汪玉蓮，溫勤堅(jiān)，王 亞，王麗群，陳小華

(深圳市寶安區(qū)中心醫(yī)院婦產(chǎn)科，廣東 深圳 518102)

宮頸癌是目前全球女性最為常見的惡性腫瘤之一，每年罹患該病癥的患者約為40萬～50萬且近年來其發(fā)病率呈明顯上升態(tài)勢及年輕化趨勢[1]。故宮頸癌篩查在宮頸癌的早發(fā)現(xiàn)、早診斷和早治療中具有重要意義。目前宮頸癌的篩查包括細(xì)胞學(xué)、陰道鏡和組織學(xué)三種方式，其中初篩以宮頸的細(xì)胞學(xué)檢查和人乳頭瘤病毒(HPV)檢測為主，但二者單獨(dú)使用時(shí)存在著較高的誤診漏診率，故將二者結(jié)合應(yīng)用于宮頸癌篩查中極其重要[2]。鑒于此，本研究圍繞液基細(xì)胞學(xué)聯(lián)合HPV檢測對宮頸癌的篩查進(jìn)行探討。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年5月至2017年5月于深圳市寶安區(qū)中心醫(yī)院婦產(chǎn)科進(jìn)行宮頸癌篩查的100例受試者作為研究對象，年齡24～60歲，平均年齡(38.20±1.25)歲；陰道鏡活檢結(jié)果：無病變75例、宮頸上皮內(nèi)瘤變1級8例、宮頸上皮內(nèi)瘤變2級7例、宮頸上皮內(nèi)瘤變3級6例、宮頸癌4例(鱗癌3例、腺癌1例)。

納入標(biāo)準(zhǔn)：1)無嚴(yán)重認(rèn)知功能障礙或者精神疾病者；2)研究開始前3個(gè)月未服用過激素藥物者；3)知情同意者。排除標(biāo)準(zhǔn)：1)合并全身嚴(yán)重器質(zhì)性疾病者；2)月經(jīng)期、妊娠期、哺乳期患者；3)不同意此次研究方案或未簽署知情同意書者。

1.2 方法

1.2.1 液基細(xì)胞學(xué)檢查

采用液基細(xì)胞學(xué)薄片技術(shù)，采用一次性子宮內(nèi)膜采集器(SAP-1型，北京賽普九州科技發(fā)展有限公司)采集所有受試者宮頸外口的脫落細(xì)胞標(biāo)本，置于細(xì)胞保存液(美國BD Diagnostics公司)之中，經(jīng)AutoCyte PREP自動(dòng)制片系統(tǒng)(美國Tri-Path Imagining公司)處理后制備成分布均勻的薄層涂片，95%乙醇溶液固定，蘇木精-伊紅染色(HE)，由具有豐富診斷經(jīng)驗(yàn)的臨床醫(yī)務(wù)人員閱片[3]。細(xì)胞學(xué)診斷標(biāo)準(zhǔn)：采用 2001年修訂的TBS分級系統(tǒng)，即正常范圍、無明確診斷意義的不典型鱗狀細(xì)胞、鱗狀上皮內(nèi)病變(SIL)和鱗狀細(xì)胞癌(SCC)。SIL包括鱗狀上皮內(nèi)低度病變(LSIL)和鱗狀上皮內(nèi)高度病變(HSIL)。LSIL即CIN Ⅰ，HSIL包括CIN Ⅱ和CIN Ⅲ。

1.2.2 HPV檢測

利用美國分子診斷公司Digene生產(chǎn)的專用采樣器于所有受試者宮頸口按照同一方向持續(xù)旋轉(zhuǎn)3周后維持靜止?fàn)顟B(tài)10～15 s收集樣本，收集足夠的樣本后放置于專用的保存管中保存[4]。

