發(fā)病，通常在春季高發(fā)；妊娠女性也是好發(fā)人群，其感染多發(fā)生在春末和夏季［2］。

孕婦感染后多數(shù)沒(méi)有特異的臨床癥狀，但是病毒卻可以通過(guò)胎盤(pán)造成垂直傳播，導(dǎo)致胎兒貧血、水腫及心肺功能損傷等，進(jìn)而危及胎兒生命［3］。目前，我國(guó)育齡婦女B19病毒感染狀況仍不明確，缺乏全國(guó)范圍B19病毒育齡婦女感染的數(shù)據(jù)。本研究的目的是通過(guò)檢測(cè)我國(guó)不同地區(qū)育齡婦女的B19病毒IgM和IgG抗體，評(píng)估B19病毒在中國(guó)各地區(qū)育齡女性中的流行病學(xué)情況，初步評(píng)估已知高危因素與病毒感染的相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象

選取2016年7月至12月全國(guó)5個(gè)不同地區(qū)中心城市的5家醫(yī)院進(jìn)行孕前篩查和孕期檢查的1 401名“無(wú)臨床感染癥狀”的育齡婦女，年齡18～42歲，平均（29.35±3.82） 歲。

5家參與研究的醫(yī)院分別是中國(guó)人民解放軍海軍總醫(yī)院 （n = 183） 、重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院（n = 171） 、上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬同仁醫(yī)院 （n =336） 、深圳市人民醫(yī)院 （n = 161） 和中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院 （n = 550） 。收集產(chǎn)前篩查優(yōu)生優(yōu)育檢測(cè)的剩余血清樣本1.5 mL，冷藏條件下統(tǒng)一郵寄到中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院進(jìn)行B19病毒 IgM和IgG抗體檢測(cè)。對(duì)B19病毒 IgM單陽(yáng)性的患者進(jìn)行跟蹤隨訪(fǎng)，3個(gè)月后再次采集血液樣本，復(fù)查B19病毒 IgM與IgG抗體。

1.2 B19病毒IgM和IgG抗體水平檢測(cè)

應(yīng)用全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光儀 （LIAISON XL，2210） ，采用抗體捕獲法檢測(cè)IgM抗體 （LIAISON B19V IgM試劑，意大利索靈公司）：磁微粒 （固相載體） 捕獲人IgM抗體，異魯米諾衍生物結(jié)合的B19病毒重組VP2抗原識(shí)別病毒特異性IgM抗體；采用間接法檢測(cè)IgG抗體 （LIAISON B19V IgG試劑，意大利索靈公司）：以包被于磁微粒 （固相載體） 上的B19病毒重組VP2抗原結(jié)合病毒特異性抗體，異魯米諾衍生物結(jié)合的抗人IgG小鼠單克隆抗體識(shí)別人IgG抗體。

簡(jiǎn)要過(guò)程如下：將樣品放置在試管支架上，試劑盒放入相應(yīng)試劑區(qū)。由全自動(dòng)分析儀進(jìn)行條形碼掃描分析，并由自動(dòng)加樣針完成樣品及試劑的加樣。每批標(biāo)本測(cè)定前均進(jìn)行光路校正，檢測(cè)中并行進(jìn)行質(zhì)控品檢測(cè)。整個(gè)檢測(cè)共進(jìn)行2次孵育，期間未結(jié)合的物質(zhì)被洗滌去除；加入化學(xué)發(fā)光反應(yīng)的激發(fā)試劑，相關(guān)光單位 （relative light unit，RLU） 由光電倍增管測(cè)量；最終換算出標(biāo)本中定標(biāo)物或質(zhì)控中抗體的含量。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)數(shù)資料使用頻數(shù) （%） 表示，2組或多組比較采用χ2檢驗(yàn)。P ＜ 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 孕前及不同孕期育齡婦女B19病毒抗體陽(yáng)性率

在受檢的1 401名育齡婦女中，5名受檢者為B19病毒IgM抗體陽(yáng)性，陽(yáng)性率為0.36% （5/1 401） 。在5例B19病毒IgM抗體陽(yáng)性婦女中，3例是IgM和IgG同時(shí)陽(yáng)性；另2例是單純IgM陽(yáng)性。對(duì)IgM單陽(yáng)性的2例育齡婦女，在3個(gè)月后再次抽血復(fù)查了IgM及IgG抗體，檢測(cè)結(jié)果均為IgM抗體轉(zhuǎn)陰而IgG抗體轉(zhuǎn)陽(yáng)。

本研究中B19病毒IgG抗體的陽(yáng)性率為15.20%（213/1 401） 。年齡≤30歲和＞30歲育齡婦女的B19病毒IgG抗體陽(yáng)性率分別為14.56% （n = 768） 及15.89%（n = 633） ，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異 （P ＞ 0.05） 。孕前及不同孕期育齡婦女B19病毒 IgG抗體陽(yáng)性率分別為16.92%、15.49%、14.79%及14.59% （表1）；孕期與B19病毒 IgG陽(yáng)性率之間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P ＞ 0.05） 。

