梁春梅，喻東威，常建軍，宋曉東，解鑫，吳玉秋，趙媛，許璐

（內(nèi)蒙古蒙牛乳業(yè)（集團(tuán)）股份有限公司中心實(shí)驗(yàn)室，呼和浩特011500）

0 引 言

體細(xì)胞計(jì)數(shù)是目前較常用的鑒別乳區(qū)、牛只和牛群乳房健康狀態(tài)的有效方法，生乳中體細(xì)胞數(shù)量高低對(duì)乳產(chǎn)品的質(zhì)量和風(fēng)味有很大的影響，特別是乳房炎乳（體細(xì)胞含量高）中有含量較多的蛋白酶和脂肪酶，會(huì)使長(zhǎng)保質(zhì)期的產(chǎn)品提前變質(zhì)。本試驗(yàn)采用間接測(cè)定乳中體細(xì)胞數(shù)(SCC)來(lái)診斷隱性乳房炎的方法。其原理是在表面活性物質(zhì)和堿性藥物作用下，乳中體細(xì)胞被破壞，釋放出DNA，進(jìn)一步作用，使乳汁產(chǎn)生沉淀或形成凝膠,將其收集到透明塑料管中，將內(nèi)容物體積與生乳中體細(xì)胞數(shù)量（顯微鏡檢測(cè)）建立關(guān)系，直接通過(guò)管壁上的刻度（數(shù)量）得出體細(xì)胞數(shù)量,以體細(xì)胞數(shù)量的多少來(lái)間接診斷乳房炎和炎癥的程度。該方法，操作簡(jiǎn)單，結(jié)果準(zhǔn)確，判斷客觀，可在牛體旁完成。

1 實(shí)驗(yàn)

1.1 材料與設(shè)備

生乳樣品。

尼康E200正立顯微鏡，電子天平，電熱恒溫培養(yǎng)箱，SCC-100體細(xì)胞檢測(cè)儀，F(xiàn)OSS體細(xì)胞快速檢測(cè)儀，體細(xì)胞（SCC）試劑盒，(包括20個(gè)一次性移液管、20個(gè)分析試管、20個(gè)帶有排水孔的官帽、20根攪拌管、1瓶試劑)。

1.2 檢測(cè)方法

（1）直接鏡檢法該法采用農(nóng)業(yè)部行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)NY/T 800-2004。操作時(shí)將待測(cè)的生乳樣品涂抹在載玻片上成樣膜，干燥、染色，顯微鏡下對(duì)細(xì)胞核可被亞甲基藍(lán)清晰染色的細(xì)胞計(jì)數(shù)。

（2）SCC-100體細(xì)胞檢測(cè)儀法和FOSS體細(xì)胞快速檢測(cè)儀法按照廠家說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

（3）體細(xì)胞試劑盒法測(cè)試步驟

①向試管中加入2 m L試劑2 m L奶樣,把攪拌管沿試管壁慢慢滑至試管底部，然后提至試管頂部，進(jìn)行混合。在30秒內(nèi)重復(fù)20次。（請(qǐng)勿搖晃試管，勿將攪拌管的頂部蓋住。）

②牢固的蓋上試管，聽(tīng)到兩聲咔噠聲后將試管倒置30秒，排除液體。將試管恢復(fù)直立位置，等待幾秒鐘，待液體穩(wěn)定，讀取剩余牛奶的水平刻度。

③解讀結(jié)果：試管上牛奶的水平刻度讀數(shù)表示體細(xì)胞的預(yù)計(jì)數(shù)量（以千數(shù)計(jì)）。例如水平刻度讀數(shù)為205，表示體細(xì)胞數(shù)為205 000 m L-1。

1.3 準(zhǔn)確度實(shí)驗(yàn)

選取大量生乳樣品分別用體細(xì)胞（SCC）試劑盒法、NY/T800-2004生鮮牛乳中體細(xì)胞測(cè)定方法、SCC-100體細(xì)胞檢測(cè)儀和FOSS體細(xì)胞快速檢測(cè)儀法檢測(cè)體細(xì)胞數(shù)，分析體細(xì)胞（SCC）試劑盒法檢測(cè)結(jié)果與其它檢測(cè)方法是否存在顯著性差異。

1.4 精密度實(shí)驗(yàn)

選取5個(gè)不同生乳樣品，采用體細(xì)胞（SCC）試劑盒法方法進(jìn)行精密度檢測(cè)試驗(yàn)，進(jìn)而驗(yàn)證體細(xì)胞（SCC）試劑盒的精密度試驗(yàn)是否符合要求。

