羅茗月， 肖克林， 藍(lán)慧娟， 麥光興， 熊禮寬

（深圳市寶安區(qū)婦幼保健院中心實(shí)驗(yàn)室，廣東 深圳 518102）

地中海貧血（簡(jiǎn)稱地貧）是以珠蛋白鏈合成減少或缺失而引起的溶血性疾病，是地中海地區(qū)、撒哈拉沙漠以南非洲地區(qū)、東南亞國(guó)家和中國(guó)南部地區(qū)重要的公共衛(wèi)生健康問題[1]。針對(duì)高風(fēng)險(xiǎn)育齡人群進(jìn)行地貧篩查和遺傳學(xué)分析是控制地貧發(fā)生的有效手段。成人血紅蛋白（hemoglobin，Hb）主要成分為HbA（α2β2）（96.0%），其次為HbA2（α2δ2）（2.5%～3.5%）和HbF（α2γ2）（＜1.0%）。對(duì)Hb組分進(jìn)行檢測(cè)是地貧篩查的重要手段，HbA2＞3.5%是β-地貧篩查可靠的指標(biāo)之一，HbA2＜2.5%則提示有缺鐵性貧血或α-地貧的可能[2-4]。雖然HbA2可用于地貧篩查，但在HbA22.5%～3.5%的人群中仍然可檢出一定比例的地貧攜帶（患）者[5]，這與地貧攜帶（患）者表型的高度異質(zhì)性有關(guān)。本研究回顧分析2 194例α-地貧和970例β-地貧女性攜帶（患）者的基因型分布以及其中1 438例α-地貧和646例β-地貧攜帶（患）者HbA2的參數(shù)特征，這將有助于臨床對(duì)HbA2檢測(cè)結(jié)果的理解和判斷，并可為遺傳咨詢提供理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 研究對(duì)象

選取2 0 1 2年1月—2 0 1 6年6月在深圳市寶安區(qū)婦幼保健院進(jìn)行地貧基因檢測(cè)的育齡女性4 7 9 3名。按基因型將其分為3組：α-地貧（不合并β-地貧）2 194例，平均年齡（27.2±4.5）歲；β-地貧（不合并α-地貧）970例，平均年齡（27.3±4.5）歲；非地貧健康對(duì)照者（不攜帶地貧基因，Hb≥110 g/L）1 629名，平均年齡（27.3±4.4）歲。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集 采集研究對(duì)象新鮮外周血2 mL，進(jìn)行抗凝處理。HbA2檢測(cè)使用乙二胺四乙酸二鉀抗凝管，地貧基因檢測(cè)使用枸櫞酸鈉抗凝管。

1.2.2 Hb分析 采用VARIANT Ⅱ血紅蛋白分析儀（美國(guó)Bio-Rad公司）及配套試劑和質(zhì)控品檢測(cè)HbA2水平，嚴(yán)格按照說明書要求進(jìn)行操作，室內(nèi)質(zhì)控在控后進(jìn)行標(biāo)本檢測(cè)。

1.2.3 地貧基因檢測(cè) 使用亞能生物技術(shù)（深圳）有限公司試劑進(jìn)行DNA提取、聚合酶鏈反應(yīng)（polymerase chain reaction，PCR）擴(kuò)增和產(chǎn)物檢測(cè)。采用裂口聚合酶鏈反應(yīng)（gappolymerase chain reaction，Gap-PCR）進(jìn)行缺失型α-地貧基因檢測(cè)。采用PCR-反向斑點(diǎn)雜交（reverse dot blot，RDB）進(jìn)行α-地貧和β-地貧點(diǎn)突變檢測(cè)。缺失型α-地貧基因型包括右缺失型（-α3.7）、左缺失型（-α4.2）和東南亞型（--SEA）；α-地貧點(diǎn)突變包括Hb Constant Spring （Hb CS）、Hb Quong Sze （Hb QS）和Hb Westmead （Hb WS）；β-地貧點(diǎn)突變包括CD14-15、CD17、CD27-28、CD31、CD41-42、CD43、CD71-72、CD26（βE）、-28、-29、-30、-32、IVS-Ⅰ-1、IVS-Ⅰ-5、IVS-Ⅱ-654、CAP+1和Initiation codon。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 α-地貧組和β-地貧組基因型分布特征

在α-地貧組中，靜止型組有5種基因型，以-α3.7/αα和-α4.2/αα為主；標(biāo)準(zhǔn)型組有9種基因型，以--SEA/αα為主；HbH病組有5種基因型，以-α3.7/--SEA為主。在β-地貧組中，β0-地貧組有8種基因型，以βCD41-42/βN和βCD17/βN為主；β+-地貧組有4種基因型，以βIVS-Ⅱ-654/βN和β-28/βN為主；βE-地貧組只有βCD26/βN1種基因型。見表1。

2.2 不同基因型α-地貧組的HbA2結(jié)果

α-地貧組中1 438例HbA2數(shù)據(jù)完整，對(duì)照組、靜止型組、標(biāo)準(zhǔn)型組和HbH病組的HbA2水平組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=57.34，P＜0.05）。對(duì)照組、靜止型組、標(biāo)準(zhǔn)型組和HbH病組HbA2水平依次降低（P＜0.05），但對(duì)照組與靜止型組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表2。

2.3 不同基因型β-地貧組的HbA2結(jié)果

β-地貧組中646例HbA2數(shù)據(jù)完整，對(duì)照組、β0-地貧組、β+-地貧組和βE-地貧組的HbA2水平組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=18 509.38，P＜0.05）。對(duì)照組、β+-地貧組、β0-地貧組和βE-地貧組HbA2水平依次升高（P＜0.05）。見表3。

