顏遠(yuǎn)義 劉新華 徐力文 章晉勇

(1. 廣東省水生動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心, 廣州, 511453; 2. 中國(guó)科學(xué)院水生生物研究所, 淡水生態(tài)與生物技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,農(nóng)業(yè)部淡水養(yǎng)殖病害防治重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 淮安研究中心, 武漢 430072; 3. 中國(guó)科學(xué)院大學(xué), 北京 100049; 4. 中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院南海水產(chǎn)研究所, 廣州 510300)

微孢子蟲是一類泛在的、成孢子的、單細(xì)胞專性細(xì)胞內(nèi)寄生蟲, 宿主范圍廣泛, 可寄生于從原生動(dòng)物到哺乳動(dòng)物(包括人類)幾乎所有動(dòng)物類群[1]。至今, 已報(bào)道187屬1500余種。魚類是微孢子蟲的主要宿主之一, 目前已報(bào)道21屬160余種, 絕大部種類感染硬骨魚類, 迄今僅報(bào)道一種可感染軟骨魚類[2]。石斑魚(Epinephelusspp.)隸屬鱸形目(Perciformes), 鮨科(Serranidae), 是一類重要的海水經(jīng)濟(jì)魚類, 尤其是在東南亞地區(qū), 因其肉質(zhì)鮮美, 深受人們喜愛。隨著苗種人工繁育的成功及配合飼料的使用, 已成為東南亞最重要的海水養(yǎng)殖品種之一,僅我國(guó)南海區(qū)域(主要包括福建、兩廣、海南等地)年產(chǎn)量就達(dá)8×107kg[3]。目前, 在我國(guó)養(yǎng)殖的石斑魚種類有10屬超過(guò)50種, 包括青石石斑魚(E.awoara)、斜帶石斑魚(E. coioides)、赤點(diǎn)石斑魚(E.akaara)、點(diǎn)帶石斑魚(E. malabaricus)、鞍帶石斑魚(E. lanceolatus)、褐點(diǎn)石斑魚(E. fuscoguttatus)、雜交石斑魚(珍珠龍膽,E. lanceolatus♂×E. fuscoguttatus♀)等。然而, 隨著集約化養(yǎng)殖發(fā)展, 石斑魚養(yǎng)殖病害頻發(fā), 給養(yǎng)殖生產(chǎn)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。其中, 已報(bào)道3種石斑魚微孢子蟲病, 病原分別為寄生于清水石斑魚(Epinephelus polyphekadion)腸壁的阿拉伯格留蟲(Glugea arabica)、寄生于網(wǎng)紋石斑魚(E. chlorostigma)腹腔的匹里蟲待定種(Pleistophorasp.)、寄生于赤點(diǎn)石斑魚(E. akaara)腹腔的石斑魚格留蟲(G. epinephelusis)[4—6]。

近年來(lái), 一種引起石斑魚苗種培育階段的腸道微孢子蟲病在海南廣泛傳播, 損失嚴(yán)重, 其主要癥狀為厭食、腸壁變薄、魚體極度消瘦、排白便等癥狀, 造成苗種的大量死亡, 死亡率最高可達(dá)100%,危害僅次于石斑魚神經(jīng)壞死病毒病, 由于其最直觀的臨床癥狀為患病魚極度消瘦, 故當(dāng)?shù)貪O民也稱其為“瘦身病”, 但由于引起石斑魚瘦身的原因眾多且由于這是石斑魚腸道感染微孢子蟲的首次發(fā)現(xiàn), 故我們認(rèn)為稱其為石斑魚腸道微孢子蟲病更為合適。我們前期雖對(duì)該病例、流行病學(xué)及分子特征等進(jìn)行了報(bào)道, 但并未對(duì)其病原鑒定至種[7]。本文詳細(xì)報(bào)道了其引起的組織病理變化、超微結(jié)構(gòu)以及分子特征等微孢子蟲分類衍征, 確定了該病原為腸胞蟲科, 腸孢蟲屬(Enterospora)一新種, 命名為石斑魚腸孢蟲(Enterospora epinephelisp. n.)。

1 材料與方法

1.1 樣本采集及處理

于2017年5月在海南文昌馮家灣珍珠龍膽苗種培育場(chǎng)發(fā)現(xiàn)大量苗種出現(xiàn)患病癥狀, 主要表現(xiàn)為魚苗停止攝食并伴有白便, 魚體消瘦, 頭骨和腹腔凹陷, 背脊肌肉消瘦, 嚴(yán)重的為刀刃狀, 體重僅為正常魚苗的20%—40%。采集患病癥狀的魚苗50尾(體重11.3—20.9 g), 活體運(yùn)回實(shí)驗(yàn)室解剖觀察。

