張文慧 撫順市第三醫(yī)院檢驗(yàn)科 （遼寧 撫順 113004）

內(nèi)容提要： 目的：探討四種免疫檢驗(yàn)方法對(duì)慢性肝病患者的檢測(cè)情況。方法：選擇2016年11月～2017年12月本院收治的90例慢性肝病患者的血清標(biāo)本作為本次實(shí)驗(yàn)的研究對(duì)象，對(duì)比酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法、膠體金層析法、免疫電子發(fā)光試驗(yàn)法和聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法檢測(cè)慢性肝病患者血清標(biāo)本的結(jié)果。結(jié)果：四種方法檢測(cè)慢性肝病的符合率分別為68.9%、72.2%、83.3%、96.7%，聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法檢測(cè)慢性肝病的總符合率比其他三種方法要高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論：檢測(cè)慢性肝病，不同的檢測(cè)方法在原理、成本、總符合率等方面都有著不同，需要綜合評(píng)估檢測(cè)方法，以挑選最恰當(dāng)?shù)臋z測(cè)方法。

慢性肝病已成為當(dāng)前世界最普遍、最廣泛且危害最重的病毒性肝炎之一，精準(zhǔn)且迅速診斷乙肝，十分有利于病癥的治療與預(yù)后[1]。本次實(shí)驗(yàn)選擇2016年11月～2017年12月本院收治的90例慢性肝病患者的血清標(biāo)本作為本次實(shí)驗(yàn)的研究對(duì)象，實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果如下。

1.資料與方法

1.1 臨床資料

選擇2016年11月～2017年12月本院收治的90例慢性肝病患者的血清標(biāo)本作為本次實(shí)驗(yàn)的研究對(duì)象，患者年齡12～75歲，平均（36.2±2.8）歲，所有血清標(biāo)本通過酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定檢測(cè)，HBsAg呈陽(yáng)性，包括弱陽(yáng)性，及時(shí)將血清分離，并放至-20?C冰箱中儲(chǔ)存，標(biāo)本沒有出現(xiàn)黃疸、脂血、溶血的情況，標(biāo)本也不攜帶甲肝、丙肝、丁肝、戊肝等病毒。

試劑與儀器：①試劑：酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法的試劑盒是上?？迫A生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)，膠體金層析法的試紙條由愛康生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)，免疫電子發(fā)光試驗(yàn)法的定量檢測(cè)試劑由雅培公司生產(chǎn)，聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法的試劑盒由凱杰生物工程（深圳）有限公司生產(chǎn)。②儀器：采用變色龍免疫分析儀、美國(guó)雅培I-2000全自動(dòng)免疫發(fā)光分析儀。運(yùn)用美國(guó)PE公司AB17500型定量PCR（聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法）儀判定結(jié)果。

1.2 方法

1.2.1 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法（ELISA）。ELISA酶免疫測(cè)定技術(shù)是被應(yīng)用最為廣泛的技術(shù)，其工作原理是經(jīng)標(biāo)記的抗原與限量抗體相互競(jìng)爭(zhēng)而結(jié)合并產(chǎn)生反應(yīng)，反應(yīng)達(dá)到平衡后添加分離劑，對(duì)其中沉淀部分的放射性程度加以測(cè)定；把已知抗原或抗體吸附到固相載體表面，即聚苯乙烯微量反應(yīng)板上，從而在固相表面開展酶標(biāo)記的抗原抗體反應(yīng)，通過洗滌以清除液相中的游離成分。常用的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法包括雙抗體夾心法與間接法，雙抗體夾心法用來(lái)測(cè)定大分子抗原，間接法用來(lái)檢測(cè)特異抗體。

1.2.2 膠體金層析法（GICA）。遵循Frens的方法制作準(zhǔn)備好膠體金：采用超純水溶解氯金酸把溶液的最終濃度控制在0.01%，采用l00mL水加熱煮沸溶液，然后注入1%檸檬酸三鈉溶液，劑量為1.0mL，再行加熱15min，最后當(dāng)溶液的顏色從白色變?yōu)樗{(lán)色再變?yōu)榧t色，就算膠體金溶液制作成功。擱置膠體金溶液，直到溫度降到溫冷以備使用。對(duì)所用測(cè)試條進(jìn)行測(cè)試，如：吸水濾紙、玻璃纖維濾紙，把干燥的金標(biāo)鼠抗IgM抗體吸附至測(cè)試條上；再蓋上硝酸纖維素膜、吸水濾紙，然后把此四種測(cè)試條依次加以重疊，把它們?nèi)空迟N至白色塑料片上。檢測(cè)膠體金時(shí)，把使用到的測(cè)試條的加樣端浸潤(rùn)上血清，按照1:10的比例，用生理鹽水稀釋運(yùn)用到的血清，血清的深度控制在離吸附了金標(biāo)抗體的玻璃纖維濾紙下方8～10mm的位置，結(jié)果判定需在5～10min內(nèi)完成，紅色“+”代表結(jié)果呈陽(yáng)性，紅色“1”代表結(jié)果呈陰性，若測(cè)試條中無(wú)紅色線條產(chǎn)生，就說(shuō)明此次測(cè)試條測(cè)驗(yàn)無(wú)效。

