趙玉軍，李波

（1.山東省淄博市第一醫(yī)院 心內(nèi)一科，山東 淄博 255200；2.山東省淄博市中心醫(yī)院心內(nèi)二科，山東 淄博 255036）

冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟?。ê?jiǎn)稱冠心?。┦桥R床上最常見(jiàn)的心血管系統(tǒng)疾病之一，冠狀動(dòng)脈粥樣斑塊形成、管腔狹窄是冠心病的病理基礎(chǔ)。冠心病患者中穩(wěn)定型心絞痛的斑塊性質(zhì)穩(wěn)定、臨床癥狀較輕，急性冠狀動(dòng)脈綜合征患者的斑塊性質(zhì)不穩(wěn)定、斑塊破裂會(huì)造成冠狀動(dòng)脈內(nèi)血栓形成并引起心肌發(fā)生缺血缺氧性損傷。目前，引起動(dòng)脈粥樣斑塊性質(zhì)改變的關(guān)鍵分子尚未明確。細(xì)胞外基質(zhì)金屬蛋白酶誘導(dǎo)因子（extracellular matrix metalloproteinase inducer,EMMPRIN）是近年來(lái)新發(fā)現(xiàn)的免疫球蛋白超家族成員，已有離體研究證實(shí)EMMPRIN與基質(zhì)金屬蛋白酶（matrix metalloproteinase,MMP）的表達(dá)具有相關(guān)性并且能夠影響粥樣斑塊的性質(zhì)[1-2]。但是，關(guān)于冠心病患者體內(nèi)EMMPRIN的表達(dá)量及其與粥樣斑塊性質(zhì)、MMPs含量的關(guān)系尚不明確。在下列研究中，筆者分析了冠心病患者外周血中EMMPRIN表達(dá)量與斑塊特征、基質(zhì)金屬蛋白酶含量的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象

選取2013年6月-2015年10月在山東省淄博市第一醫(yī)院確診為穩(wěn)定型心絞痛（stable angina pectoris,SAP）的69例患者和急性冠狀動(dòng)脈綜合征（acute cornary syndromes,ACS）的47例患者作為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)冠狀動(dòng)脈造影明確存在主要冠狀動(dòng)脈直徑狹窄超過(guò)50%，確診為冠心病；②符合美國(guó)心臟病學(xué)學(xué)會(huì)SAP和ACS的診斷標(biāo)準(zhǔn)；③病歷資料完整、血液標(biāo)本均已留取。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并惡性腫瘤的患者；②合并慢性肝臟疾病和肝纖維化的患者；③合并慢性腎臟疾病的患者；④合并糖尿病的患者。選擇同期在本院體檢的57例健康志愿者作為研究的對(duì)照組，均無(wú)心腦血管疾病病史。SAP組中男性42例，女性27例，年齡（51.3±6.6）歲；ACS組中男性29例，女性18例，年齡（50.4±6.2）歲；對(duì)照組中男性35例，女性22例，年齡（49.7±6.1）歲。3組受試者一般資料的比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.2 斑塊性質(zhì)的評(píng)估方法

采用64層螺旋CT掃描機(jī)進(jìn)行冠狀動(dòng)脈成像檢查，方法如下：經(jīng)右側(cè)肘靜脈以5.0 ml/s的速度注射碘海醇50～60 ml，完成后以相同速度注射生理鹽水40 ml，囑患者吸氣后屏氣，從氣管分叉到肝臟上緣進(jìn)行掃描。獲取三維重建圖像后對(duì)冠狀動(dòng)脈粥樣斑塊的CT值進(jìn)行測(cè)量，按照下列方法判斷斑塊性質(zhì)：CT值＜60 HU為軟斑塊、CT值60～129 HU為纖維斑塊、CT值≥130 HU為鈣化斑塊。

