張 逸,毛俊舟,彭 眾,喻禮懷,董 麗,冀德君

(揚(yáng)州大學(xué) 動(dòng)物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，江蘇 揚(yáng)州 225009)

茶樹油具有抗菌、抗病毒、抗炎活性、除螨、抗腫瘤、止咳、抗氧化等功效[1]，其以一種類似膜活性消毒劑的方式殺滅多種微生物[2]。茶樹油可作為飼料添加劑，起到替代抗生素的抗菌作用，是未來飼料行業(yè)研究的熱點(diǎn)之一。動(dòng)物生長發(fā)育往往受到氧化應(yīng)激的影響。氧化應(yīng)激是機(jī)體自由基生成增加或(和)清除能力降低，引起機(jī)體氧化系統(tǒng)和抗氧化系統(tǒng)紊亂，導(dǎo)致自由基在體內(nèi)積累而引起的氧化損傷過程[3]。氧化應(yīng)激具有許多危害，是降低動(dòng)物生長性能，縮短畜產(chǎn)品貨架期，降低畜產(chǎn)品品質(zhì)，引發(fā)人和動(dòng)物各種心血管疾病和癌癥的重要病因之一[4]。斷奶應(yīng)激綜合征是制約集約化養(yǎng)豬發(fā)展的瓶頸問題，往往導(dǎo)致仔豬生長發(fā)育緩慢，飼料報(bào)酬降低，易由外源病原物質(zhì)的侵入機(jī)體而發(fā)生疾病。研究表明，斷奶導(dǎo)致仔豬發(fā)生嚴(yán)重的的氧化應(yīng)激，引起腸道屏障功能障礙，是引發(fā)斷奶應(yīng)激綜合征的重要原因[5]，氧化應(yīng)激不僅會降低斷奶仔豬的日增重，也會降低斷奶仔豬的抗氧化能力及免疫能力[6]。

本研究旨在探究茶樹油對仔豬胰腺發(fā)育及抗氧化功能的影響，探索茶樹油替代抗生素作為斷奶仔豬促生長添加劑的可行性,為茶樹油飼料添加劑開發(fā)及仔豬健康生產(chǎn)提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)所用茶樹油為澳洲茶樹油粉劑(有效含量為20%)，由無錫某生物科技有限公司提供，其中：4-萜品醇(terpinen-4-ol)≥30% ，1,8-桉油素(1,8-cineole)≤15%。試驗(yàn)仔豬為21日齡杜×長×大斷奶仔豬，由太倉某有限公司提供。

1.2 試驗(yàn)方案

試驗(yàn)選取90頭體重相近(6.73±0.12 kg)的21日齡杜×長×大三元雜交斷奶仔豬，采用單因子試驗(yàn)設(shè)計(jì)，隨機(jī)分為5組，分別為對照組(CON組，飼喂基礎(chǔ)飼糧)、抗生素組(Ant組，基礎(chǔ)飼糧+200mg/kg10%的硫酸黏菌素+75mg/kg15%的金霉素)、低茶樹油組(LTO組，基礎(chǔ)飼糧+250mg/kg20%的茶樹油)、中茶樹油組(MTO組，基礎(chǔ)飼糧+500mg/kg 20%的茶樹油)、和高茶樹油組(HTO組，基礎(chǔ)飼糧+750mg/kg20%的茶樹油)，每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)6頭仔豬，公母各半。試驗(yàn)于2016年6月在江蘇省太倉金諸種豬場進(jìn)行，試驗(yàn)期21 d。試驗(yàn)基礎(chǔ)飼糧參照NRC(2012)仔豬營養(yǎng)需要標(biāo)準(zhǔn)并結(jié)合生產(chǎn)實(shí)踐配制(表1)。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))Table 1 Composition and nutrient levels of basal diets (air-dry basis)

