陶雪慧，王安琪，王康宇，高文義

（長春中醫(yī)藥大學(xué)，長春 130117）

五味子膠囊是由五味子、人參、遠(yuǎn)志、甘草等6味中藥組成，具有提升免疫力、抗炎、促進(jìn)細(xì)胞代謝等功效[1-2]，其有效成分為總皂苷、總多糖等[3-4]。本實驗采用L9（34）正交試驗優(yōu)選提取條件，以藥材出膏率和總皂苷、總多糖含量作為篩選指標(biāo)[5-7]，確定6味中藥的最佳提取工藝，為后續(xù)藥理研究和機制研究等奠定基礎(chǔ)。

1 材料

1.1 設(shè)備 TU-1810紫外可見分光光度計（北京普析通用儀器有限公司），HWS-24型電熱恒溫水浴鍋（上海一恒科學(xué)儀器有限公司），DHG-9070A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海精宏試驗設(shè)備有限公司），TDL80-2B臺式離心機（上海安亭科學(xué)儀器廠）。

1.2 藥品與試劑 五味子、人參、遠(yuǎn)志、當(dāng)歸、甘草、菊花（均購于長春宏檢大藥房），均符合《中華人民共和國藥典》（2015年版）要求。人參皂苷Re標(biāo)準(zhǔn)品、葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品（上海源葉生物科技有限公司），甲醇、高氯酸（分析純， 北京化工廠），苯酚、香草醛（分析純，天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所）。

2 方法

2.1 測定藥材吸水率 五味子、人參、遠(yuǎn)志等按照處方比例共100 g，加300 mL水浸泡過夜，過濾，稱重，（n=3）。吸水率=（浸泡后藥材總重-浸泡前藥材總重）/浸泡前藥材總重[8]。

2.2 預(yù)試驗 按照處方比取五味子、人參、遠(yuǎn)志100 g，將藥材剪碎，加水800 mL，回流提取1 h，過濾。設(shè)計出提取次數(shù)、提取時間、料液比三因素[9]。

2.3 單因素考察 分別對提取次數(shù)、提取時間、料液比進(jìn)行單因素考察。每個試驗組均按處方比例取100 g，回流提取、過濾、濃縮濾液，將濃縮液干燥后得干膏，稱重，計算出膏率并測定總皂苷、總多糖含量[10]。

2.4 正交試驗 以料液比、提取時間、提取次數(shù)為試驗因素，各因素分別設(shè)計3個水平，見表1。采用 L（934）正交設(shè)計，熱回流提取，過濾，濾液濃縮，將濃縮液干燥后得干膏，將干膏稱重，計算出膏率并測定總皂苷、總多糖含量。

表 1 正交試驗因素水平

2.5 紫外檢測五味子膠囊浸膏中總皂苷、總多糖的含量

2.5.1 紫外檢測總皂苷 產(chǎn)品用水飽和正丁醇純化總皂苷[11-13]，以人參皂苷Re為參照，依照2015版《中華人民共和國藥典》人參總皂苷含量測定，測定總皂苷的含量。

2.5.2 紫外檢測總多糖 采用水提純沉的方法粗提多糖，精確稱量粗多糖0.01 g置于試管中，加1 mol/L的H2SO42 mL加熱水解2 h，冷卻，取1.0 mL置于10 mL試管中，加入5%苯酚溶液1.5 mL，搖勻，迅速加入濃硫酸7.5 mL，搖勻，用紫外在484 nm處測定吸光度值[14-15]。

3 結(jié)果

3.1 藥材吸水率 五味子等6味藥材吸水率為187%。

3.2 單因素考察結(jié)果 提取時間1 h、料液比1:8，隨著提取次數(shù)的增加出膏率增多，總多糖、總皂苷含量升高（n = 3）；提取次數(shù)2次、料液比1:8，隨著提取時間的增加出膏率增多，總多糖、總皂苷含量升高（n = 3）；提取次數(shù)2次、提取時間1 h，隨著料液比的增加出膏率增多，總多糖、總皂苷含量升高（n = 3）。

3.3 從出膏率看最佳工藝路線 見表2，方差分析見表3。

3.4 從總皂苷含量看最佳工藝路線

表2 正交試驗結(jié)果（出膏率）

表3 方差分析（出膏率）

結(jié)果表明，A3B2C1實驗，即提取次數(shù)3次，提取時間1 h，料液比為1:6，出膏率最多，且因素A有顯著性差異。

3.4.1 皂苷標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 以人參皂苷Re對照品濃度為橫坐標(biāo)，以不同濃度人參皂苷Re對照品在540 nm處的吸光度值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得回歸方程為：Y = 17.48 X + 0.062 8，r = 0.999 6。

3.4.2 紫外檢測五味子膠囊中總皂苷含量 見表4，方差分析見表5。

3.5 從總多糖含量看最佳工藝路線

3.5.1 多糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 以葡萄糖對照品濃度為橫坐標(biāo)，以不同濃度葡萄糖對照品溶液在254 nm處的吸光度值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線?；貧w方程為：

Y = 6.631 3 X+0.011 9，r = 0.999 5。

3.5.2 紫外檢測五味子膠囊中總多糖含量 見表6，方差分析見表7。

3.6 工藝驗證 對提取次數(shù)3次，提取時間1 h，料液比為1:6進(jìn)行工藝驗證，平行3次試驗，平均出膏率39.8 %，平均總皂苷含量0.71 %，平均總多糖含量10.6 %。

表4 正交試驗結(jié)果（總皂苷）

表5 方差分析（總皂苷）

結(jié)果表明，A3B2C1實驗，即提取次數(shù)3次，提取時間1 h，料液比為1:6，總皂苷含量最多，因素A有顯著性差異。

表6 正交試驗結(jié)果（總多糖）

表7 方差分析（總多糖）

結(jié)果表明，A3B2C1實驗，即提取次數(shù)3次，提取時間1 h，料液比為1:6，總多糖含量最多，因素A有顯著性差異。

4 小結(jié)

前期預(yù)試驗確定水煎工藝比較乙醇回流提取提升免疫力效果更佳。本文通過總多糖含量、總皂苷含量以及出膏率對實驗進(jìn)行篩選[16-17]，確定最佳提取工藝參數(shù)A3B2C1，即：提取次數(shù)3次，提取時間1 h，料液比為1:6，為后續(xù)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立奠定了基礎(chǔ)。