劉新剛，曹 科，沈 丹，吳蘇偉，唐 丹，陳運生，馬東禮

(廣東省深圳市兒童醫(yī)院檢驗科 518038)

根據(jù)《醫(yī)療機構(gòu)臨床實驗室管理辦法》和《醫(yī)學實驗室質(zhì)量和能力認可準則》的規(guī)定要求，實驗室應對設(shè)備、檢測系統(tǒng)或方法的主要分析性能進行驗證[1-2]。證實其能夠達到臨床檢測所要求的標準[3-4]?，F(xiàn)參照相關(guān)文獻資料結(jié)合本實驗室工作實際情況，制定了相應的驗證方案，對普門PA-900特定蛋白分析儀檢測超敏C-反應蛋白的主要性能進行驗證。報道如下。

1 材料與方法

1.1一般材料 該院住院患者的靜脈血標本。

1.2儀器與試劑 普門PA-900、PA-980特定蛋白分析儀及各自配套試劑和校準品。伯樂特定蛋白質(zhì)控品(批號66342)和國際參考品ERM-DA474(歐洲標準局網(wǎng)站購買，批號6094)。

1.3實驗方法

1.3.1空白檢測 使用稀釋液當作標本檢測，每個通道檢測結(jié)果應小于0.5 mg/L。

1.3.2攜帶污染率 取高值、低值全血標本各1例依次測高值3次(H1、H2、H3)、低值3 次(L1、L2、L3)，計算攜帶污染率。攜帶污染率小于1%，結(jié)果為可接受。計算公式：攜帶污染率=|(L1―L3)|/(H3―L3)×100%。

1.3.3精密度 (1)批內(nèi)精密度：取高值、中值、低值3個濃度的全血標本，每個檢測通道連續(xù)重復測定11次取后10次檢測結(jié)果，計算各檢測通道的均值(X)、標準差(SD)和變異系數(shù)(CV)。判斷是否小于廠家規(guī)定(CV≤5%)的性能指標。(2)日間精密度：取中值、低值2個濃度的伯樂質(zhì)控品，每天在每個檢通道檢測1次，連續(xù)測定20 d，計算各檢測通道均值(X)、標準差(SD)和變異系數(shù)(CV)。判斷是否小于廠家規(guī)定(CV≤10%)的性能指標。

1.3.4儀器間比對 選20例(包含低、中、高濃度)全血標本，分別在PA-980和PA-900儀器各檢測1次，以PA-980儀器為參比儀器，計算偏差。判斷是否≥80%標本偏差≤12.5%。

1.3.5線性范圍驗證 選取高濃度(H)和低濃度(L)血清標本各1例。高值標本濃度約為200 mg/L,低值標本濃度約為0.5 mg/L。標本分別按H、4H+L、3H+2L、2H+3L、H+4L、L的比例進行稀釋，每個稀釋度重復測定2次，計算均值(X)。將實測值與理論值作比較，計算Y=bX+a，驗證線性范圍。判斷標準：斜率b值在1±0.05范圍內(nèi)，相關(guān)系數(shù)(r)≥0.975(或R2≥0.95)即線性驗證合格。

1.3.6準確度 (1)國際參考品驗證：采用國際參考品(靶值41.2 mg/L)，分別在各通道檢測1次，計算偏差。要求偏差應≤5%。(2)廠家提供校準品驗證：分別在各通道檢測1次廠家提供5水平校準品，計算偏差。要求檢測濃度為0.5～5.0 mg/L偏差應≤10%，檢測濃度>5.0 mg/L，偏差應≤8%。

2 結(jié) 果

2.1空白檢測 各通道檢測結(jié)果均小于0.5 mg/L，空白檢測通過。見表1。

表1 空白檢測結(jié)果(mg/L)

2.2攜帶污染率 A、B、C通道攜帶污染率分別為0.29%、0.28%、0.24%，小于廠家≤1%的標準。見表2。

表2 攜帶污染率檢測結(jié)果

2.3精密度

2.3.1批內(nèi)精密度 低、中、高值3個濃度的全血標本的批內(nèi)精密度，A通道分別為2.73%、2.33%、1.71%；B通道分別為2.11%、2.77%、1.16%；C通道分別為1.73%、2.15%、1.10%。結(jié)果均小于廠家規(guī)定(CV≤5%)的性能指標。見表3。