1.2 活體檢查

將帶回的石斑魚進(jìn)行解剖, 取少量腸道組織并刮取部分內(nèi)容物進(jìn)行涂片觀察, 在1000×倍下對(duì)新鮮孢子進(jìn)行觀察、測(cè)量、拍照。

1.3 組織病理

剪取癥狀明顯魚體的部分腸道組織, 并刮取腸道內(nèi)容物分別保存于10%中性福爾馬林進(jìn)行固定,樣品固定48h后, 經(jīng)乙醇和丙酮梯度脫水后移入到二甲苯透明, 浸蠟包埋后切片, 切片厚度4—6 μm,經(jīng)蘇木精–伊紅染色(H&E染色)后用Olympus BX53拍照觀察并保存。

1.4 超微結(jié)構(gòu)觀察

將感染的腸道及內(nèi)容物保存到2.5%中性戊二醛中, 4℃固定24h, 磷酸緩沖液沖洗, 經(jīng)1% 餓酸固定、磷酸緩沖液漂洗后, 再經(jīng)系列丙酮脫水, 滲透、包埋、切片后經(jīng)醋酸鈾和檸檬酸鉛雙重染色,HITACHI H-7700透射電鏡觀察超微結(jié)構(gòu), 工作電壓為80千伏。

1.5 DNA提取、18SrDNA序列的擴(kuò)增和測(cè)定

取部分95%酒精保存的組織, 剪成碎片并用PBS離心洗滌2次以除去殘余酒精。先用組織研磨儀(MP, FastPrep-24 5G)6.0速率振蕩4次, 每次20s,然后用光學(xué)顯微鏡觀察孢子是否完全破碎。破碎后利用細(xì)胞/組織基因組DNA提取試劑盒(Qiagen,德國(guó))提取樣品基因組DNA。18S rDNA序列片段擴(kuò)增采用引物EnterF125 (5′-AACTAACCACGG TAACCTGTGGCTAA-3′)和EnterR1153 (5′-CAT TCACCATGCCTTGATGAGGCACCGTT-3′)[7]。PCR反應(yīng)體系包括1 μL DNA, 12.5 μL 1× PCR mixture (康為, 北京), 正反引物各1 μL (10 μm), 加雙蒸水至25 μL體系。反應(yīng)程序?yàn)?4℃預(yù)變性3min,35個(gè)循環(huán): 94℃變性40s; 59℃退火30s; 72℃延伸90s; 72℃終延伸10min。PCR產(chǎn)物用1%瓊脂糖凝膠電泳后, 用膠回收試劑盒(康為, 北京)純化回收, 將目的片段連接到pMD18-T載體(TaKaRa, 日本), 再轉(zhuǎn)化到感受態(tài)細(xì)胞DH5α中, 50 μL/mL氨芐青霉素的LB 固體培養(yǎng)基均勻涂布并培養(yǎng)過(guò)夜, 挑取陽(yáng)性克隆, 用于測(cè)序。測(cè)序在自動(dòng)測(cè)序儀ABI PRISM?3730 DNA Sequencer (Applied Biosystems USA)上完成。測(cè)序結(jié)果通過(guò)BioEdit[8]進(jìn)行拼接, 并根據(jù)測(cè)序峰圖人工校正(DNASTAR INC., Madisom, Wis),將拼接完畢的序列提交至GenBank。

1.6 系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系及遺傳距離分析

將所獲得序列通過(guò)NCBI網(wǎng)站進(jìn)行BLAST搜索, 并從GenBank上選取腸胞蟲科以及其他序列相似性較高種類的18S rDNA序列數(shù)據(jù)進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育樹的構(gòu)建。選取Glugea arabica(KT005391)和Glugea epinephelusis(AY090038)為外群。利用CLUSTAL 1.8[9]對(duì)選取的序列進(jìn)行多重比對(duì)。分別利用最大似然法(Maximum Likehood, ML)和貝葉斯法(Bayesian Inferences, BI)進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系分析。通過(guò)jModelTest[10]確定最佳核苷酸替代模型應(yīng)用于ML和BI分析。ML分析利用PhyML 3.0[11]軟件進(jìn)行運(yùn)算100代。BI分析利用Mr. Bayes[12]軟件進(jìn)行操作, 以隨機(jī)樹(Random)為起始樹, 替換模型參數(shù)Nst為6, 馬爾可夫鏈的蒙特卡洛方法(Markov chain Monte Carlo process)設(shè)置為4條鏈同時(shí)運(yùn)行1000000代。獲得的系統(tǒng)發(fā)育樹用Treeview1.6[13]和Adobe Illustrator (Adobe Systems Inc.美國(guó)) 編輯、注釋。