1.2.3 免疫電子發(fā)光試驗(yàn)法（MEIA）。采用美國(guó)雅培公司的AX-SYM執(zhí)行測(cè)驗(yàn)，測(cè)定的試劑與定標(biāo)液都有雅培公司提供。

1.2.4 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法（PCR）。PCR屬于分子生物學(xué)技術(shù)，可以把特定的DNA片段加以放大，被當(dāng)成生物體外的特殊DNA復(fù)制。采用的裂解液提取DNA模版中的總反應(yīng)體系控制在20ta，所有反應(yīng)管被放到5700自動(dòng)熒光檢測(cè)儀中，分別在 93?C、55?C、72?C 等不同溫度下，預(yù)變 2min，而 93?C作為預(yù)變性參考標(biāo)準(zhǔn)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

此次實(shí)驗(yàn)所有數(shù)據(jù)全部由SPSS21.0版統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理，計(jì)量資料采用±s表示，采用t檢驗(yàn)進(jìn)行組間數(shù)據(jù)對(duì)比；比率（%）表示計(jì)數(shù)資料，采用χ2檢驗(yàn)比較組間資料，以P＜0.05代表差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.結(jié)果

對(duì)比不同檢測(cè)方法符合數(shù)，見表1。

3.討論

檢測(cè)乙型肝炎病毒感染主要檢測(cè)血清學(xué)與病毒學(xué)，血清學(xué)檢測(cè)指標(biāo)包括病毒表達(dá)產(chǎn)物以及抗原抗體系統(tǒng)，病毒學(xué)檢測(cè)指標(biāo)包括血清HBV-DNA[2]。當(dāng)前慢性乙肝檢測(cè)的四種方法就是酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法、膠體金層析法、免疫電子發(fā)光試驗(yàn)法和聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法。

在實(shí)際檢測(cè)中，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法的特點(diǎn)是反應(yīng)時(shí)間短，使用儀器簡(jiǎn)便，技術(shù)級(jí)別低，是慢性肝病檢測(cè)的首選方法[3]。不同形式的抗原體構(gòu)建了不同的檢測(cè)抗體，再采用不同的診斷試劑，最終檢測(cè)結(jié)果也就不盡相同。臨床一致主張，基因工程表達(dá)的抗原特異性與敏感性都強(qiáng)于全病毒抗原包被的試劑，原因在于全病毒的病毒抗原來(lái)源于細(xì)胞的培養(yǎng)，培養(yǎng)的細(xì)胞中可能包含其他類蛋白，給病毒的特異性與敏感性帶去影響；但是在保證提取與純化工藝的前提之下，全病毒抗原特異性與敏感性也有可能比表達(dá)抗原要高[4]。免疫電子發(fā)光試驗(yàn)法屬于快速免疫的分析方法，此方法最開始用來(lái)診斷早孕，伴隨技術(shù)的成熟，此方法被用來(lái)檢測(cè)多種傳染病與寄生蟲感染，譬如：狂犬病毒、惡性瘧原蟲[5]。膠體金層析法是將微孔膜當(dāng)作固相的載體，抗原或者抗體被附載到微孔膜上，再加到待測(cè)樣本之中，把膠體金標(biāo)記物的標(biāo)示結(jié)果定為反應(yīng)結(jié)果[6]。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法是新型檢測(cè)技術(shù)，其優(yōu)勢(shì)是精準(zhǔn)、迅速、靈敏度高，同時(shí)可以平行開展大量樣本的檢測(cè)，所以此方法可被廣泛推廣運(yùn)用[7]。

表1. 對(duì)比不同檢測(cè)方法符合數(shù)

本次試驗(yàn)研究結(jié)果表明，聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法檢測(cè)慢性肝病的總符合率明顯高于酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法、膠體金層析法與免疫電子發(fā)光試驗(yàn)法，對(duì)比后面三種方法的檢測(cè)總符合率，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。目前在臨床實(shí)踐中，聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法尚未成為廣泛運(yùn)用的技術(shù)，原因在于此方法實(shí)驗(yàn)時(shí)間過長(zhǎng)，有較高制作成本，制作過程也較為復(fù)雜，標(biāo)準(zhǔn)化數(shù)據(jù)庫(kù)存的構(gòu)建難度較大。

綜上所述，檢測(cè)慢性肝病的幾種方法當(dāng)中，不同的檢測(cè)方法，有著不同的原理、成本與總符合率，在實(shí)際運(yùn)用過程中，應(yīng)當(dāng)開展綜合性評(píng)估，以挑選最佳且普遍的檢測(cè)方法，目前醫(yī)學(xué)界尚未形成成熟的評(píng)定檢測(cè)方式的方法，所以有待繼續(xù)探索檢測(cè)方法。