肖晶 王文波（通訊作者）姚瀚勛 彭志柱 李啟明 曾詩(shī)意 夏學(xué)巍

（桂林醫(yī)學(xué)院研究生院 廣西 桂林 541000；桂林醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院 廣西 桂林 541001）

缺血性腦梗死是具有較高的死亡率及致殘率疾病，在臨床中備受重視。腦缺血再灌注損傷是最主要的病理生理性改變，產(chǎn)生一些有害物質(zhì)會(huì)損傷神經(jīng)元，更有甚者會(huì)造成神經(jīng)細(xì)胞的壞死和凋亡[1-3]。腦缺血再灌注后發(fā)生的氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)進(jìn)一步加重了腦損傷。因此以腦缺血再灌注后炎癥反應(yīng)途徑為靶點(diǎn)的治療是一種正確可行的治療方案。毛蕊異黃酮具有明顯的植物雌激素特點(diǎn)，前期研究表明具有保護(hù)心腦血管和神經(jīng)細(xì)胞，舒張血管平滑肌，激素樣作用等[4]。為此，我們針對(duì)毛蕊異黃酮對(duì)腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用機(jī)制進(jìn)行以下研究。

1.材料與方法

1.1 材料

1.1.1 主要藥品、試劑及儀器 毛蕊異黃酮(中國(guó)藥品生物制品檢定所提供)。丙二醛(MDA)測(cè)定試劑盒(生產(chǎn)批號(hào)：20140117)，超氧化物歧化酶（SOD）測(cè)定試劑盒(生產(chǎn)批號(hào)：20140109)。全自動(dòng)生化儀。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SD大鼠（SPF級(jí)）40只，由桂林醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)：SCXK(桂) 2013-0006。喂養(yǎng)環(huán)境：桂林醫(yī)學(xué)院病理生理學(xué)實(shí)驗(yàn)室，分籠喂養(yǎng)，予以12h晝夜節(jié)律變化，室溫控制在(22±1)℃，予以自由飲水進(jìn)食。

1.2 方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組 將40只SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組(n=8)；缺血再灌注組(n=8)；毛蕊異黃酮組：毛蕊異黃酮5mg/kg組（n=8)，毛蕊異黃酮10mg/kg組（n=8），毛蕊異黃酮20mg/kg組（n=8)。毛蕊異黃酮組造模前14天予以腹腔注射給藥，1次/天，造模后缺血2小時(shí)再灌注24小時(shí)后斷頭取腦，各組未達(dá)到規(guī)定時(shí)間點(diǎn)死亡的SD大鼠要從實(shí)驗(yàn)中剔除。

1.2.2 大鼠腦缺血再灌注模型 動(dòng)物術(shù)前禁食12小時(shí)，自由飲水，采用線栓法[5]建立大鼠中動(dòng)脈腦缺血再灌注模型。

1.2.3 動(dòng)物神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分 將蘇醒后的動(dòng)物放回籠內(nèi)，使其自由飲食。按改良的Bederson[10]評(píng)估并記錄每組大鼠神經(jīng)功能缺損評(píng)分。

1.2.4 腦梗死率計(jì)算 以矢狀面切取2mm厚度的大腦切片，用磷酸鹽緩沖液配制成1%的TTC染色液，將腦組織切片置染色液中，取出腦組織切片，并用Image J軟件計(jì)算梗死面積。

1.2.5 腦組織中丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）活力測(cè)定 分別采用TBA法、比色法測(cè)定腦組織中過氧化產(chǎn)物丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶（SOD）活性，以上操作均嚴(yán)格按試劑盒說明書進(jìn)行。

2.結(jié)果

2.1 毛蕊異黃酮對(duì)大鼠缺血再灌注損傷后神經(jīng)評(píng)分的影響見表1。

缺血再灌注組與假手術(shù)組相比，意識(shí)障礙程度較重（P＜0.01），毛蕊異黃酮組與缺血再灌注組相比，意識(shí)障礙程度較輕（P＜0.01或P＜0.05）。

2.2 毛蕊異黃酮對(duì)大鼠腦梗死面積的影響 見表1。

缺血再灌注組與假手術(shù)組相比，大鼠腦梗死率較明顯（P＜0.01），與缺血再灌注組相比，毛蕊異黃酮組能顯著降低大鼠腦梗死率（P＜0.01或P＜0.05）。

表1

2.3 毛蕊異黃酮對(duì)大鼠腦組織中MDA含量及SOD活力的影響 見表2。

與假手術(shù)組相比，缺血再灌注組MDA含量增多明顯（P＜0.01），SOD活力顯著降低（P＜0.01）；與缺血再灌注組相比，毛蕊異黃酮組能顯著增加腦組織中SOD活性（P＜0.01或P＜0.05），并降低腦組織中MDA含量（P＜0.01或P＜0.05）。

表2

3.討論

腦缺血再灌注時(shí)，腦組織缺血、缺氧在得到緩解的同時(shí)產(chǎn)生的活性氧（ROS）與中風(fēng)相關(guān)的腦損傷中起主要作用。由于腦組織中抗氧化酶的活性較低，因此缺血再灌注損傷產(chǎn)生的活性氧（ROS）非常容易致使腦組織受到氧化損傷，從而導(dǎo)致腦脂質(zhì)、蛋白質(zhì)和DNA的氧化損傷，導(dǎo)致腦功能障礙和細(xì)胞死亡。因?yàn)榛钚匝酰≧OS）可攻擊神經(jīng)細(xì)胞的不飽和脂肪酸，引發(fā)的脂質(zhì)過氧化作用會(huì)產(chǎn)生大量的丙二醛（MDA），所以腦組織中的丙二醛（MDA）含量高低可間接反映神經(jīng)細(xì)胞脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的程度[6、7]。同時(shí)腦組織中的超氧化物歧化酶（SOD）是活性氧（ROS）的特殊底物誘導(dǎo)酶，能將腦缺血再灌注時(shí)產(chǎn)生的活性氧（ROS）歧化為H2O2和O2，所以腦組織中超氧化物歧化酶（SOD）活性的高低也可在一定程度上反映出機(jī)體氧自由基的清除能力[8]。

通過本研究發(fā)現(xiàn)，毛蕊異黃酮能夠顯著降低缺血再灌注損傷大鼠神經(jīng)功能評(píng)分、降低腦梗死率，并顯著抑制由缺血再灌注損傷誘導(dǎo)腦組織中的MDA含量的升高及增加SOD等抗氧化酶的活力。表明毛蕊異黃酮可通過降低氧自由基水平，負(fù)性調(diào)節(jié)腦組織氧化應(yīng)激反應(yīng)，從而改善大鼠腦缺血再灌注后的腦梗死率及神經(jīng)功能缺損癥狀。