選取腸胞蟲科所有種類進(jìn)行遺傳距離分析, 用MEGA (6.0) 軟件選擇Kimura 2-parameter 模型進(jìn)行計(jì)算[14]。

2 結(jié)果

2.1 組織病理

在所檢查的50尾魚苗中, 均不同程度的感染了該微孢子蟲。組織病理分析發(fā)現(xiàn), 大量的孢子定殖在腸道上皮的杯狀細(xì)胞核內(nèi), 造成細(xì)胞核肥大, 甚至脹破核膜流出到細(xì)胞質(zhì)中(圖1a)。同時(shí), 由于感染細(xì)胞壞死、脫落, 腸腔中腸道內(nèi)容物中孢子的豐度也非常大(圖1b)。

2.2 石斑魚腸孢蟲超微結(jié)構(gòu)特征和發(fā)育過(guò)程

圖2—圖4展示了該石斑魚腸孢蟲在細(xì)胞核內(nèi)是如何發(fā)育為成熟孢子。早期單核裂殖體, 顏色較淺, 藕核, 通過(guò)一層薄膜與核質(zhì)隔離, 無(wú)寄生泡或產(chǎn)孢囊結(jié)構(gòu), 細(xì)胞核周圍圍繞較多線粒體(圖2a)。單核裂殖體繼續(xù)發(fā)育形成多核裂殖原質(zhì)團(tuán), 此時(shí), 裂殖原質(zhì)團(tuán)顏色較深, 藕核明顯, 且絕大部分聚集在細(xì)胞核周圍, 原質(zhì)團(tuán)薄膜與細(xì)胞核膜基本重合。裂殖原質(zhì)團(tuán)發(fā)育導(dǎo)致細(xì)胞核出現(xiàn)明顯肥大, 甚至直接將細(xì)胞核膜脹破(圖2b—d)。裂殖原質(zhì)團(tuán)進(jìn)一步發(fā)育形成多核產(chǎn)孢原質(zhì)團(tuán), 并開始出現(xiàn)許多高電子密度的囊泡狀結(jié)構(gòu)(圖3a—d)。囊泡狀結(jié)構(gòu)聚集在細(xì)胞核周圍, 并組裝形成微孢子蟲擠出裝置前體(圖3c、 3d)。隨后, 產(chǎn)孢體原生質(zhì)團(tuán)通過(guò)連續(xù)分裂形成一個(gè)個(gè)孢子母細(xì)胞, 孢子母細(xì)胞可見微孢子蟲的典型特征, 如極絲、后泡及三層孢壁結(jié)構(gòu)等(圖3e)。值得注意的是, 整個(gè)孢子發(fā)育并不是同步完成(圖3f)。孢子母細(xì)胞與細(xì)胞核直接接觸, 并進(jìn)一步發(fā)育形成成熟孢子(圖4a—d)。成熟孢子為橢圓形, 孢子長(zhǎng)(1.56±0.31) μm (1.07—1.96 μm), 寬(1.08±0.98) μm(0.93—1.28 μm), 具一個(gè)蘑菇狀錨狀盤(圖4a)。極質(zhì)體由兩部分組成, 均呈薄膜狀, 外層部分排列緊密, 內(nèi)層較為稀疏(圖4b—c)。同型極絲5—6圈, 分兩列排列(圖4d)。孢壁分為3層, 外壁電子密度高,厚(15.51±0.95) nm (9.87—26.18 nm), 內(nèi)壁為電子透明層, 較外層更厚(81.13±2.71) nm (57.16—110.81 nm),最里面為孢質(zhì)膜(圖4c)。

分類學(xué)信息:

石斑魚腸孢蟲Enterospora epinephelisp. n.

宿主: 石斑魚Epinephelusspp.