以第二代雜交捕獲法對采集到的樣本實(shí)施HPV-DNA檢測，具體檢測步驟如下：向樣品中滴入5滴指示劑并適度用力混勻，陰性對照、陽性對照和待測標(biāo)本中分別加入1000、500和500 μL裂解液，于65 ℃水浴箱中裂解0.5 h以制備HPV探針[5]。抽取20 μL預(yù)先配置好的探針至96孔微孔板，抽取待檢測樣本后以1500 r·min-1離心5 min后樣本變?yōu)辄S色，用膠紙封口后于65 ℃孵育1 h，靜置5 min徹底冷卻[6]。利用移液器將特異性抗體與DNA-RNA雜交之后形成的復(fù)合物轉(zhuǎn)移到含有特異性抗體的捕獲孔，以膠紙封閉后于室溫下1200 r·min-1振搖1 h，去除上清液后置于吸水紙[7]。將偶聯(lián)有堿性磷酸酶的第二抗體與RNA雜合體100 μL至各捕獲孔，膠紙封蓋后室溫下靜置0.5 h，快速反轉(zhuǎn)并去除液體至干燥。利用由雙蒸水配置而成的沖洗液對其進(jìn)行反復(fù)沖洗，5次后置于吸水紙上干燥[8]。吸取100 μL樣本室溫下置于暗處10 min，以美國DIGENE生產(chǎn)的DML2000HC2基因雜交信號(hào)放大系統(tǒng)判讀最終結(jié)果。HPV負(fù)荷量≥1.0 pg·mL-1為陽性，反之為陰性[9]。

1.2.3 觀察指標(biāo)

以陰道鏡活檢結(jié)果作為參照，選取液基細(xì)胞學(xué)、HPV檢測、液基細(xì)胞學(xué)聯(lián)合HPV檢測3種方法的診斷符合率、敏感度、特異度、準(zhǔn)確度作為觀察指標(biāo)。

1.2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。計(jì)數(shù)資料以率(%)表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 3種檢測方法與陰道鏡檢測結(jié)果符合率的比較

以陰道鏡活檢結(jié)果作為參照，液基細(xì)胞學(xué)、HPV檢測和液基細(xì)胞學(xué)聯(lián)合HPV檢測的病理診斷符合率分別為88%、75%和97%，液基細(xì)胞學(xué)和HPV聯(lián)合檢測顯著高于液基細(xì)胞學(xué)、HPV單一檢測(均P<0.05)病理診斷符合率。見表1。

表1 3種檢測方法與陰道鏡檢測結(jié)果符合率的比較 %

*P=0.016(χ2=5.828),△P=0.000(χ2=20.100與聯(lián)合檢測比較。-：空缺。

2.2 3種檢測方法的敏感度、特異度和準(zhǔn)確度比較

在宮頸癌篩查中，3種檢測方法的敏感度、特異度和準(zhǔn)確度比較發(fā)現(xiàn)，液基細(xì)胞學(xué)聯(lián)合HPV檢測最高，HPV檢測最低，液基細(xì)胞學(xué)介于2者之間，3者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 3種檢測方法的敏感度、特異度和準(zhǔn)確度的比較%

3 討論

宮頸癌的病因多樣，除早婚早育、多次分娩、多次流產(chǎn)以及多個(gè)性伙伴外，HPV感染是其重要誘因[10]。HPV感染屬于一種性傳播疾病，通常情況下感染的高峰年齡段集中于18～28歲且可同時(shí)感染一種或者多種類型的HPV，在初期可無任何明顯癥狀，絕大多數(shù)患者在8～10個(gè)月時(shí)自行消失，但當(dāng)機(jī)體免疫力低下、重復(fù)感染、HPV持續(xù)存在或感染高風(fēng)險(xiǎn)型HPV時(shí)將會(huì)引起宮頸上皮內(nèi)病變，最終誘發(fā)宮頸癌[11]。由于宮頸癌早期缺乏特異性癥狀，明確診斷時(shí)往往已經(jīng)處于中晚期，錯(cuò)失最佳治療時(shí)機(jī)，成為女性因癌癥死亡的重要因素[12]，故開展宮頸癌篩查對于其早期診斷和早期治療具有重要意義。