2.3.2日間精密度 中值、低值2個濃度的伯樂質(zhì)控品日間精密度，A通道分別為9.67%、4.95%；B通道分別為6.06%、3.58%；C通道分別為6.39%、4.80%。結(jié)果均小于廠家規(guī)定(CV≤10%)的性能指標。見表4。

表3 批內(nèi)精密度檢測結(jié)果

表4 日間精密度檢測結(jié)果

2.4儀器間比對 經(jīng)與PA-980比對，20例全血標本其中有18例檢測結(jié)果偏差≤12.5%。符合至少80%標本偏差應≤12.5%的廠家聲明。見表5。

表5 儀器間比對檢測結(jié)果

2.5線性范圍驗證 線性范圍驗證結(jié)果表明，所測超敏C-反應蛋白濃度為0.3～200.0 mg/L，線性范圍好，與理論值高度相關(guān)。見表6和圖1。

表6 線性范圍檢測結(jié)果

圖1 線性范圍驗證結(jié)果

2.6準確度驗證結(jié)果 (1)國際參考品驗證：國際參考品檢測結(jié)果A通道為42.55 mg/L、B通道為43.01 mg/L、C通道為43.19 mg/L，偏差分別為3.3%、4.4%、4.8%,均符合偏差小于5%的要求。(2)廠家提供校準品驗證：5個水平廠家校準品檢測結(jié)果與靶值的偏差均小于廠家的聲明。見表7。

表7 5水平廠家校準品驗證結(jié)果

3 討 論

C-反應蛋白是一種能與肺炎球菌C多糖反應形成復合物的急性時相反應蛋白，患者在各種急性炎性反應、組織損傷、心肌梗死、手術(shù)創(chuàng)傷、放射性損傷的疾病發(fā)作后數(shù)小時迅速升高，病情好轉(zhuǎn)后又迅速降至正常，其升高幅度與感染的程度呈正相關(guān)。C-反應蛋白可以反映急性炎性病情，具有臨床重要意義[5-6]。隨C-反應蛋白測定在臨床的廣泛應用，尤其與白細胞計數(shù)聯(lián)合檢驗的方法對兒科醫(yī)師制定治療方案具有重要的參考作用，有利于實現(xiàn)個性化治療的需要，同時，還可避免使用不必要的抗菌藥物，保證患兒的健康恢復[7]。傳統(tǒng)方法檢測血清C-反應蛋白標本用量大，兒童采血困難，同時床旁檢測人為影響因素多，可能影響檢測結(jié)果的準確度及精密度，對臨床造成誤診及漏診[8]。而全血(末梢血)C-反應蛋白的檢測快速、方便、經(jīng)濟、結(jié)果準確可靠、創(chuàng)傷小，更容易被患兒及其家屬接受[9]。

通過對普門PA-900特定蛋白分析儀檢測超敏C-反應蛋白主要性能進行驗證，本研究結(jié)果表明，普門PA-900特定蛋白分析儀檢測超敏C-反應蛋白的空白檢測小于0.499，攜帶污染率小于1%，批內(nèi)及日間精密度均符合要求。準確度驗證結(jié)果顯示，與國際參考品比較偏差均小于5%，與廠家標準品比較除低水平(5 mg/L)偏差約為8%外，其余4個水平偏差均小于5%，說明檢測結(jié)果準確可靠。線性范圍驗證實驗證實，普門PA-900特定蛋白分析儀檢測超敏C-反應蛋白的線性范圍基本能夠滿足臨床標本的需要。儀器間比對證實2臺儀器之間結(jié)果具有可比性。

普門PA-900特定蛋白分析儀檢測超敏C-反應蛋白，其用血量很少(僅需要10 μL)，開放進樣模式避免了死腔量對標本量的限制，且檢測速度快(60例/小時)能夠與血常規(guī)同步檢測,尤其適用于兒科門、急診患者血常規(guī)與C-反應蛋白同時檢測。

綜上所述，普門PA-900特定蛋白分析儀檢測超敏C-反應蛋白的各項性能指標能達到廠家聲明的標準，可用于臨床超敏C-反應蛋白的檢測。