楊 軍,李向農(nóng)

(徐州醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院普通外科， 江蘇徐州 221002)

脾腫大、脾功能亢進(jìn)是肝硬化門(mén)靜脈高壓癥的常見(jiàn)臨床特點(diǎn)，表現(xiàn)為一系或多系外周血細(xì)胞減少，以血小板減少為主并較早出現(xiàn)。脾切除可使大部分患者血細(xì)胞成分正?；蚪咏?癥狀緩解。然而，肝硬化門(mén)靜脈高壓癥時(shí)脾功能亢進(jìn)的原因，尤其是脾臟大小、門(mén)靜脈壓力與外周血細(xì)胞改變之間的關(guān)系尚不清楚。明確脾功能亢進(jìn)的發(fā)病機(jī)制是進(jìn)行有效治療的關(guān)鍵。本實(shí)驗(yàn)將對(duì)門(mén)靜脈高壓癥大鼠門(mén)靜脈壓力、脾臟大小、肝功能與外周血細(xì)胞減少之間的關(guān)系進(jìn)行初步探討。

1 材料與方法

1.1動(dòng)物分組 健康雄性SD大鼠28只，體質(zhì)量200～320 g，由徐州醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。稱(chēng)體質(zhì)量并隨機(jī)分成3組：肝硬化組(A組)10只、門(mén)靜脈縮窄組(B組)10只、正常對(duì)照組(C組)8只。

1.2動(dòng)物模型建立 (1)肝硬化模型：A組以0.03%硫代乙酰胺(TAA)作為飲用水初始濃度,飼以顆粒飼料，每周根據(jù)體質(zhì)量變化調(diào)整飲用水TAA濃度，共6周[1]。(2)門(mén)靜脈縮窄模型：B組正常飼喂3周后，禁食一夜,腹部脫毛。以3%戊巴比妥鈉每千克體質(zhì)量1 mL腹腔注射麻醉，消毒、鋪巾，自劍突向下作2 cm腹部正中切口,暴露門(mén)靜脈主干,從脾靜脈匯入門(mén)靜脈處上方將門(mén)靜脈主干分離,直至肝門(mén)處。以16 G鈍頭直針平行置于門(mén)靜脈主干旁,從門(mén)靜脈深面穿過(guò)兩道3-0絲線(xiàn),將門(mén)靜脈主干與鈍頭針一起結(jié)扎,緩慢旋轉(zhuǎn)抽出鈍頭針,關(guān)腹，繼續(xù)飼喂3周[2]。C組：正常飼喂6周。飼喂過(guò)程中觀察有無(wú)肝性腦病出現(xiàn)。

1.3實(shí)驗(yàn)方法 6周后，全部大鼠禁食一夜并稱(chēng)體質(zhì)量、脫毛。麻醉后開(kāi)腹肉眼觀察肝脾形態(tài)、腹水量等變化。采用5號(hào)頭皮針穿刺脾實(shí)質(zhì)和門(mén)靜脈主干，水柱法測(cè)量脾髓壓力(SP,cm H2O)和門(mén)靜脈壓力(PVP,cm H2O)。抽取下腔靜脈血2～3 mL，分別置入普通試管和含有EDTA的試管中，使用全自動(dòng)分析儀測(cè)定肝功能、凝血酶原時(shí)間(s)、血紅蛋白(Hb,g/L)、白細(xì)胞(WBC,×109/L)、血小板(PLT,×109/L)等。切除肝脾，稱(chēng)脾質(zhì)量。脾臟指數(shù)(SI)按公式計(jì)算[3]：SI=脾臟質(zhì)量(mg)/大鼠體質(zhì)量(g)。肝組織切塊約為15 mm×15 mm×2 mm,HE染色,常規(guī)病理檢查。