采樣地點(diǎn): 海南文昌馮家灣養(yǎng)殖區(qū) (19°24′31″ N,110°42′29″ E)

寄生部位: 腸道上皮杯狀細(xì)胞核內(nèi)

宿主大小: 體重11.3—20.9 g

感染率: 100% (50/50)

樣本保存: 10%福爾馬林、2.5%戊二醛及95%酒精固定標(biāo)本保存于中國(guó)科學(xué)院水生生物研究所魚病研究室, 標(biāo)本號(hào): MTR201705181、MTR201705182、MTR201705183。

圖1 石斑魚腸孢蟲感染腸道組織和腸道內(nèi)容物病理切片F(xiàn)ig. 1 Photomicrographs of Enterospora epinepheli sp. n. from histological sections of intestine and intestinal contents of hybrid grouper, E. lanceolatus♂×E. fuscoguttatus♀

圖2 石斑魚腸孢蟲裂體生殖時(shí)期超微結(jié)構(gòu)Fig. 2 Ultrastructure of merogony in Enterospora epinepheli sp.n. in the intestines of E. lanceolatus♂×E. fuscoguttatus♀

圖3 石斑魚腸孢蟲孢子生殖時(shí)期超微結(jié)構(gòu)Fig. 3 Ultrastructure of sporogony in Enterospora epinepheli sp.n. in the intestines of E. lanceolatus♂×E. fuscoguttatus♀

序列號(hào): 模式標(biāo)本18S rDNA序列在GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中登錄號(hào)為MH345732。

種名來(lái)源: 因其感染多種石斑魚屬石斑魚而將其命名為石斑魚腸孢蟲。

圖4 石斑魚腸孢蟲成熟孢子超微結(jié)構(gòu)Fig. 4 Ultrastructure of mature spores of Enterospora epinepheli sp. n. in the intestines of E. lanceolatus♂×E. fuscoguttatus♀

2.3 分子特征分析

通過(guò)分子克隆成功擴(kuò)增出石斑魚腸孢蟲小核糖體RNA部分序列, 序列長(zhǎng)1043 bp, GC含量為41.71%。將其在NCBI中進(jìn)行BLAST發(fā)現(xiàn), 與之前報(bào)道的石斑魚腸孢蟲待定種Microsporidiumsp.(100%, KR263870)序列一致, 其他較相似的種類還有: 蝦肝腸胞蟲Enterocytozoon hepatopenaei(85%,KX981865)、核腸孢蟲Enterospora nucleophila(83%, KF135645)、黃道蟹腸孢蟲Enterospora canceri(83%, HE584634)、三文魚核孢蟲Nucleospora salmonis(82%, AF185998)、畢氏腸胞蟲Enterocytozoon bieneusi(81%, AF023245)等, 相似性最高的為85%, 低于種間的范圍。與已報(bào)道的其他石斑魚寄生的微孢子蟲相似性都較低, 如Glugea epinephelusis(55%, AY090038),G. Arabica(56%, KT-000539),Pleistophorasp. (30%, JN205118), 顯著低于種間范圍?；谪惾~斯法以及最大似然法所構(gòu)建出的系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系樹拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)一致, 盡管各進(jìn)化枝支持率有些許差異。因此, 本研究用貝葉斯樹展示代表石斑魚腸孢蟲的系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系。從系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系樹顯示, 腸胞蟲科的種類可分為2個(gè)枝系(Clade I 和Clade II), 石斑魚腸孢蟲與對(duì)蝦肝胞蟲、核腸孢蟲、黃道蟹腸孢蟲以及畢氏腸胞蟲聚為一枝(Clade II), 且支持率較高, 但不與其中任何一種形成姊妹枝。中華絨螯蟹肝胰腺壞死相關(guān)的絨螯蟹肝孢蟲(Hepatospora eirocheir)與腸胞蟲科分枝聚為姊妹枝(圖5)。

選取所有腸胞蟲科的種類進(jìn)行遺傳距離分析發(fā)現(xiàn), 遺傳距離范圍在0.000—0.225(表1), 最小的為石斑魚微孢子蟲待定種, 其他已經(jīng)鑒定的種類遺傳距離最近的為0.162, 超出種間范圍。

