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        流式熒光法檢測胃蛋白酶原Ⅰ與Ⅱ的評價及應(yīng)用分析*

        2018-09-27 12:09:36何忠發(fā)駱安德盧彥蕙陳耀良蒙順武羅雪林
        檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床 2018年18期
        關(guān)鍵詞:熒光法流式化學(xué)發(fā)光

        何忠發(fā),駱安德,盧彥蕙,陳耀良,蒙順武,羅雪林,覃 聰

        (1.廣西壯族自治區(qū)來賓市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 546100;2.廣西壯族自治區(qū)來賓市中醫(yī)醫(yī)院檢驗(yàn)科 546100)

        胃癌組織分泌物中含有胃蛋白酶原Ⅰ、Ⅱ(PGⅠ、Ⅱ),測定PG有助于分析胃的分泌能力。血清PGⅠ、PGⅡ水平的變化可以反映胃黏膜的功能,因此對其準(zhǔn)確的測定在胃癌早期的篩查與療效監(jiān)測上具有重要意義。流式熒光法是基于熒光編碼微球和流式技術(shù)的一種臨床應(yīng)用型高通量發(fā)光檢測技術(shù),具有通量高、配套試劑多、應(yīng)用領(lǐng)域廣、重復(fù)性好,既能檢測蛋白質(zhì)又能檢測核酸等優(yōu)點(diǎn)[1]。因此,流式熒光法被廣泛應(yīng)用于胃部疾病的檢查?;瘜W(xué)發(fā)光法也是臨床常用檢測方法之一。有研究顯示,流式熒光法與化學(xué)發(fā)光法檢測PGⅠ、PGⅡ的結(jié)果在中等濃度方面基本一致[2-3]。但是對低濃度檢測的研究也是分析該方法的重要方面,本研究對流式熒光法檢測PGⅠ、PGⅡ的方法學(xué)進(jìn)行評估,并與化學(xué)發(fā)光法檢測的結(jié)果進(jìn)行對比分析,探討兩種檢測方法檢測PGⅠ、PGⅡ上的差異。

        1 資料與方法

        1.1一般資料 選取2013年12月至2015年9月來賓市人民醫(yī)院收治的胃疾病患者155例(患者納入例數(shù)參考文獻(xiàn)[4]),其中淺表性胃炎44例,萎縮性胃炎42例(幽門螺桿菌感染29例,無幽門螺桿菌感染13例),胃癌69例(早期39例,晚期30例);年齡22~79歲,平均(39.9±22.9)歲。選取同期在來賓市人民醫(yī)院體檢健康者145例,年齡23~80歲,平均(40.3±12.6)歲,無胃部疾病。兩組研究對象一般資料比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

        1.2儀器與試劑 PGⅠ、PG Ⅱ流式熒光定量測定試劑盒(上海透景生命科技有限公司),Luminex 200多功能流式點(diǎn)陣儀(上海透景生命科技有限公司);PGⅠ、PGⅡ化學(xué)發(fā)光微粒子免疫測定試劑盒(美國Abbott公司),i-2000全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析儀(美國Abbott公司)。

        1.3方法

        1.3.1PGⅠ、PGⅡ檢測 流式熒光法嚴(yán)格按照流式熒光定量測定試劑盒的說明書進(jìn)行操作,采用Luminex 200多功能流式點(diǎn)陣儀進(jìn)行PGⅠ、PGⅡ定量測定;化學(xué)發(fā)光微粒子免疫檢測法按Abbott公司試劑盒說明書操作。

        1.3.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作 測定0.4、1.0、5.0、10.0、50.0、200.0 ng/mL PGⅠ、PGⅡ混標(biāo)液中PGⅠ、PGⅡ水平,建立回歸方程,計(jì)算回歸方程及相關(guān)系數(shù)(r)。