1.3 外周血中EMMPRIN表達(dá)量的檢測(cè)方法

冠狀動(dòng)脈成像檢查前采集外周靜脈血3 ml，枸櫞酸鈉抗凝后加入淋巴細(xì)胞分離液、密度梯度離心后分離外周血單個(gè)核細(xì)胞，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)液重懸細(xì)胞并調(diào)節(jié)密度值1×106個(gè)/L，而后分別賦予PE標(biāo)記的CD14熒光抗體、FITC標(biāo)記的EMMPRIN熒光抗體，20 min后用PBS緩沖液洗滌、離心2遍，最后在流式細(xì)胞儀上測(cè)定外周血單個(gè)核細(xì)胞表面EMMPRIN的平均熒光強(qiáng)度。

1.4 血清中MMPs含量的檢測(cè)方法

冠狀動(dòng)脈成像檢查前采集外周靜脈血3 ml，室溫靜置20 min后在離心機(jī)中3 000 r/min離心10 min，分離血清后采用酶聯(lián)免疫吸附試劑盒測(cè)定血清中MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-9、MMP-14的含量。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，多組間分析采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)，相關(guān)性采用Pearson檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 3組外周血單個(gè)核細(xì)胞表面EMMPRIN的表達(dá)量及血清中MMP的含量比較

3組外周血單個(gè)核細(xì)胞表面EMMPRIN的平均熒光強(qiáng)度以及血清中MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-9、MMP-14的含量，經(jīng)單因素方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué) 意 義（F=10.382、7.086、9.494、17.594、12.373和14.451，均P=0.000）。進(jìn)一步兩兩比較顯示，與對(duì)照組比較，SAP組外周血單個(gè)核細(xì)胞表面EMMPRIN的平均熒光強(qiáng)度以及血清中MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-9、MMP-14的含量均增高（t=10.382、7.086、9.494、17.594、12.373 和 14.451，均P=0.000），ACS組外周血單個(gè)核細(xì)胞表面EMMPRIN的平均熒光強(qiáng)度以及血清中 MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-9、MMP-14的含量均增高（t=16.731、10.362、12.781、21.385、15.589和17.448，均P=0.000）；與SAP組比較，ACS組外周血單個(gè)核細(xì)胞表面EMMPRIN的平均熒光強(qiáng)度以及血清中MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-9、MMP-14的含量均增高（t=12.351、9.262、8.385、15.132、11.782 和 13.672，均P=0.000）。見(jiàn)表1。

2.2 SAP組和ASC組患者中不同斑塊類型與外周血單個(gè)核細(xì)胞表面EMMPRIN表達(dá)量、血清中MMP含量的關(guān)系

SAP組和ASC組中軟斑塊、纖維斑塊、鈣化斑塊患者外周血單個(gè)核細(xì)胞表面EMMPRIN的平均熒光強(qiáng)度以及血清中MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-9、MMP-14的含量，經(jīng)單因素方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=8.935、7.767、12.585、15.485、13.472和17.680，均P=0.000）。進(jìn)一步兩兩比較顯示，與鈣化斑塊患者比較，纖維斑塊患者外周血單個(gè)核細(xì)胞表面EMMPRIN的平均熒光強(qiáng)度以及血清中MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-9、MMP-14 的 含量均增高（t=7.521、6.624、8.523、12.452、9.521和11.365，均P=0.000），軟斑塊患者外周血單個(gè)核細(xì)胞表面EMMPRIN的平均熒光強(qiáng)度以及血清中MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-9、MMP-14的含量均增高（t=13.352、8.362、8.523、14.785、11.385和 13.929，均P=0.000）；與纖維斑塊患者比較，軟斑塊患者外周血單個(gè)核細(xì)胞表面EMMPRIN的平均熒光強(qiáng)度以及血清 中 MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-9、MMP-14的含量均增高（t=11.781、9.982、12.378、12.152、12.352和 10.523，均P=0.000）。見(jiàn)表2。

2.3 EMMPRIN表達(dá)量與MMP含量的相關(guān)性

Pearson檢驗(yàn)顯示，外周血單個(gè)核細(xì)胞表面EMMPRIN的熒光強(qiáng)度與血清中MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-9、MMP-14的含量呈正相關(guān)（r=0.752、0.592、0.661、0.703 和 0.638，P=0.005、0.007、0.002、0.009和 0.008）。