3 討論

腸胞蟲科的典型特征為孢子在發(fā)育過(guò)程中, 孢子的擠出釋放裝置(包括錨狀盤、極絲、后泡等)在產(chǎn)孢體分裂形成孢子母細(xì)胞前已經(jīng)開始發(fā)育并形成, 而幾乎所有的微孢子蟲的擠出裝置一般都是產(chǎn)孢體分裂形成孢子母細(xì)胞后才開始形成[15,16]。目前, 腸胞蟲科主要包含5個(gè)屬, 即Nucleospora、Paranucleospora、Obruspora、Enterocytozoon以及Enterospora[17], 其中畢氏腸胞蟲(Enterocytozoon bieneusi)是重要的人源微孢子蟲之一, 尤其對(duì)免疫缺陷病患者危害嚴(yán)重[15]。石斑魚腸孢蟲的許多特征與Enterospora屬的模式種E. canceri極為相似, 主要包括: (1)均為細(xì)胞核內(nèi)寄生; (2)裂殖體以及產(chǎn)孢體階段均是通過(guò)薄膜與細(xì)胞核分離, 但成熟孢子卻與細(xì)胞核直接接觸; (3)均形成裂殖原質(zhì)團(tuán)和產(chǎn)孢原質(zhì)團(tuán), 且單個(gè)核內(nèi)可形成多個(gè); (4)孢子大小、形狀以及極絲圈數(shù)極為相似。與該屬已報(bào)道的其他種類進(jìn)一步形態(tài)特征比較分析發(fā)現(xiàn), 石斑魚腸孢蟲具有顯著的差異性特征(表2)。核腸孢蟲(E. nucleophile)和黃道蟹腸孢蟲(E. canceri)均是感染細(xì)胞核的種類, 前者是近幾年在西班牙報(bào)道的金頭鯛“白便瘦身病”病原, 也造成宿主厭食、消瘦、白便等臨床癥狀, 但與石斑魚腸孢蟲不同的是, 其整個(gè)發(fā)育過(guò)程中都與宿主細(xì)胞核直接接觸, 極絲排列只有一列, 一個(gè)核內(nèi)的成熟孢子數(shù)只有不到13個(gè)[18]。此外, 核腸孢蟲還能寄生于細(xì)胞質(zhì)中, 而石斑魚腸孢蟲雖也在細(xì)胞質(zhì)中有發(fā)現(xiàn), 但超微結(jié)構(gòu)顯示其是由于孢原質(zhì)發(fā)育引起細(xì)胞核肥大并脹破細(xì)胞核膜而彌散到細(xì)胞質(zhì)中, 這也證實(shí)了石斑魚腸孢蟲為核內(nèi)專性寄生。黃道蟹腸孢蟲整個(gè)發(fā)育過(guò)程均為離核,寄生在肝胰臟上皮細(xì)胞核內(nèi), 單個(gè)核內(nèi)孢子個(gè)數(shù)比石斑魚腸孢蟲要多(＞100vs. ＞60)。此外, 黃道蟹腸孢蟲的內(nèi)層孢壁厚度顯著低于石斑魚腸孢蟲[內(nèi)層: (14.8±0.65) nmvs. (81.13±2.71) nm(57.16—110.81 nm)]。對(duì)蝦肝腸胞蟲寄生于南美白對(duì)蝦和斑節(jié)對(duì)蝦肝胰臟管狀上皮細(xì)胞質(zhì)內(nèi), 大量寄生時(shí)會(huì)導(dǎo)致對(duì)蝦出現(xiàn)生長(zhǎng)緩慢綜合癥[19], 其孢子大小(0.7 μm×1.1 μm) 和孢壁厚度(外壁: 2 nm; 內(nèi)壁: 10 nm)都較石斑魚腸孢蟲小, 此外極質(zhì)體類型也有顯著的區(qū)別(表2)。

圖5 基于18S rDNA基因序列構(gòu)建的貝葉斯法(BI)系統(tǒng)發(fā)育樹Fig. 5 Phylogenetic tree generated by Bayesian inferences (BI) based on the partial 18S rDNA sequences

