董孝龍

(商丘市第四人民醫(yī)院骨科，河南 商丘 476005)

侵襲性骨腫瘤有骨巨細(xì)胞瘤、動(dòng)脈瘤樣骨囊腫、成軟骨細(xì)胞及骨細(xì)胞瘤等。侵襲性骨腫瘤細(xì)胞凋亡及P53、P21、B細(xì)胞淋巴瘤/白血病-2(B-cell lymphoma/leukemia-2, Bcl-2)的表達(dá)關(guān)系是目前基因研究的熱點(diǎn)問(wèn)題。本文選取我院2014年1月至2017年1月收治的侵襲性骨腫瘤患者62例，對(duì)其腫瘤組織凋亡情況及P53、P21、Bcl-2表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料回顧性分析我院2014年1月至2017年1月收治的62例侵襲性骨腫瘤患者臨床資料，其中男37例，女25例；年齡18～52(45.47±1.47)歲；骨肉瘤21例，骨巨細(xì)胞瘤25例，軟骨肉瘤3例，軟骨母肉瘤4例，骨母細(xì)胞瘤5例，尤文肉瘤4例，其中骨巨細(xì)胞瘤、軟骨母肉瘤、骨母細(xì)胞瘤為良性骨腫瘤，骨肉瘤、軟骨肉瘤、尤文肉瘤為惡性骨腫瘤。納入標(biāo)準(zhǔn)：1)病理確診的患者；2)病情穩(wěn)定的患者；3)知情同意的患者。排除標(biāo)準(zhǔn)：1)合并其他惡性腫瘤的患者；2)白血病患者；3)合并傳染病患者。

1.2檢測(cè)方法手術(shù)切除腫瘤組織，所得組織經(jīng)質(zhì)量分?jǐn)?shù)10%中性甲醛溶液常規(guī)固定，骨標(biāo)本固定經(jīng)體積分?jǐn)?shù)5%硝酸溶液脫鈣處理，然后進(jìn)行常規(guī)脫水、透明、石蠟包埋，連續(xù)切片(常規(guī)厚度)，分別進(jìn)行免疫組化染色和凋亡檢測(cè)。石蠟切片的制作需嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)要求進(jìn)行。蛋白抗體、免疫組化試劑盒及細(xì)胞凋亡試劑盒均購(gòu)自上海賽默飛生物科技有限公司。

細(xì)胞凋亡的檢測(cè)：檢測(cè)程序需嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，原位DNA斷裂位點(diǎn)的3’-羥基末端標(biāo)記法。DAB顯色，使用蘇木素液輕度染色，脫水，并應(yīng)用二甲苯透明，封固切片，使用已知陽(yáng)性組織切片作為陽(yáng)性對(duì)照。

P53、P21、Bcl-2檢測(cè)：切片用60 ℃連續(xù)燒烤3 h，SABC法免疫組化染色，使用蘇木素液輕度復(fù)染，脫水，二甲苯透明處理，封固切片，將已知陽(yáng)性的組織切片作為陽(yáng)性對(duì)照。三者均以出現(xiàn)黃色或棕黃色染色顆粒為陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果

2.1良惡性骨腫瘤細(xì)胞P53、P21和Bcl-2蛋白的表達(dá)P21陽(yáng)性著色部位在細(xì)胞核，P53、Bcl-2陽(yáng)性著色部位主要在細(xì)胞核及細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，未見(jiàn)其他部位著色。良性骨腫瘤的細(xì)胞凋亡率(76.31%)高于惡性骨腫瘤(53.28%)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。良性骨腫瘤組織中P53、P21、Bcl-2陽(yáng)性表達(dá)表達(dá)率分別為66.51%、45.58%、0.00%，低于惡性骨腫瘤的79.54%、72.89%、22.56%，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)。

2.2惡性骨腫瘤組織中P53、P21和Bcl-2蛋白表達(dá)與各臨床病理特征關(guān)系的COX比例風(fēng)險(xiǎn)模型分析結(jié)果COX比例風(fēng)險(xiǎn)模型分析顯示惡性骨腫瘤組織中P53、P21和Bcl-2蛋白表達(dá)與年齡、類型、病程、侵襲程度有關(guān)(P均<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 惡性骨腫瘤組織中Bcl-2蛋白表達(dá)與各臨床病理特征關(guān)系的COX比例風(fēng)險(xiǎn)模型分析結(jié)果