表1 3組EMMPRIN表達(dá)量及MMP含量比較 （±s）

表1 3組EMMPRIN表達(dá)量及MMP含量比較 （±s）

注：1）與對(duì)照組比較，P ＜0.05；2）與SAP組比較，P ＜0.05

組別 EMMPRIN/（MFI） MMP-1/（ng/ml） MMP-2/（ng/ml） MMP-3/（ng/ml） MMP-9/（ng/ml） MMP-14/（ng/ml）SAP組（n=69） 9.34±0.951） 1.03±0.131） 203.46±26.711） 93.42±10.341） 263.45±31.351） 89.54±10.341）ACS 組（n=47） 13.54±1.921）2） 1.76±0.221）2） 334.54±42.581）2） 175.75±22.411）2） 436.54±56.711）2） 142.32±15.591）2）對(duì)照組（n=57） 5.57±0.67 0.58±0.08 142.36±17.65 53.67±7.86 176.88±22.52 38.79±5.52 F值 10.382 7.086 9.494 17.594 12.373 14.451 P值 0.000 0.002 0.000 0.000 0.000 0.000

表2 不同斑塊類型患者的EMMPRIN表達(dá)量及MMP含量比較 （±s）

表2 不同斑塊類型患者的EMMPRIN表達(dá)量及MMP含量比較 （±s）

注：1）與鈣化斑塊患者比較，P ＜0.05；2）與纖維斑塊患者比較，P ＜0.05

斑塊類型 EMMPRIN/（MFI） MMP-1/（ng/ml） MMP-2/（ng/ml） MMP-3/（ng/ml） MMP-9/（ng/ml） MMP-14/（ng/ml）軟斑塊 16.79±2.231）2） 1.95±0.241）2） 394.12±53.521）2） 215.54±25.781）2） 513.42±65.681）2） 193.54±22.341）2）纖維斑塊 11.04±1.581） 1.34±0.171） 274.59±35.231） 143.12±15.581） 332.57±42.691） 104.31±13.171）鈣化斑塊 8.63±0.93 0.91±0.12 175.38±22.15 80.48±7.78 234.51±29.51 69.36±8.35 F值 8.935 7.767 12.585 15.485 13.472 17.680 P值 0.001 0.005 0.000 0.000 0.000 0.000

3 討論

EMMPRIN是近年來(lái)新發(fā)現(xiàn)的一類高糖基化跨膜蛋白，屬于免疫球蛋白超家族，是MMPs分子表達(dá)的上游調(diào)控因子。近年來(lái)，MMPs表達(dá)異常與心腦血管疾病、動(dòng)脈粥樣硬化的關(guān)系受到了越來(lái)越多的重視，多種MMP分子被證實(shí)能夠造成動(dòng)脈粥樣斑塊纖維帽降解、引起斑塊性質(zhì)改變及斑塊破裂，加速冠心病的病理進(jìn)程并增加心肌梗死的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)[3-4]。與動(dòng)脈粥樣斑塊性質(zhì)改變有關(guān)的MMP分子眾多，但是引起多種MMPs分子含量改變的上游機(jī)制卻仍未明確，EMMPRIN是否通過(guò)調(diào)節(jié)MMPs的表達(dá)來(lái)參與冠心病的發(fā)生和發(fā)展也尚未得到證實(shí)。本研究通過(guò)分析SAP患者和ACS患者外周血中EMMPRIN的表達(dá)量發(fā)現(xiàn)，SAP組和ACS組外周血單個(gè)核細(xì)胞表面EMMPRIN的熒光強(qiáng)度高于對(duì)照組且ACS組外周血中EMMPRIN的熒光強(qiáng)度高于SAP組。這就說(shuō)明外周血中EMMPRIN的高表達(dá)參與了冠心病病情的發(fā)生和發(fā)展，在SAP患者和ACS患者體內(nèi)均發(fā)現(xiàn)EMMPRIN表達(dá)上調(diào)；并且在SAP發(fā)展為ACS的過(guò)程中，EMMPRIN的表達(dá)進(jìn)一步增多。