3 討論

表1 α-地貧組和β-地貧組基因型分布

表2 對(duì)照組和α-地貧組HbA2結(jié)果的比較

表3 對(duì)照組和β-地貧組HbA2結(jié)果的比較

本研究回顧分析了深圳市寶安區(qū)婦幼保健院地貧攜帶（患）者基因型分布情況，2 194例α-地貧攜帶（患）者中，最常見的是--SEA/αα、-α3.7/αα和-α4.2/αα，單純點(diǎn)突變中以αCSα/αα比例最高。廣東地區(qū)和廣西地區(qū)α-地貧基因型比例最高的3種也是--SEA/、-α3.7/和-α4.2/，但點(diǎn)突變中αWSα/比αCSα/和αQSα/比例更高[6-7]。云南地區(qū)α-地貧常見基因型依次為--SEA/、-α3.7/和αCSα/[8]。海南地區(qū)黎族人群中則以-α4.2/和-α3.7/最為常見，--SEA/較為少見[9]。本研究結(jié)果顯示，-α3.7/和--SEA/這2種基因型比例較高，HbH病也是以-α3.7/--SEA為主，其次為αWSα/--SEA和-α4.2/--SEA。在云南地區(qū)以及非地貧高發(fā)的北方地區(qū)，HbH病最常見的基因型也是-α3.7/--SEA，其他幾種基因型較為少見[8，10]。本研究970例β-地貧攜帶（患）者中，最常見的基因型為βCD41-42/βN、βIVS-Ⅱ-654/βN、βCD17/βN和β-28/βN。在廣東地區(qū)，β-地貧基因型比例最高的是βCD41-42/和βIVS-Ⅱ-654/，其次為β-28/和βCD17/[6]，與本研究結(jié)果基本一致。然而，云南地區(qū)最常見的β-珠蛋白突變型最常見的為βCD26/，其次為βCD17/、βCD41-42/和βIVS-Ⅱ-654/[8]。海南地區(qū)黎族人群β-地貧只有βCD41-42/1種基因型，但海南地區(qū)漢族人群以βCD41-42/和βIVS-Ⅱ-654/最為常見[9]。

正常情況下球蛋白α鏈會(huì)優(yōu)先與β鏈結(jié)合形成血液中主要的Hb，即HbA，正常成人Hb主要成分為HbA（α2β2），HbA2（α2δ2）和HbF（α2γ2）水平很低。β-地貧由于β鏈合成減少，過量的α鏈會(huì)與δ鏈結(jié)合形成HbA2，所以β-地貧會(huì)使HbA2水平升高[11]。與β+-地貧組相比，β0-地貧的β鏈合成量更低，所以理論上β0-地貧過量α鏈與δ鏈結(jié)合形成的HbA2也更多，但這種差異僅在部分研究中被證實(shí)，這可能與不同研究中基因型、人群特征和樣本量的不同有關(guān)。RUND等[12]的研究結(jié)果顯示β0-地貧比β+-地貧HbA2水平升高更加明顯，STEFANIS等[13]的研究結(jié)果顯示二者HbA2水平無差異。本研究結(jié)果顯示，β-地貧組HbA2水平明顯高于對(duì)照組，β+-地貧組和β0-地貧組的HbA2水平均＞5%，且β0-地貧組HbA2水平高于β+-地貧組，而βE-地貧組HbA2水平x為26.28%，遠(yuǎn)高于β0-地貧組和β+-地貧組。

α-地貧由于α鏈合成減少，β鏈比例相對(duì)較高，導(dǎo)致α鏈和δ鏈的結(jié)合減少，所以α-地貧會(huì)使HbA2水平降低。蔡稔等[14]研究結(jié)果顯示對(duì)照組與HbH病組、對(duì)照組與標(biāo)準(zhǔn)型組HbA2水平均有顯著差異。本研究對(duì)照組、靜止型組、標(biāo)準(zhǔn)型組和HbH病組HbA2水平是依次降低的。對(duì)照組和靜止型組HbA2水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，x 均為2.60%，標(biāo)準(zhǔn)型組HbA2水平 x為2.47%，HbH病組HbA2水平明顯降低，x為1.86%。該研究結(jié)果提示除β-地貧外，HbA2對(duì)HbH病的篩查參考價(jià)值較大，但單一由HbA2來篩查α-地貧會(huì)造成部分靜止型和標(biāo)準(zhǔn)型的漏篩。此外，由于缺鐵性貧血患者HbA2水平也會(huì)降低[15]，因此對(duì)于HbA2水平降低的患者還應(yīng)與缺鐵性貧血進(jìn)行鑒別，進(jìn)行鐵代謝相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)和基因檢測(cè)。

綜上所述，不同基因型地貧攜帶（患）者HbA2水平各有特點(diǎn)，HbA2對(duì)β-地貧和HbH病的篩查參考價(jià)值更大。HbA2作為篩查指標(biāo)存在一定的假陰性，所以在臨床咨詢中應(yīng)結(jié)合血常規(guī)結(jié)果進(jìn)行分析。另外，本研究未對(duì)α-地貧和β-地貧不同基因型HbA2水平進(jìn)行分析，所以在后續(xù)研究中將繼續(xù)收集標(biāo)本，同時(shí)將α合并β基因型也納入比較，以期為地貧篩查和遺傳咨詢提供更完整的理論依據(jù)。