3 討論

骨巨細(xì)胞瘤是最常見(jiàn)的原發(fā)性骨腫瘤之一，其發(fā)生率占全部骨腫瘤的20%[1]，中國(guó)人發(fā)生率是歐美地區(qū)人群的3倍[2]。該腫瘤介于良惡性之間，但局部侵襲性強(qiáng),主要表現(xiàn)為溶骨性病變,部分良性骨巨細(xì)胞瘤可發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，具有潛在惡性，常規(guī)手術(shù)治療復(fù)發(fā)率高。骨巨細(xì)胞瘤的病理學(xué)特征是破骨細(xì)胞樣多核巨細(xì)胞和單核基質(zhì)細(xì)胞并存。由于破骨細(xì)胞樣多核巨細(xì)胞是骨巨細(xì)胞瘤的重要組成部分。因而很多學(xué)者認(rèn)為，多核巨細(xì)胞是骨巨細(xì)胞瘤骨吸收的原因，然而在病理分級(jí)中，Ⅰ級(jí)骨巨細(xì)胞瘤組織中的多核巨細(xì)胞數(shù)量多于Ⅲ級(jí)，但局部溶骨性改變比Ⅰ級(jí)嚴(yán)重，因此，骨巨細(xì)胞瘤的溶骨性并非單一多核巨細(xì)胞作用所致，可能是多種細(xì)胞成分參與的結(jié)果[3]。近年來(lái)研究[4]表明，腫瘤的發(fā)生及生物學(xué)特性與細(xì)胞凋亡有密切關(guān)系。骨細(xì)胞凋亡是惡性腫瘤普遍自發(fā)現(xiàn)象。目前已清楚P21蛋白與細(xì)胞信息傳遞有關(guān)，是癌基因突變后編碼的突變，P21蛋白可使得信號(hào)系統(tǒng)開(kāi)展，持續(xù)不斷傳導(dǎo)生長(zhǎng)信號(hào)，導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)紊亂及腫瘤的發(fā)生，但當(dāng)前相關(guān)報(bào)道較少。有研究[5]報(bào)道認(rèn)為，部分骨腫瘤組織存在Ras癌基因的異常表達(dá)，84%的骨肉瘤的陽(yáng)性率較高。C-myc蛋白過(guò)度表達(dá)，可能單獨(dú)或與因子協(xié)同引起細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化。良性骨腫瘤患者中未見(jiàn)C-myc表達(dá)。本文研究結(jié)果顯示，惡性骨腫瘤的總細(xì)胞凋亡率低于良性骨腫瘤，表明惡性腫瘤惡性程度較高。葉彬等[6]研究神經(jīng)母細(xì)胞瘤椎管內(nèi)細(xì)胞凋亡發(fā)生，細(xì)胞凋亡多者預(yù)后較好。檢測(cè)膀胱癌及乳腺癌組織中的細(xì)胞凋亡指數(shù)，發(fā)現(xiàn)凋亡指數(shù)高者預(yù)后較差，凋亡指數(shù)及增殖指標(biāo)之間呈正相關(guān)。目前，臨床只能檢測(cè)一定時(shí)刻的細(xì)胞凋亡發(fā)生情況，不能連續(xù)檢測(cè)，且重復(fù)檢測(cè)費(fèi)用較高，耗資較大，基層醫(yī)院或地方醫(yī)院現(xiàn)無(wú)此研究條件。P53突變蛋白能促進(jìn)細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化，獲得癌基因功能。王玉峰等[7]研究發(fā)現(xiàn)，P53基因異常與其蛋白高表達(dá)有關(guān)，P53蛋白隨著腫瘤進(jìn)程的發(fā)展而增加。P21多發(fā)生在惡性腫瘤組織中，P21基因高表達(dá)。腫瘤細(xì)胞增殖活性受組織中P21表達(dá)影響。惡性骨腫瘤組織是一種生長(zhǎng)旺盛的增殖組織，Bcl-2陽(yáng)性表達(dá)是一種良惡性鑒別輔助指標(biāo)。

本文研究結(jié)果顯示，P53、P21在惡性骨腫瘤組織中高表達(dá)，且細(xì)胞凋亡率降低，提示惡性骨腫瘤細(xì)胞快速增殖，細(xì)胞凋亡率較低，表明惡性骨腫瘤細(xì)胞在快速增殖的同時(shí)也有部分細(xì)胞在趨于凋亡；本研究只在惡性骨腫瘤中檢測(cè)到Bcl-2的表達(dá)，驗(yàn)證了其是一種良惡性鑒別輔助指標(biāo)。腫瘤細(xì)胞凋亡與增殖是一個(gè)不斷變化的過(guò)程，兩者之間的平衡受內(nèi)外因素共同影響，目前還沒(méi)有一種確切技術(shù)能準(zhǔn)確預(yù)估細(xì)胞增殖與凋亡，無(wú)特定儀器對(duì)P53、P21、Bcl-2及凋亡指數(shù)進(jìn)行追蹤及檢測(cè)。Kim等[8]研究認(rèn)為，P53、P21、Bcl-2等3種基因蛋白表達(dá)不均衡，這主要與腫瘤細(xì)胞的自身特性有關(guān)。COX比例風(fēng)險(xiǎn)模型分析顯示惡性骨腫瘤組織中P53、P21和Bcl-2蛋白表達(dá)與年齡、類型、病程、侵襲程度有關(guān)，年齡越大、惡性程度越高、病程越長(zhǎng)、侵襲程度越大，其P53、P21、Bcl-2表達(dá)越高。

綜上所述，P53、P21、Bcl-2在侵襲性骨腫瘤中異常表達(dá)，且三者在良性骨腫瘤組織中的表達(dá)顯著低于惡性骨腫瘤。惡性骨腫瘤組織中P53、P21、Bcl-2的表達(dá)水平與年齡、類型、病程、侵襲程度有關(guān)，這說(shuō)明這些指標(biāo)與侵襲性骨腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有密切關(guān)系。