1.3 飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)豬在同一舍內(nèi)飼養(yǎng)，每重復(fù)為1欄，共15欄。飼糧為粉料，仔豬自由采食(每日喂5次，飼喂時(shí)間為7點(diǎn)、10點(diǎn)、14點(diǎn)、17點(diǎn)、19點(diǎn)，每次添加量以料槽中略有剩余為宜)，自由飲水。每天清掃圈舍保持圈內(nèi)干凈，自然通風(fēng)，日常管理、消毒與防疫生產(chǎn)按照豬場常規(guī)程序進(jìn)行。

1.4 測定指標(biāo)及方法

1.4.1 胰腺器官指數(shù) 試驗(yàn)第21天，每個(gè)重復(fù)選取2頭仔豬(即每個(gè)試驗(yàn)組選取6頭，公母各半)，屠宰前進(jìn)行稱重，屠宰后進(jìn)行胰腺的稱重，計(jì)算每頭仔豬的胰腺與體重的比值(胰腺指數(shù))。

1.4.2 胰腺組織結(jié)構(gòu) 對屠宰的仔豬胰腺進(jìn)行組織樣品的采集，隨后液氮冷藏運(yùn)輸回實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行-80 ℃冷藏保存?zhèn)溆?。使用時(shí)，取適量組織樣品制片進(jìn)行鏡檢，拍照分析其形態(tài)結(jié)構(gòu)、粒徑和圓度等相關(guān)指標(biāo)。

1.4.3 胰腺抗氧化指標(biāo) 取適量組織樣品制作10%勻漿，3 000 r/min離心取得上清液存于-20 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩y定上清液中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、總抗氧化能力(T-AOC)、還原型谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)的指標(biāo)，試劑盒均購自南京建成生物工程研究所，測定步驟按照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與處理

用SPSS 18.0軟件進(jìn)行單因素方差分析，用Duncan's法對各組間平均數(shù)進(jìn)行多重比較，以P<0.05表示差異顯著，P<0.01為差異極顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 茶樹油對斷奶仔豬胰腺器官指數(shù)的影響

由表2知，飼糧中添加茶樹油對斷奶仔豬胰腺重和胰腺指數(shù)影響均不顯著(P>0.05)。MTO組的胰腺重高出CON組6.11%，LTO組和HTO均與CON組相比均降低，其中HTO組胰腺重低于Ant組；LTO組、MTO組和HTO組均降低了胰腺指數(shù)，分別降低了10.0%、8.3%和25.3%，其中HTO組的胰腺指數(shù)低于Ant組。

表2 茶樹油對斷奶仔豬胰腺器官指數(shù)的影響Table 2 Effects of tea tree oil on pancreas index of weaned piglets

2.2 茶樹油對胰腺組織結(jié)構(gòu)的影響

由表3可知，LTO組、MTO組和HTO組的平均粒徑均顯著高出CON組和Ant組，其中MTO組的平均粒徑最大，高出CON組14.4%(P<0.05)，高出Ant組11.9%(P<0.05)；與CON組相比，試驗(yàn)組胰腺組織的圓度差異不顯著(P>0.05),但MTO組和HTO組高出CON組和Ant組;各組的細(xì)胞面積均大于CON組(P>0.05)。

表3 茶樹油對斷奶仔豬胰腺組織結(jié)構(gòu)的影響Table 3 Effects of tea tree oil on pancreatic tissue structure of weaned piglets

2.3 茶樹油對胰腺抗氧化指標(biāo)的影響

由表4可知，相對于CON組，LTO組、MTO組和HTO組的T-AOC差異不顯著(P>0.05)，但均高于CON組和Ant組(P>0.05)；與CON組相比，LTO組、MTO組和HTO組的SOD差異顯著(P<0.05)，分別低出11.0%、36.6%和34.1%，其中LTO組高于Ant組，其余均低于Ant組；LTO組的MDA與CON組相近，MTO和HTO組分別低出23.3%和20%，LTO組、MTO組和HTO組均高于Ant組(P>0.05)；相對于CON組，LTO組、MTO組和HTO組的GSH顯著降低(P<0.05)，分別低出16.6%、50.6%和30.2%，其中LTO組和HTO組高于Ant組，MTO組低于Ant組(P<0.05)；LTO組的GSH-Px高出CON組26.4%，MTO組和HTO組則低出CON組5.4%和7.5%(P>0.05)，LTO組、MTO組和HTO組均低于Ant組(P>0.05)。

