趙 鑫,曾 強,王 洋,曹經(jīng)林,任貴軍
(河北醫(yī)科大學第三醫(yī)院肝膽外科,河北 石家莊 050010)
肝癌是指發(fā)生于肝臟的惡性腫瘤[1]。研究發(fā)現(xiàn),惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移與其微血管和微淋巴管的密度密切相關。環(huán)加氧酶(cyclooxygenase,COX)是前列腺素(prostaglandins, PG)合成過程中的限速酶,其底物是花生四烯酸[2]。大量的臨床實驗結果表明,COX-2在消化系統(tǒng)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移過程中起著重要的作用[3-4]。本文主要研究肝癌組織中COX-2蛋白的表達與肝癌組織中微血管密度(MVD)和微淋巴管密度(MLVD)的相關性,分析COX-2蛋白的表達在肝癌轉(zhuǎn)移中的作用,以期為肝癌的臨床治療提供參考。
本次研究的對象是2016年10月至2017年10月期間河北醫(yī)科大學第三醫(yī)院收治的50例肝癌患者。在這些患者中,有男性30例,女性20例;其年齡為29~68歲,平均年齡為(42.5±0.9)歲。本次研究對象的納入標準是:1)其年齡>18歲;2)其腫瘤的臨床分期符合2001年全國肝癌會議發(fā)布的關于肝癌的分期標準[5]。本次研究對象的排除標準是:1)其腫瘤的臨床分期不明確或臨床資料不全;2)其合并有其他的原發(fā)性惡性腫瘤。
研究這些患者的性別、年齡、腫瘤細胞的分化程度、腫瘤的臨床分期及是否存在淋巴結轉(zhuǎn)移等臨床資料。使用免疫組化法檢測這些患者肝癌組織中COX-2蛋白的表達,分析其肝癌組織中COX-2蛋白的表達與MVD和MLVD的關系,從而判定肝癌組織中COX-2蛋白的表達與腫瘤轉(zhuǎn)移的相關性。
1)用PBS緩沖液作為空白對照品。在顯微鏡下觀察這些患者肝癌組織標本的HP染色圖片。COX-2蛋白表達的陽性標準是:患者肝癌組織中的細胞膜、細胞漿內(nèi)可見棕黃色的顆粒。COX-2蛋白表達的陰性標準是:患者肝癌組織中的細胞膜、細胞漿中未見著色顆粒。在高倍顯微鏡下觀察這些患者的病理切片。在每個病理切片中任意選擇5個視野,在每個視野中選擇200個腫瘤細胞,共選擇1000個腫瘤細胞。COX-2蛋白表達呈陽性的腫瘤細胞的數(shù)量所占的比例若<1%,表示腫瘤組織中COX-2蛋白的表達呈陰性(-);COX-2蛋白表達呈陽性的腫瘤細胞的數(shù)量所占的比例若為1%~10%,表示腫瘤組織中COX-2蛋白的表達呈弱陽性(+);COX-2蛋白表達呈陽性的腫瘤細胞的數(shù)量所占的比例若為11%~50%,表示腫瘤組織中COX-2蛋白的表達呈中度陽性(++);COX-2蛋白表達呈陽性的腫瘤細胞的數(shù)量所占的比例若≥51%,表示腫瘤組織中COX-2蛋白的表達呈強陽性(+++)。除檢查結果為陰性以外,均可判定腫瘤細胞中的COX-2蛋白呈陽性表達。2)參照 Weidner計數(shù)法,在低倍顯微鏡下觀察這些患者的病理切片。在每個病理切片中選取2個染色陽性數(shù)目較多的區(qū)域。然后在高倍顯微鏡下觀察每張病理切片[7]。計算經(jīng)CD34標記的微血管的數(shù)量,每個病理切片取5個視野,取其平均值,計算MVD和MLVD。
使用SPSS13.0統(tǒng)計軟件對本次研究中的數(shù)據(jù)進行處理。計量資料用均數(shù)±標準差(±s)表示,采用t檢驗。計數(shù)資料用百分比(%)表示,采用χ2檢驗。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義。
在這些肝癌患者中,不同年齡、性別的患者其肝癌組織中COX-2蛋白的陽性表達率相比差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。腫瘤分期為Ⅰ期、Ⅱ期的患者其肝癌組織中COX-2蛋白的陽性表達率低于腫瘤分期為Ⅲ期、Ⅳ期的患者(P<0.05)。腫瘤細胞的分化程度為低分化的患者其肝癌組織中COX-2蛋白的陽性表達率高于腫瘤細胞的分化程度為中、高分化的患者(P<0.05)。存在淋巴結轉(zhuǎn)移的患者其肝癌組織中COX-2蛋白的陽性表達率高于不存在淋巴結轉(zhuǎn)移的患者(P<0.05)。對同一組織細胞中COX-2蛋白的表達與MVD和MLVD的相關性進行分析的結果顯示,肝癌組織中COX-2蛋白的表達與MVD呈正相關(r=0.6261,P<0.001)。肝癌組織中COX-2蛋白的表達與MLVD呈正相關(r=0.6091,P<0.001)。詳情見表1。
表1 不同的肝癌患者其肝癌組織中COX-2蛋白表達陽性率的比較
研究發(fā)現(xiàn),微血管、微淋巴管的形成是腫瘤發(fā)生、發(fā)展的重要過程[8-9]。COX-2蛋白是前列腺素合成過程中一種重要的限速酶,其表達呈誘導性。COX-2蛋白參與了肝癌發(fā)生、發(fā)展的全過程,在肝癌組織中呈高表達。COX-2蛋白是通過抑制正常細胞的凋亡、增強腫瘤細胞的繁殖能力、促進腫瘤內(nèi)血管的形成、增強腫瘤細胞的侵襲力參與到腫瘤發(fā)生、發(fā)展的過程中[10]。研究發(fā)現(xiàn),COX-2蛋白的表達水平與腫瘤組織的病理類型、臨床分期、是否存在淋巴結轉(zhuǎn)移等因素密切相關[11]。本次研究的結果顯示,COX-2蛋白在低分化肝癌組織中的表達水平高于在中、高分化肝癌組織中的表達水平。腫瘤分期為III期、IV期的患者其肝癌組織中COX-2 蛋白的表達水平高于腫瘤分期為Ⅰ期、Ⅱ期的患者。存在淋巴結轉(zhuǎn)移的患者其肝癌組織中COX-2 蛋白的表達水平高于不存在淋巴結轉(zhuǎn)移的患者。在同一個肝癌組織中,COX-2蛋白的表達與MVD及MLVD均呈正相關。說明肝癌組織中COX-2蛋白的表達在腫瘤轉(zhuǎn)移的過程中起著促進的作用。因此有研究者認為,COX-2蛋白抑制劑可能對肝癌患者癌細胞的轉(zhuǎn)移具有抑制的作用,這為肝癌的臨床治療提供了新的思路。
本次研究的結果證實,肝癌組織中COX-2蛋白的過度表達,可促進肝癌組織中微血管和微淋巴管的生長,使MVD和MLVD增加,從而使腫瘤發(fā)生轉(zhuǎn)移。