液基細(xì)胞學(xué)檢測是利用液基薄層細(xì)胞檢測系統(tǒng)對宮頸細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞學(xué)分類診斷，為目前國際上較為先進(jìn)的一種宮頸癌細(xì)胞學(xué)檢查技術(shù)，被國外臨床廣泛用于宮頸癌及其癌前期變化、人乳頭瘤病毒和單純皰疹病毒感染的診斷工作中[13]。該方法有效地彌補(bǔ)了以往宮頸刮片存在的不足之處，使得細(xì)胞結(jié)構(gòu)更為清晰，易于辨別，提高了異常細(xì)胞的檢出率，降低了假陽性率，成為我國臨床的重要篩查手段。而隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的快速發(fā)展，HPV檢測手段多樣，目前已知細(xì)胞學(xué)法、斑點(diǎn)印跡法、熒光原位雜交法、核酸印跡原位雜交法、雜交捕獲法、多聚合酶鏈反應(yīng)擴(kuò)增法等均在臨床中有所應(yīng)用，但雜交捕獲法敏感性高，特異性強(qiáng)，操作簡單，應(yīng)用頻率相對較高[14]。然而，盡管上述兩種方法均能夠取得較為理想的篩查效果，但在長期臨床實(shí)踐中發(fā)現(xiàn)二者均存在著一定的不足之處，使得宮頸癌篩查結(jié)果難以滿足臨床早期診療工作需求。路光明等[15]探究薄層液基細(xì)胞學(xué)聯(lián)合 HPV 檢測對宮頸癌篩查的臨床價(jià)值，聯(lián)合使用檢測方法的敏感度、準(zhǔn)確度均明顯高于薄層液基細(xì)胞學(xué)檢測方法和 HPV-DNA 單獨(dú)使用，宋志琴等[16]報(bào)道液基細(xì)胞學(xué)聯(lián)合 HPV 檢測發(fā)現(xiàn)宮頸上皮內(nèi)瘤變Ⅰ級以上的敏感性分別為 89.14%和 73.28%，特異性分別為 75.80%和 76.50%，均有較好的符合率。而在2012年，ACS/ASCCP/ASCP和UPSTF[17]發(fā)布了宮頸癌篩查指南，認(rèn)為將二者聯(lián)合使用能夠?qū)崿F(xiàn)優(yōu)勢互補(bǔ)、提高檢出率成為臨床檢驗(yàn)工作的全新思路。

本次研究中陰道鏡活檢結(jié)果提示，100例受試者中無病變者75例、宮頸上皮內(nèi)瘤變1級8例、宮頸上皮內(nèi)瘤變2級7例、宮頸上皮內(nèi)瘤變3級6例、宮頸癌4例，液基細(xì)胞學(xué)、HPV檢測和兩者聯(lián)合檢測的診斷符合率分別為88%、75%和97%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)；在宮頸癌篩查中液基細(xì)胞學(xué)的敏感度、特異度和準(zhǔn)確度分別為93.98%、58.82%和88%，HPV檢測的敏感度、特異度和準(zhǔn)確度分別為83.13%、35.29%和75%，液基細(xì)胞學(xué)聯(lián)合HPV檢測敏感度、特異度和準(zhǔn)確度分別為100.00%、82.35%和97%，聯(lián)合檢測的效果均明顯優(yōu)于單一檢測方法，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。此外，聯(lián)合檢測除了能夠覆蓋可疑和輕度異?；颊吆Y查外，亦適用于高危人群的大規(guī)模普查，所獲得的結(jié)果可作為預(yù)測宮頸癌風(fēng)險(xiǎn)的重要參照依據(jù)，而且避免了陰道鏡活檢給受試者帶來的不適感，使得后者的認(rèn)可性及臨床依從性更高，對于提高患者臨床療效及改善預(yù)后具有重要意義。