2.2 B19病毒抗體陽(yáng)性育齡婦女在中國(guó)不同地區(qū) （5省市） 中的分布

表1 孕前及不同孕期育齡婦女B19病毒抗體陽(yáng)性率Tab.1 Distribution of women with IgM/IgG-positive antibodies for parvovirus B19 before pregnancy and during different stages of pregnancy

B19病毒IgM抗體陽(yáng)性的育齡婦女樣本例數(shù)較少，分別是北京、重慶、上海各1例 （分別處于孕中、孕前和孕晚期） ，沈陽(yáng)2例 （分別處于孕早期及孕晚期） 。其中1名來(lái)自沈陽(yáng)的孕早期抗體雙陽(yáng)性孕婦是在孕7周時(shí)檢測(cè)出B19病毒抗體陽(yáng)性；在懷孕第18周時(shí)超聲結(jié)果提示“胎兒水腫，伴胎兒心內(nèi)膜墊缺損”。另一名來(lái)自沈陽(yáng)的孕晚期孕婦是在孕32周時(shí)檢測(cè)出B19病毒IgM及IgG抗體陽(yáng)性，于孕38周時(shí)順產(chǎn)。

B19 病毒IgG陽(yáng)性的育齡婦女共213名，在北京、重慶、上海、深圳及沈陽(yáng)分別占研究人群的比例見(jiàn)圖1；在中國(guó)5個(gè)不同城市的育齡婦女中，B19病毒IgG抗體的陽(yáng)性率存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異 （P ＜ 0.01） 。

2.3 B19病毒既往感染與高風(fēng)險(xiǎn)因素相關(guān)性分析

既往報(bào)道，B19病毒感染的高危人群包括學(xué)齡前和學(xué)齡兒童的母親、幼兒園的保育員以及中小學(xué)學(xué)校教師。本研究中B19病毒的既往感染 （即血清IgG陽(yáng)性，IgM陰性） 與已報(bào)道的高風(fēng)險(xiǎn)因素?zé)o明顯的相關(guān)性，見(jiàn)表2。

圖1 中國(guó)5市育齡婦女中B19病毒 IgG陽(yáng)性率Fig.1 Rates of IgG-positive antibodies for parvovirus B19 in reproductive-aged women from five different cities

表2 B19病毒既往感染與高風(fēng)險(xiǎn)因素相關(guān)性分析Tab.2 Association between past parvovirus B19 infection and high-risk factors

3 討論

孕婦感染B19病毒后，病毒可以通過(guò)胎盤(pán)引起胎兒宮內(nèi)感染。盡管大多數(shù)情況下的宮內(nèi)感染不影響胎兒結(jié)局，但部分先天性B19病毒感染會(huì)導(dǎo)致自然流產(chǎn)、胎兒水腫、嚴(yán)重的胎兒貧血以及死胎等不良后果。目前，臨床對(duì)于疑似B19病毒感染的患者多進(jìn)行病毒IgM及IgG抗體檢測(cè)。在B19病毒感染7～10 d后特異性IgM抗體即達(dá)到可檢出水平，14～18 d后抗體滴度達(dá)到高峰，通常體內(nèi)IgM抗體可持續(xù)1個(gè)月到數(shù)月；而IgG抗體多在感染后14 d左右達(dá)到可檢出水平，之后緩慢上升，4周后達(dá)到高峰［4］。美國(guó)婦產(chǎn)科醫(yī)師協(xié)會(huì) （the American College of Obstetricians and Gynecologists，ACOG）［5］指出，全世界范圍內(nèi)育齡婦女的B19病毒血清IgG抗體陽(yáng)性率為50%～65%，IgM抗體陽(yáng)性率在1%～3%左右。

在本次多中心研究中，研究對(duì)象來(lái)自于包括東北、華北、華東、華南和西部地區(qū)中心城市的5家三級(jí)甲等醫(yī)院，研究資料反映了中國(guó)不同地域B19病毒在健康育齡婦女中的自然感染情況。本研究獲得的B19病毒血清IgG陽(yáng)性率是15.20%，IgM的陽(yáng)性率是0.36%；上述有關(guān)數(shù)據(jù)不僅低于國(guó)外水平，也低于國(guó)內(nèi)早期報(bào)道的B19病毒血清流行病學(xué)數(shù)據(jù)［6-7］。既往研究使用的檢測(cè)方法主要是通過(guò)PCR檢測(cè)B19病毒核酸，或者ELISA測(cè)定B19病毒抗體。盡管PCR方法具有高度敏感性，但是與ELISA方法一樣，可能存在假陽(yáng)性的結(jié)果。本研究采用全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析法，可最大限度地減少人為因素的影響，準(zhǔn)確性和特異性更強(qiáng)［8］。B19病毒檢測(cè)方法的不同可能是造成感染率不同的原因之一；而IgM陽(yáng)性率低的另一個(gè)原因可能與本次研究標(biāo)本收集的持續(xù)時(shí)間較短，沒(méi)有涵蓋B19病毒主要流行的冬春季相關(guān)。