        1.3.3流式熒光法檢測PGⅠ、PGⅡ的評價試驗(yàn) 取10 ng/mL PGⅠ、PGⅡ混標(biāo)溶液進(jìn)行重復(fù)性試驗(yàn),根據(jù)峰面積計(jì)算PGⅠ、PGⅡ檢測結(jié)果的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)[5];取9份淺表性胃炎患者血清樣本進(jìn)行回收試驗(yàn),參考王紹亮等[6]的回收試驗(yàn)方法,計(jì)算9個樣本PGⅠ、PGⅡ的水平,以平均值表示樣品中PGⅠ、PGⅡ的初始水平;取同一胃炎患者血清樣本4份分別加入0.4、10.0、200.0 ng/mL的PGⅠ、PGⅡ混標(biāo)液,然后測定PGⅠ、PGⅡ的水平,計(jì)算回收率=[(測定待測回收樣本濃度均值-測定基礎(chǔ)樣本濃度均值)/加入濃度]×100 %;在不同水平的PGⅠ、PGⅡ中加入干擾劑三酰甘油200 mg/mL、膽紅素20 mg/mL、血紅蛋白 20 mg/mL,計(jì)算回收率以分析抗干擾能力。

        1.3.4靈敏度和特異度實(shí)驗(yàn) 以胃鏡和病理診斷作為金標(biāo)準(zhǔn),對兩種方法的靈敏度、特異性進(jìn)行比較,靈敏度=真陽性人數(shù)/(真陽性人數(shù)+假陰性人數(shù))×100%,特異度=真陰性人數(shù)/(真陰性人數(shù)+假陽性人數(shù))×100%。

        2 結(jié) 果

        2.1流式熒光法檢測PGⅠ、PGⅡ基本參數(shù)分析 流式熒光法檢測PGⅠ、PGⅡ線性回歸方程為Y=62.49X+1.61和Y=41.18X+2.85,r=0.998 5、0.998 8,線性范圍為0.35~190.00 ng/mL和0.32~200.00 ng/mL檢出限為0.02 ng/mL和0.04 ng/mL。

        2.2流式熒光法檢測PGⅠ、PGⅡ評價試驗(yàn) 流式熒光法檢測10 ng/mL的PGⅠ、PGⅡ結(jié)果分別為9.3、9.1、9.5、9.8、9.2 ng/mL和9.5、9.0、9.2、9.9、9.3 ng/mL,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.96%和3.65%;流式熒光法檢測PGⅠ、PGⅡ在基礎(chǔ)濃度4.51 ng/mL和2.74 ng/mL,加入濃度為0.4、10.0和200.0 ng/mL的平均回收率為98.3%~100.1%和95.8%~100.0%;流失熒光法在PGⅠ和PGⅡ基本濃度為15.66、22.65、23.69 ng/mL和5.69、5.50、5.68 ng/mL,三酰甘油、膽紅素和血紅蛋白水平為200、20、20 mg/mL情況下,回收率分別為99.1%、98.7%、97.0%和91.2%、96.5%、103.5%。

        2.3流式熒光法檢測PGⅠ、PGⅡ靈敏度和特異度分析 流式熒光法檢測PGⅠ、PGⅡ靈敏度和特異度分別為74.85%,79.02%,而化學(xué)發(fā)光法檢測PGⅠ、PGⅡ靈敏度和特異度分別為63.81%,63.75%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見表1。

        表1 兩種方法檢測PGⅠ、PGⅡ靈敏度和特異度比較

        2.4不同胃部疾病PGⅠ、PGⅡ結(jié)果分析 不同胃部疾病患者PGⅠ、PGⅡ結(jié)果見下表2和圖1,胃癌患者PGⅠ、PGⅡ水平與其他胃部疾病患者比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

        2.5流式熒光技術(shù)與化學(xué)發(fā)光法檢測結(jié)果比較 兩種方法線性回歸方程PGⅠ為Y=0.548 5X+2.241,r=0.988 2;PGⅡ?yàn)閅=0.558 7X+1.005,r=0.987 6。PGⅠ/PGⅡ?yàn)閅=0.624 1X+0.325 0,r=0.984 6,見表3。