表4 茶樹油對斷奶仔豬胰腺抗氧化性的影響Table 3 Effects of tea tree oil on resistance to pancreatic oxidation of weaned piglets

3 討 論

3.1 茶樹油對斷奶仔豬胰腺器官指數(shù)的影響

胰腺器官指數(shù)是衡量胰腺發(fā)育的一個(gè)重要指標(biāo)。李登赴等[7]研究發(fā)現(xiàn)，胰腺是一種重要的消化腺，在出生后的最初一段時(shí)間內(nèi)生長要比整個(gè)機(jī)體生長快，并且胰腺要在形態(tài)和功能上產(chǎn)生適應(yīng)性的改變以及組織快速生長。劉猛[8]試驗(yàn)表明，在斷奶仔豬飼糧中添加植物精油，可顯著提高仔豬平均日增重(ADG)和平均日采食量(ADFI)，降低料重比(F/G)。本研究結(jié)果顯示，MTO組的胰腺重高出CON組6.11%，LTO組和HTO均降低了胰腺重，HTO組胰腺重低于Ant組；LTO組、MTO組和HTO組均降低了胰腺指數(shù)，HTO組的胰腺指數(shù)低于Ant組。從研究結(jié)果可知，中等濃度茶樹油添加有利于胰腺組織的生長發(fā)育，但茶樹油的添加不會提高胰腺指數(shù)。出現(xiàn)該現(xiàn)象的可能原因是茶樹油更有利于促進(jìn)斷奶仔豬機(jī)體的增重，在胰腺組織方面雖具有促生長發(fā)育的效果，但不是特別的顯著。

3.2 茶樹油對胰腺組織結(jié)構(gòu)的影響

王亮等[9]研究發(fā)現(xiàn)，植物精油能促進(jìn)斷奶仔豬生長和蛋白質(zhì)的沉積，降低脂肪的沉積。在本試驗(yàn)中，茶樹油對胰腺的組織結(jié)構(gòu)產(chǎn)生了一定影響，LTO組、MTO組和HTO組的平均粒徑均高出CON組和Ant組，其中MTO組的平均粒徑最大；LTO組的圓度略微小于CON組和Ant組，MTO組和HTO組高出CON組和Ant組，差異顯著;各組面積均高于CON組。從研究結(jié)果可以得出，茶樹油對胰腺細(xì)胞的生長發(fā)育有一定的促進(jìn)作用，可能原因是茶樹油具有芳香氣味，使飼糧具有較好的適口性，可激活消化酶，從而促進(jìn)飼糧中營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收，有利于機(jī)體胰腺組織的生長發(fā)育。

3.3 茶樹油對胰腺抗氧化指標(biāo)的影響

曹璐[10]研究發(fā)現(xiàn)，植物提取物能顯著提高斷奶仔豬宰后豬肉的抗氧化能力。史東輝等[11]研究發(fā)現(xiàn)，唇型科植物提取物中的抗氧化物主要活性成分酚類化合物能和抗壞血酸及類胡蘿卜素阻止自由基引發(fā)的氧化傷害。金玉霞[12]試驗(yàn)表明，茶樹花精油具有明顯的總抗氧化活性，能提高機(jī)體抗氧化能力。本次研究結(jié)果顯示，相對于CON組，LTO組的T-AOC高出最多為62.3%；在SOD這一指標(biāo)上，LTO組、MTO和HTO組均有所降低；LTO組的MDA與CON組近乎一樣高，MTO和HTO組則低出許多；相對于CON組，LTO組、MTO組和HTO組的GSH均有所降低；LTO組的GSH-Px高出CON組26.4%，MTO組和HTO組則低出CON組5.4%和7.5%。從本研究結(jié)果來看，與前人研究大體一致，中低濃度的茶樹油對于T-AOC、MDA和GSH-Px均起到積極的作用。試驗(yàn)中的茶樹油的添加對于SOD和GSH產(chǎn)生了抑制的作用，其具體機(jī)制有待于進(jìn)一步的討論研究。