張效本，田 蔥，趙雪麗，原慧芳

(河南省開封市醫(yī)學科學研究所 475000)

人巨細胞病毒(HCMV)屬皰疹病毒科，為雙鏈DNA病毒，是引起圍產(chǎn)兒感染最常見的病毒[1]。HCMV可侵襲多個器官、系統(tǒng)而產(chǎn)生嚴重疾病[2]。免疫機制發(fā)育不成熟的新生兒和嬰兒，則可產(chǎn)生肝炎、肺炎、腦膜炎、智力低下、先天性耳聾等嚴重的感染癥狀[3]。因此，及早診斷和治療對疾病的控制和預后有著重要意義?，F(xiàn)探討嬰兒血液、尿液、母乳聯(lián)合檢測在嬰兒HCMV感染的診斷價值。報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 258例疑似HCMV感染的嬰兒來自2015年10月至2017年11月該市婦幼保健院就診或住院患者，男152例，女106例，年齡28 d至11個月，中位年齡3個月。臨床表現(xiàn)為黃疸和(或)肝功能異常者114例，腹瀉29例，肺炎45例，腦炎7例，傳染性單核細胞增多癥3例，心肌炎3例，其他57例。HCMV感染的診斷參考中華醫(yī)學會兒科學分會發(fā)布的《巨細胞病毒診斷方案(1998年)》[4]和《兒童HCMV疾病診斷和防治的建議(2012年)》[5]。

1.2方法

1.2.1標本采集和處理 采用潔凈試管收集嬰兒晨尿或產(chǎn)婦乳汁(清洗乳頭)1.5 mL，10 000 r/min離心5 min留取沉淀物；取嬰兒空腹全血1.0 mL加入含EDTA抗凝劑的試管中，使用1.0 mL淋巴細胞液抽提細胞,生理鹽水洗滌留取沉淀。不能及時檢測的標本―20 ℃保存。

1.2.2儀器與試劑 全自動熒光定量PCR擴增儀，DA7600型，佛山達安醫(yī)療設備有限公司生產(chǎn)。HCMV DNA檢測試劑盒為中山達安基因股份有限公司產(chǎn)品。

1.2.3HCMV DNA測定 嚴格按試劑盒說明書操作。將50 μL處理后的尿液、乳汁、血細胞沉淀物，以及等量DNA提取液加入1.5 mL離心管中，100 ℃加熱10 min,12 000 r/min離心5 min取上清液2 μL做PCR擴增。FQ-PCR擴增條件：93 ℃,2 min預變性;93 ℃ 45 s→55 ℃ 60 s,10個循環(huán)；93 ℃ 30 s→55 ℃ 45 s,30個循環(huán)。結果判定由分析處理軟件系統(tǒng)自動生成。試劑盒檢出限度為103copy/mL。

1.3統(tǒng)計學處理 采用SPSS18.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析。計數(shù)資料以例數(shù)或百分率表示，結果關聯(lián)性分析使用χ2檢驗；差別性檢驗，關聯(lián)系數(shù)P越接近1表示關系越密切，反之越不密切。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.13種標本HCMV DNA陽性率結果比較 258例嬰兒血液、尿液及其母親母乳HCMV DNA陽性率分別為28.68%(74/258)、48.06%(124/258)、61.24%(158/258)。嬰兒血液和尿液聯(lián)合檢測HCMV DNA的陽性率為55.04%(142/258)，3種標本聯(lián)合檢測HCMV DNA的陽性率為74.41%(192/258)。

2.23種標本檢測的相關性及診斷價值 258例嬰兒血液、尿液及其母親母乳HCMV DNA檢測結果經(jīng)關聯(lián)性分析和差別性檢驗，結果之間有相關性，但差異無統(tǒng)計學意義(均P>0.05)。見表1～3。

表1 血液和尿液標本HCMV DNA檢測結果之間的相關性(n)

注：χ2=63.09，P=0.444

表2 血液和母乳標本HCMV DNA檢測結果之間的相關性(n)

注：χ2=12.84，P=0.219

表3 尿液和母乳標本HCMV DNA檢測結果之間的相關性(n)

注：χ2=29.02，P=0.318

3 討 論

HCMV感染在我國流行廣泛，原發(fā)性感染多發(fā)生于嬰幼兒時期[5]。成人常為隱性感染，但嬰兒由于免疫系統(tǒng)發(fā)育尚不完全，感染后極易誘發(fā)相關疾病。對嬰兒HCMV感染診斷除依靠臨床癥狀外，實驗室診斷尤其重要[6]。HCMV感染后病毒核酸比血清學證據(jù)和臨床癥狀出現(xiàn)得更早，因此可將檢測HCMV核酸作為HCMV感染的早期診斷指標[7]。目前，有關嬰兒血液、尿液及其母親母乳HCMV DNA檢測已有臨床應用的相關報道[7-8]。但未對3種標本檢測結果之間的相關性進行探討。

本研究結果顯示，嬰兒尿液HCMV DNA陽性率(48.06%)高于血液(28.68%)，推測尿液檢測對嬰兒HCMV感染的診斷價值可能大于血液；但嬰兒尿液和血液HCMV DNA檢測結果之間的相關性提示，兩者關系并不密切，2種標本檢測結果一致性并不高。說明嬰兒血液和尿液標本聯(lián)合檢測對HCMV感染的診斷具有互補作用，可減少漏診。本研究血液HCMV DNA陽性率較低的原因，可能與病毒感染時期或者提取DNA的含量較少有關。

本研究258例嬰兒血液、尿液及其母親母乳標本檢測結果表明，母乳HCMV DNA陽性率(61.24%)高于嬰兒血液和尿液，與宋春蘭等[9]報道的69.4%基本一致，認同母乳是嬰兒HCMV獲得性感染的主要途徑，提示母乳喂養(yǎng)可能會增加嬰兒HCMV感染概率，應引起重視。同時，分析母乳與嬰兒血液、尿液檢測結果的相關性顯示，母乳與血液、尿液HCMV DNA檢測結果之間的相關性也不密切，雖然母乳HCMV DNA結果為陽性(或陰性)者，嬰兒血液或尿液HCMV DNA結果也多為陽性(或陰性)，但仍有多例乳汁HCMV DNA結果為陽性者，血液或尿液HCMV DNA結果為陰性。因此，對于血液或尿液HCMV DNA陰性，又疑似HCMV感染的患兒，行母乳HCMV DNA檢測很有必要，即使不能為HCMV感染的診斷提供直接證據(jù)，也對HCMV感染相關疾病溯源和治療具有指導作用。

當前，母乳喂養(yǎng)增加嬰兒HCMV感染概率已經(jīng)被眾多研究所證實。有研究報道，HCMV的發(fā)病機制及預后受機體免疫力的影響，當感染了HCMV的孕婦免疫力下降時，HCMV可被激活而變?yōu)轱@性感染，并通過母乳傳播給嬰兒[10]。但也有研究認為，雖然新生兒產(chǎn)后通過母乳喂養(yǎng)HCMV感染率較高，但癥狀性感染率無明顯升高[11-12]。因此，母乳HCMV DNA檢測對嬰兒HCMV感染及相關疾病診斷的應用價值，還有待進一步的探討和臨床驗證。