ACOG指出，胎兒B19病毒宮內(nèi)感染的風(fēng)險(xiǎn)及對(duì)妊娠結(jié)局的影響與感染時(shí)孕周有關(guān)，孕早期和孕中期B19病毒感染會(huì)增加自然流產(chǎn)風(fēng)險(xiǎn)。血清學(xué)結(jié)果證實(shí)，孕20周前感染B19病毒的孕婦，胎兒丟失率約為8%～17%；而孕20周后急性感染者，胎兒丟失率下降至2%～6%［9］。本研究對(duì)沈陽(yáng)市2例B19病毒 IgM及IgG雙陽(yáng)性的孕婦進(jìn)行了隨訪(fǎng)，1例在孕早期檢測(cè)出急性感染的孕婦，在孕18周時(shí)超聲提示“胎兒水腫”，進(jìn)行了引產(chǎn)處置；另1例孕晚期急性感染的孕婦，B19病毒未對(duì)孕婦及胎兒造成明確不良影響。另外，IgM單陽(yáng)性的2名育齡婦女，3個(gè)月后的血清復(fù)查結(jié)果均為IgM抗體轉(zhuǎn)陰而IgG抗體陽(yáng)轉(zhuǎn)，符合B19病毒的抗體血清轉(zhuǎn)換規(guī)律。

B19病毒感染多為終身免疫，血清IgG陽(yáng)性率會(huì)隨其年齡的增長(zhǎng)而逐漸增加。但是，本研究未發(fā)現(xiàn)≤30歲與＞30歲育齡婦女的B19病毒IgG抗體陽(yáng)性率存在差異 （P ＞ 0.05） ，可能是分組后樣本數(shù)較少所致。本研究結(jié)果顯示，孕前及不同孕期育齡婦女的B19病毒的IgG陽(yáng)性率無(wú)明顯差異，但是不同地區(qū)B19病毒的血清IgG抗體陽(yáng)性率有明顯差異。沈陽(yáng)市的育齡婦女中B19病毒IgG抗體陽(yáng)性率明顯低于其他城市，而北京市育齡婦女的B19病毒IgG抗體陽(yáng)性率最高，本研究結(jié)果與國(guó)內(nèi)既往報(bào)道［10-12］的相關(guān)結(jié)果相似。提示在我國(guó)各不同地區(qū)，B19病毒的血清陽(yáng)性率可能有很大差異，但是差異的原因尚不清楚。

有文獻(xiàn)［13-14］報(bào)道，妊娠期微小病毒B19感染與孕婦接觸人群有關(guān)，有明顯的職業(yè)傾向，與學(xué)齡前及學(xué)齡兒童接觸較多的孕婦妊娠期感染的風(fēng)險(xiǎn)增高；感染的高危人群包括學(xué)齡前和學(xué)齡兒童的母親、幼兒園的保育員以及中小學(xué)學(xué)校教師。在B19病毒感染的爆發(fā)流行期，急性感染率能達(dá)到10%～13%，而2016年下半年可能處于該病毒感染的非流行期，本研究?jī)H有5例受檢者為B19 病毒IgM陽(yáng)性；無(wú)法進(jìn)行B19病毒急性感染與風(fēng)險(xiǎn)因素的評(píng)估。本研究通過(guò)育齡婦女血清IgG陽(yáng)性率，分析了B19病毒既往感染與各地區(qū)育齡婦女家庭成員中是否有其他兒童、是否從事保育員或教師工作的關(guān)系，結(jié)果顯示，B19病毒既往感染和所研究人群與嬰幼兒及兒童接觸機(jī)會(huì)的多少無(wú)相關(guān)性。無(wú)論如何，擴(kuò)大樣本量，進(jìn)行不同時(shí)間、不同地域以及不同人群 （包括嬰幼兒及兒童） B19病毒的檢測(cè)，并進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)因素評(píng)估，將提供更為科學(xué)準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)。

綜上，中國(guó)不同地域B19病毒既往感染率存在明顯差異。約85%的中國(guó)育齡婦女是B19病毒的易感者，這部分人群易發(fā)生急性原發(fā)性B19病毒感染，尤其在B19病毒感染的爆發(fā)流行期，會(huì)對(duì)胎兒造成嚴(yán)重危害。因而需要對(duì)孕婦B19病毒感染給予足夠的重視。