羅建平

近年來，由于國家政策的大力扶持，我國的養(yǎng)殖業(yè)生產(chǎn)得到了空前的穩(wěn)步發(fā)展，豬的養(yǎng)殖業(yè)更是在大步躍近。但是，豬病的危害和影響不容忽視，尤其是仔豬斷奶后出現(xiàn)多系統(tǒng)衰竭綜合征等現(xiàn)象，該病癥與豬圓環(huán)病毒關系密切，是豬圓環(huán)病毒相關疾?。≒CVAD）的重要病源，本文通過采用ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗en-zymelinkedimmunosorbentassay， ELISA）試劑的免疫檢測技術，進行了檢測抗體水平分析與研究，以期有效評估和掌握的豬圓環(huán)病毒2型滅活疫苗對豬場的作用，減少仔豬高死亡率，有效控制該病蔓延。

1 關于豬圓環(huán)病毒與免疫檢測技術介紹

1.1 豬圓環(huán)病毒是世界公認的免疫抑制病之一，該病是由豬圓環(huán)病毒感染所引起的以免疫抑制為特征的一類病毒性傳染病，自1991年在加拿大豬群中首次暴發(fā)以后，已成為當今危害世界養(yǎng)豬業(yè)最嚴重的病毒之一，該病毒是引起仔豬斷奶后出現(xiàn)多系統(tǒng)衰竭綜合征、增生性壞死性間質(zhì)性肺炎、豬皮炎與腎病綜合癥、新生仔豬先天性震顫、懷孕母豬繁殖障礙等多種疾病的統(tǒng)稱，抑制豬體免疫功能，仔豬會伴有咳嗽、呼吸困難、逐漸消瘦等癥狀，隨著病程的增長，容易繼發(fā)其他疾病，如：附紅細胞體病、弓形體病、喘氣病、豬瘟等，給養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟損失。

1.2 豬圓環(huán)病毒免疫檢測。常用的方法有酶聯(lián)免疫吸附試驗和酶免疫組化法，前者測定可溶性抗原或抗體，后者檢測組織或細胞表面抗原。將抗原一抗體反應的特異性與酶催化作用的高效性相結(jié)合，通過酶作用于底物后的顯色反應判定結(jié)果?？捎媚繙y定性，也可用酶標測定儀測定光密度（OD）值反應抗原含量，靈敏度可達每毫升納克（ng）水平甚至皮克（pg）水平，它常用于標記的酶有辣根過氧化物酶（ horseradishperoxidase，HRP）、堿性磷酸酶（alkalinephosphatase，AP）等。

2 豬圓環(huán)病毒2型抗體水平免疫檢測分析

2.1 操作方法。嚴格按試劑盒說明書操作，取抗原包被板，加入已稀釋好的洗滌液200υL，倒掉，重復洗滌共計洗板2次，最后一次在吸水紙上拍干。將稀釋好的待測血清、陽性和陰性對照血清各取lOOυL加入到抗原包被板孔中，陽性對照和陰性對照各設2孔（輕輕搖勻孔中樣品，勿溢出），用封板膜覆蓋包被板，置37℃溫箱中溫浴30min。棄掉封板膜，甩掉板孔中的溶液，每孔加入稀釋好的洗滌液200υL，棄取洗滌液.重復洗滌共計洗滌5次，最后一次在吸水紙上拍干。每孔加酶標記物lOOυL，置37℃溫箱中溫浴30min。再次棄掉混合液并對抗原包被板進行洗滌拍干。將洗滌并拍干好的抗原包被板中每孔加入底物A50υL、底物B50υL混勻，室溫（20至25℃）溫室避光顯色lOmin，最后每孔加入終止液50υL。lOmin內(nèi)用酶標儀測定并記錄各孔在630nm波長處的吸光度（OD）值（測定前輕輕搖勻，勿溢出）。根據(jù)OD值的大小，進行樣品抗體水平的判斷。

2.2 實驗分析

2.2.1 隨著豬年齡的增長，不同生長階段的豬感染情況是有差異的，在仔豬（6至8周齡，發(fā)病率為20%至60%）和育肥豬生長階段的豬感染機率高，豬體抗體水平較低，可引起仔豬淋巴系統(tǒng)疾病、漸進性體重下降、呼吸道癥狀及黃疸，造成患豬免疫機能下降、生產(chǎn)性能降低。此時，應及時加強免疫措施，積極做好疫病防控重點，有針對性地控制病情的流行。

2.2.2 基于豬圓環(huán)病毒2型免疫效果全年比較穩(wěn)定，與季節(jié)性因素的影響不大，因此，養(yǎng)殖人員應做好日常管理工作，加強衛(wèi)生消毒意識，提高飼養(yǎng)管理水平和豬群機體自身免疫抗體水平，防患于未然。

2.3 結(jié)果判定。陽性對照孔平均OD630nm≧1.O，陰性對照孔平均OD630nm≤0.3，于波長630nm處測酶標儀上各孔OD630nm的值，樣品OD630nm>0.42，判為陽性，則證明實驗成立。

3 注意事項

3.1 由于每個豬的健康情況不同，所以可能會導致試驗結(jié)果有一定的影響。本文提到的試驗方法雖常廣泛應用于各種抗原和抗體的測定實驗中。但除在檢測中，會受到標本因素、試劑因素、操作因素等的影響，而導致ELISA試驗測定出現(xiàn)結(jié)果錯誤。

3.2 血清標本在采集過程中應避免標本出現(xiàn)嚴重溶血現(xiàn)象：冰凍保存的血清樣本應防止反復凍融；樣本保存過程中若出現(xiàn)非細菌污染所致的渾濁或絮狀物質(zhì)，應離心后取上清液進行檢測：樣本的采集及血清分離過程中應盡量避的免細菌污染。

4 結(jié)論

豬圓環(huán)病毒2型抗體為在控制豬群豬圓環(huán)病毒2型的疫情，以及制定合理的綜合防治措施奠定基礎。

參考文獻：

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