王旗 王祎丹 耿旭浩

實(shí)驗(yàn)室或臨床實(shí)踐研究表明，酵母菌對(duì)腸道細(xì)菌如大腸桿菌、沙門氏菌等引起的腸道感染、腹瀉等疾病有保護(hù)預(yù)防性作用。酵母菌代謝后產(chǎn)物對(duì)致病菌的拮抗、競(jìng)爭(zhēng)排斥作用是產(chǎn)生上述功能的主要因素。酵母菌拮抗作用產(chǎn)生的原因是多方面的： （1）酵母菌產(chǎn)酸，如乙酸、丙酸、乳酸等，酸對(duì)有害菌起生長(zhǎng)抑制作用。（2）酵母菌產(chǎn)抗生素或細(xì)菌素類物質(zhì)，對(duì)有害菌有殺菌作用。本試驗(yàn)從上述觀點(diǎn)出發(fā)，用牛津杯法對(duì)5株酵母菌在體外的抑制菌能力及抑菌作用物質(zhì)進(jìn)行研究，為下一步動(dòng)物實(shí)驗(yàn)打下基礎(chǔ)。

目前，在動(dòng)物養(yǎng)殖中抗生素被大量使用，由抗生素殘留引發(fā)的食品安全問(wèn)題日益增多，因此，健康養(yǎng)殖已成為保障動(dòng)物性食品安全的關(guān)鍵。酵母菌是一種常見(jiàn)的適應(yīng)性很強(qiáng)的兼性厭氧微生物。因其含有豐富的蛋白質(zhì)、核酸、維生素、微量元素等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，且具有易發(fā)酵、增殖成本低等優(yōu)點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用于食品、化工、藥物、飼料、環(huán)境治理和生物工程等行業(yè)。本文前期研究發(fā)現(xiàn)，5種常見(jiàn)酵母菌具有一定的抑菌性。對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸桿菌抑菌效果顯著，為其微生態(tài)制劑的開(kāi)發(fā)及應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。

材料與方法

材料與試劑

（1）菌種

試驗(yàn)菌種：畢赤克魯維酵母BP- 18、膠紅酵母、隱球酵母AP- 20、克魯斯假絲酵母M5-13、葡萄有孢漢遜酵母、枯草芽孢桿菌、沙雷氏菌、巨大芽孢桿菌（本實(shí)驗(yàn)室保存）

指示菌種：大腸桿菌，金黃色葡萄球菌（本實(shí)驗(yàn)保存）

（2）培養(yǎng)基

營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基 （NA）、LB肉湯培養(yǎng)基 、YPD培養(yǎng)基。

（3）試劑

LB肉湯培養(yǎng)基， 北京路橋技術(shù)有限責(zé)任公司；YPD培養(yǎng)基，北京路橋技術(shù)有限責(zé)任公司；蛋白胨、牛肉膏、酵母膏、氯化鈉、葡萄糖， 北京奧博星生物技術(shù)有限公司， 以上試劑均為分析純。

儀器與設(shè)備。ZSD- A1160生化培養(yǎng)箱、ZHWY- 2102C恒溫?fù)u床、ZHJ H- C1109B型超凈工作臺(tái)， 上海智城分析儀器制造公司； FE20 p H計(jì)， 梅特勒-托利多儀器 （上海） 有限公司。

指示平板法

（1）指示平板的制備

試驗(yàn)菌株酵母菌制備：將5種酵母菌接種于YPD培養(yǎng)基中進(jìn)行活化及傳代培養(yǎng)，并利用分光亮度計(jì)測(cè)定吸亮度以測(cè)其菌液量，使其菌液量達(dá)到106CFU/m L。

（2）指示菌液的制備

將金黃色葡萄球菌、大腸桿菌 分別接種于LB肉湯中進(jìn)行活化及傳代培養(yǎng)，并利用分光亮度計(jì)測(cè)定其吸光值使其菌液量達(dá)到106CFU/m L。

牛津杯法測(cè)定

結(jié)果與分析

酵母菌抑菌結(jié)果分析

從表結(jié)果可以看出，膠紅酵母、葡萄有孢漢遜酵母對(duì)大腸桿菌具有抑菌能力，且葡萄有孢漢遜酵母對(duì)大腸桿菌抑菌能力最強(qiáng)，膠紅酵母對(duì)大腸桿菌抑菌能力相對(duì)較弱，另外三種酵母無(wú)明顯抑菌性能；膠紅酵母、葡萄有孢漢遜酵母對(duì)金黃色葡萄球菌具有抑菌能力，且葡萄有孢漢遜酵母對(duì)金黃色葡萄球菌抑菌能力強(qiáng)于膠紅酵母，克魯斯假絲酵母M5- 13對(duì)金黃色葡萄球菌抑菌能力相對(duì)較弱，另外兩種酵母無(wú)明顯抑菌性能。

本實(shí)驗(yàn)所選取的5種酵母菌通過(guò)體外抑菌實(shí)驗(yàn)表明：隱球酵母AP- 20、畢赤克魯維酵母BP- 18對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌無(wú)明顯抑制作用，而葡萄有孢漢遜酵母、膠紅酵母、克魯斯假絲酵母M5- 13對(duì)大腸桿菌及金黃色葡萄球菌均有不同程度的抑制作用。