動(dòng)脈粥樣硬化是冠心病患者最基本的病理變化，冠狀動(dòng)脈內(nèi)粥樣斑塊形成會(huì)造成管腔狹窄、血供減少，進(jìn)而出現(xiàn)心肌缺血的臨床癥狀和體征。粥樣斑塊的性質(zhì)是決定冠心病病情嚴(yán)重程度的關(guān)鍵病理因素，SAP患者的粥樣斑塊穩(wěn)定、患者僅在過(guò)度勞累后出現(xiàn)心絞痛的癥狀；ACS患者的粥樣斑塊性質(zhì)不穩(wěn)定、纖維帽較薄甚至破裂，冠狀動(dòng)脈內(nèi)血栓形成并且會(huì)造成心肌發(fā)生缺血性壞死。為明確SAP患者和ACS患者外周血中EMMPRIN表達(dá)量改變與冠狀動(dòng)脈粥樣斑塊性質(zhì)變化的關(guān)系，本課題組通過(guò)冠狀動(dòng)脈CT成像對(duì)斑塊性質(zhì)進(jìn)行判斷并分析不同斑塊性質(zhì)對(duì)EMMPRIN表達(dá)量的影響。鈣化斑塊、纖維斑塊以及軟斑塊的CT值呈逐步增加趨勢(shì)[5-6]，外周血單個(gè)核細(xì)胞表面EMMPRIN的熒光強(qiáng)度呈現(xiàn)出軟斑塊＞纖維斑塊＞鈣化斑塊的趨勢(shì)。表明SAP患者和ACS患者外周血中EMMPRIN表達(dá)量的改變與冠狀動(dòng)脈斑塊性質(zhì)的改變有關(guān)，EMMPRIN表達(dá)量越高、斑塊性質(zhì)越不穩(wěn)定，患者發(fā)生斑塊破裂以及心肌缺血性壞死的風(fēng)險(xiǎn)也隨之增大。

近年來(lái)關(guān)于EMMPRIN功能的研究主要集中在腫瘤學(xué)，多項(xiàng)研究證實(shí)[7-8]，EMMPRIN能夠增加多種惡性腫瘤細(xì)胞中MMPs的表達(dá)、促進(jìn)細(xì)細(xì)胞外基質(zhì)及基底膜的降低。在心腦血管疾病領(lǐng)域，SCHULZ[1]的研究證實(shí)，EMMPRIN和MMP-9均在頸動(dòng)脈粥樣斑塊的纖維帽結(jié)構(gòu)中高表達(dá)且兩者高表達(dá)的區(qū)域較為一致。但是，冠心病患者體內(nèi)受到EMMPRIN調(diào)控的MMPs分子種類并不明確。MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-9、MMP-14是目前已經(jīng)證實(shí)與冠狀動(dòng)脈粥樣硬化病理進(jìn)程相關(guān)的MMPs分子，對(duì)粥樣斑塊纖維帽中的細(xì)胞外基質(zhì)具有水解作用，能夠造成纖維帽變薄并增加斑塊破裂的風(fēng)險(xiǎn)[9-12]。本課題組通過(guò)對(duì)血清中上述MMPs分子含量的分析發(fā)現(xiàn)，SAP組和ACS組患者的血 清 MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-9、MMP-14含量均升高，且斑塊性質(zhì)越不穩(wěn)定血清中上述MMPs分子的含量越高。為明確冠心病患者體內(nèi)EMMPRIN對(duì)MMPs表達(dá)的調(diào)控作用，本研究分析EMMPRIN表達(dá)量與MMPs的相關(guān)性，結(jié)果顯示，外周血單個(gè)核細(xì)胞表面EMMPRIN的熒光強(qiáng)度與血清中MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-9、MMP-14的含量呈正相關(guān)。這就說(shuō)明冠心病患者體內(nèi)高表達(dá)的EMMPRIN參與了MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-9、MMP-14生成增多的過(guò)程。

綜上所述，冠心病患者外周血中EMMPRIN表達(dá)量上調(diào)與粥樣斑塊性質(zhì)不穩(wěn)定、MMPs含量增加有關(guān)。