蔣梅香，李福元，李飛艷，姚淑瓊，陳 容

(湖南中醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校，湖南 株洲 412012)

七厘散是骨傷科的經(jīng)典方劑， 2010、2015版《中國藥典》均有收載，處方組成由血竭、乳香、朱砂、沒藥、紅花、兒茶、冰片、麝香、朱砂等8味中藥組成，具有化瘀消腫，止痛止血之功效，主要用于跌撲損傷，血瘀疼痛，外傷出血[1]。方中朱砂的主要成分為HgS，作為含汞中藥，長期大量服用易引起肝腎等器官的蓄積毒性、神經(jīng)毒性、生殖毒性等多方面的毒副反應(yīng)[2-5]。七厘散廣泛應(yīng)用于骨科的術(shù)后恢復(fù)治療，多為長期用藥，如陳淡峰等在"傷科七厘散加味治療骨折及軟組織挫傷臨床應(yīng)用"中記錄該藥用于骨折治療"最快3周，最遲24周"，用于軟組織挫傷治療"最快1周，最遲4周"[6]等；由于用藥時間長，因此易導(dǎo)致患者體內(nèi)重金屬汞的蓄積中毒。本實(shí)驗(yàn)主要對含朱砂的七厘散與不含朱砂的七厘散的鎮(zhèn)痛作用進(jìn)行比較研究，以驗(yàn)證不含朱砂的七厘散是否有鎮(zhèn)痛功效，為七厘散中朱砂能否去除提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)藥物

(1)自制七厘散：按2015版《中國藥典》方法[1]自制：血竭500 g，乳香(制)75 g，沒藥(制)75 g，紅花75 g，兒茶120 g，冰片6 g，人工麝香6 g，朱砂60 g組成。以上八味，除人工麝香、冰片外，朱砂水飛成極細(xì)粉；其余血竭等五味粉碎成細(xì)粉。將人工麝香、冰片研細(xì)，與上述粉末配研，過篩，混勻，即得。(2)自制去朱砂七厘散：除不加朱砂外，其余組成與制法同七厘散。方中血竭、制乳香、制沒藥、紅花、兒茶、冰片均由北京同仁堂株洲分店提供，其中血竭，云南產(chǎn)，批號:170704；制乳香，海南產(chǎn)，批號:170401；制沒藥，海南產(chǎn)，批號：170901；紅花，新疆產(chǎn)，批號:170901；兒茶，云南產(chǎn)，批號:170501-1；冰片，廣東產(chǎn)，批號:170101；人工麝香由漢方國藥中藥飲片有限公司提供；朱砂由遠(yuǎn)光飲片廠提供；(3)陽性對照藥：阿司匹林腸溶片(規(guī)格：25 mg/片)，云南白藥集團(tuán)股份有限公司，批號：ZDA1609。

1.2 儀器與試劑

RB-200智能熱板儀(成都泰盟軟件有限公司)；冰醋酸(分析純，臺山市新寧制藥有限公司，批號20160603)。

1.3 實(shí)驗(yàn)動物

KM小鼠，體重20±2 g，實(shí)驗(yàn)動物為SPF級，購自長沙市天勤生物技術(shù)有限公司，動物合格證號SCXK(湘)2014-0011。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 小鼠熱板法

將智能熱板儀溫度調(diào)節(jié)至55 ± 0.5 ℃作為熱刺激源，將體重20 g左右的雌性KM小鼠投入熱板儀，記錄出現(xiàn)舔后足的潛伏時間(s)作為該鼠的痛閾值，給藥前先測定每只小鼠的痛閾值，痛閾值在5 ～ 30 s內(nèi)為合格鼠，取2次正常痛閾平均值，作為該鼠給藥前痛閾值，共選取雌性KM小鼠60只，體重20±2 g，隨機(jī)分為6組，每組10只，分別為空白對照組、阿司匹林組、七厘散低劑量組、七厘散高劑量組、去朱砂七厘散低劑量組、去朱砂七厘散高劑量組?？瞻讓φ战M以生理鹽水灌胃，其他組以相應(yīng)的藥物灌胃，灌胃體積為0.2 mL/10 g，灌胃劑量為阿司匹林組0.27 g/kg、七厘散低劑量組0.68 g/kg、七厘散高劑量組2.05 g/kg、去朱砂七厘散低劑量組0.64 g/kg、七厘散去朱砂高劑量組1.91 g/kg。連續(xù)用藥3 d，末次用藥后30、60、90 min分別測定小鼠痛閾值。為防止足部燙傷，若痛閾值超過60 s，即停止測試而按60 s計。以痛閾值為評價指標(biāo)，根據(jù)文獻(xiàn)方法[7-8]計算痛閾提高百分率(%)﹦100×(藥后痛閾均值﹣藥前痛閾均值)/ 藥前痛閾均值。

1.4.2 小鼠扭體法

KM小鼠60只，雌雄各半，體量18±2 g，隨機(jī)分為6組，分組同“1.4.1”項(xiàng)下方法，灌胃體積為0.2 mL/10 g，空白對照組以生理鹽水灌胃，其他組用藥劑量分別為阿司匹林組0.27 g/kg、七厘散低劑量組0.68 g/kg、七厘散高劑量組2.05 g/kg、去朱砂七厘散低劑量組0.64 g/kg、七厘散去朱砂高劑量組1.91 g/kg。連續(xù)用藥3 d，末次給藥30 min后，每鼠腹腔注射0.6%冰醋酸0.1 mL/10 g，記錄各鼠20 min內(nèi)扭體(腹部收縮內(nèi)凹、伸展后肢)的次數(shù)，根據(jù)文獻(xiàn)方法[8]計算藥物對小鼠扭體反應(yīng)的抑制率，即扭體次數(shù)抑制率(%)﹦100×(空白對照組扭體均數(shù)﹣試藥組扭體均數(shù))/ 空白對照組扭體均數(shù)。并比較各給藥組與空白對照組20 min內(nèi)的扭體次數(shù)是否存在統(tǒng)計學(xué)差異。