1.5 數(shù)據(jù)分析

將菌落計(jì)數(shù)結(jié)果轉(zhuǎn)化成常用對(duì)數(shù)值后，對(duì)每類樣品進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。對(duì)對(duì)數(shù)平均偏差進(jìn)行配對(duì)t檢驗(yàn)以確定不同方法之間微生物菌落總數(shù)是否有顯著性差異。結(jié)果分析采用SPSS軟件進(jìn)行配對(duì)t檢驗(yàn)分析。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析中，P＜0.05表明有顯著性差異。重復(fù)性試驗(yàn)用相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差進(jìn)行分析。

2 結(jié)果與討論

2.1 準(zhǔn)確度試驗(yàn)

2.1.1 試劑盒法和標(biāo)準(zhǔn)方法以及儀器方法的比對(duì)結(jié)果

選取生乳樣品，分別用4種方法進(jìn)行檢測(cè)體細(xì)胞，共做73個(gè)樣品實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)結(jié)果如圖1～圖3和表1～表2所示。

本研究選擇73個(gè)生乳樣品進(jìn)行實(shí)驗(yàn),共得到292組實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)并對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。從圖1、圖2、圖3可知體細(xì)胞（SCC）試劑盒法與國(guó)標(biāo)方法保持很好的一致性，相關(guān)系數(shù)達(dá)到了0.95以上（表1）；與FOSS儀器法之間相關(guān)系數(shù)為0.925,與SCC-100儀器法之間相關(guān)系數(shù)為0.919，說(shuō)明體細(xì)胞（SCC）試劑盒法與儀器快檢方法的檢測(cè)結(jié)果也有很高的相關(guān)性。由表2可以看出，體細(xì)胞試劑盒方法與標(biāo)準(zhǔn)方法和兩種儀器方法之間均無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。

表1 成對(duì)樣本相關(guān)系數(shù)

圖1 試劑盒法與NY/T800-2004法對(duì)比結(jié)果

圖2 試劑盒法與FOSS法對(duì)比結(jié)果

圖3 試劑盒法與SCC-100法對(duì)比結(jié)果

2.1.2 快速儀器方法和標(biāo)準(zhǔn)方法的比對(duì)

由表3可以看出，標(biāo)準(zhǔn)方法與FOSS儀器方法，標(biāo)準(zhǔn)方法與SCC-100法，F(xiàn)OSS法與SCC-100法之間相關(guān)系數(shù)均在0.95以上；由表4可以看出，標(biāo)準(zhǔn)方法與FOSS儀器方法，標(biāo)準(zhǔn)方法與SCC-100法，F(xiàn)OSS法與SCC-100法之間均無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。儀器方法檢測(cè)生乳樣品準(zhǔn)確度符合要求，與國(guó)標(biāo)方法一致性較好。

表2 成對(duì)樣本檢驗(yàn)

表3 成對(duì)樣本相關(guān)系數(shù)

表4 成對(duì)樣本檢驗(yàn)

2.2 精密度實(shí)驗(yàn)

隨機(jī)選取5批生乳樣品，采用IDEXX體細(xì)胞（SCC）試劑盒法對(duì)不同的生乳樣品進(jìn)行實(shí)驗(yàn)分析，按照四(1)的操作步驟每個(gè)樣品重復(fù)測(cè)定10次計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD%）結(jié)果如表5所示。

由表5可以明顯得到方法精密度的結(jié)果，樣品相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于10%，樣品1到樣品5相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為6.18%，4.21%，6.56%，7.20%，8.15%，說(shuō)明體細(xì)胞（SCC）試劑盒法精密度滿足要求。

3 結(jié) 論

本研究是對(duì)體細(xì)胞（SCC）試劑盒法和《NY/T 800-2004生鮮牛乳中體細(xì)胞測(cè)定方法》中的顯微鏡法，以及市場(chǎng)上現(xiàn)行常用的SCC-100和FOSS快速儀器法進(jìn)行對(duì)比研究，可知該方法的準(zhǔn)確度和精密度均符合要求，且相對(duì)于其他方法操作簡(jiǎn)單，結(jié)果準(zhǔn)確，特異性強(qiáng)，判斷客觀。

表5 不同體細(xì)胞水平生乳樣品重復(fù)測(cè)定的結(jié)果(×104）m L-1

體細(xì)胞試劑盒法具有很高的精密度和準(zhǔn)確度，能夠滿足生乳中體細(xì)胞數(shù)快速、準(zhǔn)確檢測(cè)?？啥繙y(cè)定生乳中的體細(xì)胞數(shù)，對(duì)生乳的質(zhì)量檢測(cè)和監(jiān)測(cè)牛乳房炎都有重要作用。該方法成本低實(shí)驗(yàn)材料攜帶方便，而且不需要復(fù)雜的操作，所以既適用于大型奶牛場(chǎng)的專業(yè)監(jiān)測(cè)，也同樣滿足奶農(nóng)對(duì)牛奶的日常檢測(cè)。