        表2 不同胃部疾病患者PGⅠ、PGⅡ檢測結(jié)果

        注:*P<0.05,與其他類型比較,HP為幽門螺桿菌

        圖1 不同胃部疾病PGⅠ、PGⅡ檢測結(jié)果表3 流式熒光法與化學(xué)發(fā)光法檢測PGⅠ、PGⅡ結(jié)果比較

        疾病類型n流式熒光法PGⅠPGⅡ化學(xué)發(fā)光法PGⅠPGⅡtPPGⅠtPPGⅡ淺表性胃炎444.51±0.322.74±0.214.51±0.322.74±0.21122 20.652122 20.652HP感染萎縮性胃炎296.11±0.454.02±0.264.51±0.322.74±0.21無HP感染萎縮性胃炎134.56±0.782.99±0.086.11±0.454.02±0.26早期胃癌398.39±0.696.21±1.024.56±0.782.99±0.08晚期胃癌305.89±1.06*4.89±1.04*3.39±0.691.21±1.02

        注:HP為幽門螺桿菌

        3 討 論

        胃癌是比較常見的惡性腫瘤。目前對胃癌的診斷依然采用胃鏡活檢組織病理學(xué)進(jìn)行檢查,也是確診胃癌的金標(biāo)準(zhǔn),但是該方法在使用過程需要花費(fèi)的人力及經(jīng)濟(jì)成本比較高,而且對患者也會造成比較大的痛苦,不少人便放棄了對胃部疾病的檢查[6]。PG流式熒光技術(shù)因其具有高通量、檢測效率高的特點(diǎn),在臨床上常用于胃癌的篩查。此方法對患者造成的痛苦比較小,而且準(zhǔn)確性比較高,受到了廣大患者及學(xué)者的關(guān)注。PG是胃液中胃蛋白酶的非活性前體,在免疫原性上分為PGⅠ、PGⅡ 2 種,PGⅠ由胃底腺分泌,PGⅡ由胃底腺、賁門腺、幽門腺和十二指腸的Brunner,S腺分泌,胃底腺黏膜萎縮過程中,分泌PGⅠ的主細(xì)胞減少,分泌PGⅡ的幽門腺細(xì)胞增多,PGⅠ/ PGⅡ比值降低[7-8]。

        檢測PG的方法目前報(bào)導(dǎo)的有酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) (ELISA)、放射免疫分析法(RIA)、乳膠增強(qiáng)免疫比濁法(PETIA)、時間分辨熒光免疫分析法(TRFIA)[9-10]、光激化學(xué)發(fā)光免疫分析法(LICA)及化學(xué)發(fā)光法(CLIA),檢測PG的參考方法是化學(xué)發(fā)光免疫分析法[10]。本研究的PG流式熒光發(fā)光免疫測定方法,其分析血清中PG的精密度、準(zhǔn)確度、檢出限、線性,和參考方法Abbott公司化學(xué)發(fā)光法相關(guān)性良好,兩法測定的結(jié)果具有一致性[10]。本研究通過流式熒光法檢測PGⅠ、PGⅡ靈敏度和特異度為74.85%、79.02%,而化學(xué)發(fā)光法檢測PGⅠ、PGⅡ靈敏度和特異度為63.81%、63.75%,流式熒光法檢測靈敏度和特異度高。本研究通過試驗(yàn),結(jié)果發(fā)現(xiàn)采用流式熒光技術(shù)檢測PGⅠ、PGⅡ的線性范圍分別為0.65~190.00 ng/mL和0.22~110.00 ng/mL,和其他研究的結(jié)果基本一致[11]??赡苡捎趦煞N檢測方法的原理不同,靈敏度和特異度的差距等,導(dǎo)致兩種檢測方法的線性范圍差別較大。而且流式熒光法精密度和回收率均比較好,可以準(zhǔn)確測定標(biāo)本中的PGⅠ、PGⅡ。與化學(xué)發(fā)光法進(jìn)行對比分析,兩種方法檢測PGⅠ、PGⅡ、PGⅠ/PGⅡ相關(guān)性良好,存在較好的可比性。

        綜上所述,流式熒光技術(shù)檢測PGⅠ、PGⅡ的方法學(xué)性能比較好,與化學(xué)發(fā)光法具有良好的相關(guān)性,可在臨床上推廣應(yīng)用。

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