1.4.3 統(tǒng)計學(xué)處理

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0統(tǒng)計分析軟件進(jìn)行處理，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差( x ± s )表示，組間進(jìn)行t檢驗(yàn)，P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 小鼠熱板實(shí)驗(yàn)

與空白對照組比較，阿司匹林組、七厘散高劑量組、去朱砂七厘散高劑量組小鼠的痛閾值在給藥60 min后有明顯增大。與阿司匹林組比較，七厘散低劑量組和去朱砂七厘散低劑量組的痛閾值明顯減小，說明七厘散低劑量組和去朱砂七厘散低劑量組的鎮(zhèn)痛作用不如阿司匹林組；但七厘散高劑量組、去朱砂七厘散高劑量組的痛閾值與阿司匹林組比較無明顯差異。與同等劑量的七厘散組比較，去朱砂七厘散各組的痛閾值無明顯差異，說明七厘散去除朱砂后對小鼠熱板法的痛閾值和痛閾提高率影響不大。結(jié)果見表1和表2。

表1 含與不含朱砂的七厘散對小鼠熱板實(shí)驗(yàn)的影響( x ± s，n=10 )Tab 1 Effect of Qili San with or without cinnabar in mice hot-plate test ( x ± s，n=10 )

注：與空白對照組比較：▲P<0.05, ★P<0.01。note: vs the blank group, ▲P<0.05, ★P<0.01。與阿司匹林組比較：■P<0.05, ●P<0.01。note: vs the aspirin group, ■P<0.05, ●P<0.01。

表2 含與不含朱砂的七厘散在小鼠 熱板實(shí)驗(yàn)中的痛閾提高率Tab 2 Analgesic ratio of Qili San with or without cinnabar in mice hot-plate test

2.2 醋酸引起的小鼠扭體反應(yīng)實(shí)驗(yàn)

與空白對照組比較，各給藥組對醋酸引起的小鼠扭體反應(yīng)均有明顯抑制作用(P﹤0.05)，其中阿司匹林組、七厘散高劑量組、去朱砂七厘散高劑量組均能顯著(P﹤0.01)抑制醋酸引起的小鼠扭體反應(yīng)。與阿司匹林組比較，七厘散低劑量組和去朱砂七厘散低劑量組的小鼠扭體次數(shù)明顯增多，說明七厘散低劑量組和去朱砂七厘散低劑量組的鎮(zhèn)痛作用不如阿司匹林組；但七厘散高劑量組、去朱砂七厘散高劑量組的小鼠扭體次數(shù)與阿司匹林組比較均無明顯差異。與同等劑量的七厘散各組比較，去朱砂七厘散各組的小鼠扭體次數(shù)無明顯差異，說明七厘散去除朱砂后對醋酸引起的小鼠扭體反應(yīng)的影響不大。結(jié)果見表3。

表3 含與不含朱砂的七厘散對醋酸引起的小鼠扭體反應(yīng)實(shí)驗(yàn)的影響( x ± s，n=10 )Tab 3 Effect of Qili San with or without cinnabar on turning body induced by acetic acid in mice ( x ± s，n=10 )

注：與空白對照組比較，▲P<0.05,★ P < 0.01。 note: vs the blank group, ▲P<0.05, ★P<0.01。與阿司匹林組比較：●P<0.01。note: vs the aspirin group, ●P<0.01。

3 討論

2015版《中國藥典》規(guī)定，七厘散臨床用量為3.0～4.5 g/d，以4.5 g/d計，根據(jù)實(shí)驗(yàn)動物與人(成人按60 kg體重算)按體表面積比折算等效劑量的換算關(guān)系，得出小鼠的等效劑量為0.68 g(藥物)/kg(體重)。前期采用最大受試藥物量試驗(yàn)法完成的急性毒性試驗(yàn)結(jié)果顯示小鼠每日最大受試藥物量為灌胃七厘散6.07 g/kg(相當(dāng)于人臨床用藥量的8.9倍)，未出現(xiàn)死亡。根據(jù)人臨床用藥量，結(jié)合急性毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果，決定本次實(shí)驗(yàn)的等效劑量即為低劑量，高劑量與低劑量之比為3∶1。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明七厘散、去朱砂七厘散均有一定的鎮(zhèn)痛作用，不同劑量的七厘散和去朱砂七厘散的鎮(zhèn)痛作用隨劑量的增加而增強(qiáng)。與同等劑量的七厘散組比較，去朱砂七厘散各劑量組的小鼠熱板實(shí)驗(yàn)痛閾值和由醋酸引起的小鼠扭體反應(yīng)次數(shù)均無明顯差異，單就鎮(zhèn)痛作用而論，可以去除七厘散中的朱砂，故本實(shí)驗(yàn)為進(jìn)一步研究是否可去除七厘散中的朱砂提供了一定的科學(xué)依據(jù)。