隨著分子生物學(xué)的發(fā)展, 分子標(biāo)記對(duì)微孢子蟲的鑒定及其系統(tǒng)發(fā)育生物學(xué)分析發(fā)揮了重要作用[17—21]。本研究中所擴(kuò)增獲得的石斑魚腸孢蟲18S rDNA部分序列經(jīng)BLAST比較分析發(fā)現(xiàn), 其與之前報(bào)道的石斑腸道微孢子蟲待定種幾乎100%相似, 只有2個(gè)堿基缺失的差異。而已報(bào)道感染石斑魚的其他3種微孢子蟲, 即G. epinephelusis、G. arabica及Pleistophorasp., 與石斑魚腸孢蟲的相似性均在60%以下, 表明這些種類與石斑魚腸孢蟲親緣關(guān)系相差甚遠(yuǎn)。與其他相似性較高的種類進(jìn)行遺傳距離分析發(fā)現(xiàn), 遺傳距離在0.162—0.225, 其中與腸孢蟲屬其他種的遺傳距離在0.162—0.182, 均遠(yuǎn)超出種內(nèi)范圍, 從而在分子水平上進(jìn)一步證實(shí)了石斑魚腸孢蟲有別于已報(bào)道的腸孢蟲屬種類(表1)。

系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系分析發(fā)現(xiàn), 腸胞蟲科整個(gè)類群的拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)與之前報(bào)道的類似, 明顯聚為兩個(gè)分支(Clade Ⅰ和Clade Ⅱ)[17]。其中石斑魚腸孢蟲與腸孢蟲屬種(E. canceri,E. hepatopenaei,E. nucleiphila)及畢氏腸胞蟲聚為一支(Clade Ⅱ)。而西班牙學(xué)者報(bào)道的金頭鯛核腸孢蟲與對(duì)蝦肝胞蟲形成姊妹枝。另外, 有學(xué)者報(bào)道對(duì)蝦肝胞蟲與腸孢蟲屬模型種黃道蟹腸孢蟲相似性較高(94%), 認(rèn)為應(yīng)將蝦肝腸胞蟲劃分到腸孢蟲屬中, 并提出腸孢蟲屬應(yīng)為一個(gè)單系群[18,19]。然而, 在本研究中, 石斑魚腸孢蟲處于Clade Ⅱ的基部, 不與該屬其他種類形成姐妹枝, 腸孢蟲屬枝系中還包含了畢氏腸胞蟲, 表明腸孢蟲屬應(yīng)為并系類群。此外, 寄生于細(xì)胞核內(nèi)的微孢子蟲都屬于腸胞蟲科, 但核內(nèi)寄生的腸胞蟲科種類并沒(méi)有單獨(dú)聚為一支, 而是與細(xì)胞質(zhì)內(nèi)寄生的種類(E. hepatopenaei、Obruspora papernae、E. bieneusi)分散在整個(gè)腸胞蟲科的兩個(gè)支系中, 表明細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)內(nèi)寄生在腸胞蟲科種類適應(yīng)進(jìn)化歷程中出現(xiàn)多次, 并交替出現(xiàn)。有趣的是, 在其他微孢子蟲科屬中尚未發(fā)現(xiàn)細(xì)胞核內(nèi)寄生種類。同時(shí),細(xì)胞核內(nèi)寄生對(duì)微孢子蟲的生存、繁殖以及與宿主間互作關(guān)系等方面有怎樣的影響, 目前仍不清楚。但有研究表明, 腸胞蟲科的種類在基因組水平上丟失了糖酵解途徑的大量基因, 通過(guò) ATP轉(zhuǎn)運(yùn)體從宿主中轉(zhuǎn)運(yùn)能量和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì), 說(shuō)明腸胞蟲科種類對(duì)宿主具有高度的依賴性[22]。從而導(dǎo)致蟲體與宿主競(jìng)爭(zhēng)營(yíng)養(yǎng)成分以及能量物質(zhì), 這可能是對(duì)蝦肝腸胞蟲、核腸孢蟲以及石斑魚腸孢蟲寄生導(dǎo)致宿主出現(xiàn)生長(zhǎng)速度慢、瘦身等癥狀的原因。

表1 石斑魚腸孢蟲與其他腸胞蟲科種類基于18S rDNA的相似性(上面對(duì)角)和遺傳距離(下面對(duì)角)Tab. 1 Comparison of similarities (above diagonal) and genetic distances (below diagonal) of Enterospora epinepheli sp. n. with other Enterocytozoonidae species based on the partial 18S rDNA

表2 已報(bào)道的腸孢蟲屬種類形態(tài)特征Tab. 2 Taxonomic characters of Enterospora spp. reported previously

綜上所述, 本研究整合病理、各發(fā)育階段超微結(jié)構(gòu)及分子特征, 鑒定了近年來(lái)暴發(fā)于我國(guó)中南沿海石斑魚苗種腸道微孢子蟲病的病原為一腸孢蟲新種, 命名為石斑魚腸孢蟲(Enterospora epinephelisp. n.)。