2 結(jié) 果

2.13組大鼠SI、PVP、SP、WBC、PLT、Hb計(jì)數(shù)結(jié)果比較 見(jiàn)表1。

2.23組大鼠PVP、SP、SI與Hb、WBC、PLT的Spearman相關(guān)分析結(jié)果 見(jiàn)表2。

表1 3組大鼠SI、PVP、SP和外周血細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果比較

注：與C組比較，#P<0.05;與B組比較，*P<0.05

表2 3組大鼠肝功能、腹水、肝性腦病和凝血酶原時(shí)間結(jié)果比較

注：與C組比較，#P<0.05;與B組比較，*P<0.05；-表示無(wú)數(shù)據(jù)

2.33組大鼠PVP、SP、SI與外周血細(xì)胞的相關(guān)性 A組大鼠有2只于實(shí)驗(yàn)第4周時(shí)死亡，剩余8只肝臟外觀和病理切片呈肝硬化表現(xiàn)，肝功能也出現(xiàn)不同程度異常。B組大鼠無(wú)死亡，肝臟外觀、病理切片和肝功能與C組相似。根據(jù)肝功能、凝血酶原時(shí)間結(jié)果、腹水量和有無(wú)肝性腦病等對(duì)大鼠肝功能進(jìn)行Child-Push分級(jí)評(píng)分[4]。見(jiàn)表3和圖1。

表3 3組大鼠PVP、SP、SI與外周血細(xì)胞的相關(guān)性

圖1 PLT計(jì)數(shù)與SI之間的擬合曲線(xiàn)

3 討 論

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，A組和B組大鼠的SI、PVP、SP相似并明顯高于C組(P<0.05)；血液學(xué)改變方面，A組與另外2組之間PLT計(jì)數(shù)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而3組之間Hb、WBC計(jì)數(shù)比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；下降明顯的PLT計(jì)數(shù)與SI全變量回歸分析結(jié)果：PLT=839.14―16.142SI，P=0.71。PLT與SI擬合曲線(xiàn)(圖1)提示PLT減少與脾腫大無(wú)直線(xiàn)相關(guān)關(guān)系。

血液異常是肝臟病變的常見(jiàn)臨床表現(xiàn),包括血液成分、細(xì)胞形態(tài)、血漿總?cè)萘康母淖儭８斡不T(mén)靜脈高壓可導(dǎo)致脾腫大，而脾腫大被認(rèn)為可聚集并破壞血液有形成分，是引起血細(xì)胞減少的主要機(jī)制[5]?？赡芘c以下幾個(gè)過(guò)程有關(guān)[6]:(1)脾臟對(duì)血細(xì)胞過(guò)分阻留和吞噬破壞。(2)脾臟可能分泌某種已知或尚未證實(shí)的“激素”“細(xì)胞因子”等,抑制骨髓。(3)脾臟產(chǎn)生某種自身抗體,破壞自身血細(xì)胞。(4)脾功能亢進(jìn)時(shí)血液稀釋造成循環(huán)血細(xì)胞減少。各過(guò)程在脾功能亢進(jìn)發(fā)生中所起的作用因引起脾功能亢進(jìn)的原發(fā)病不同而有差異。多年來(lái)一直采用切除脾臟治療脾功能亢進(jìn)，緩解門(mén)靜脈高壓，但臨床有時(shí)發(fā)現(xiàn)切除脾臟后，血細(xì)胞計(jì)數(shù)并未完全恢復(fù)正常，因此，脾腫大與外周血細(xì)胞減少的關(guān)系尚不明確[7]。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，肝硬化、門(mén)靜脈縮窄均可造成不同程度的PVP升高、SP升高和脾腫大，血液系統(tǒng)改變出現(xiàn)較早的是PLT減少，這與其他研究結(jié)果一致[8]。但本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)脾腫大與血細(xì)胞計(jì)數(shù)減少無(wú)明顯相關(guān)關(guān)系，而肝功能可能在血液系統(tǒng)改變方面發(fā)揮著一定的作用。因此，本研究認(rèn)為脾腫大可能僅是引起血細(xì)胞減少的因素之一，肝功能和其他體液因素也可能發(fā)揮重要作用。脾切除術(shù)對(duì)緩解肝硬化門(mén)靜脈高壓時(shí)脾功能亢進(jìn)的作用還有待于進(jìn)一步認(rèn)識(shí)。