董文凱，韓金濤，王勝翔，柴洪偉，解銀萍，張 強，李旭坤

(1.山東省農藥科學研究院，山東省化學農藥重點實驗室，山東 濟南 250100；2. 農業(yè)部農藥檢定所，北京 100125)

1 前言

氟唑環(huán)菌胺ISO通用名：sedaxane，CAS號：874967-67-6，分子式：C18H19F2N3O，化學名稱：N-[2-[1,1’-聯(lián)環(huán)丙基]-2-基苯基]-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺，結構分為順式和反式結構，以反式結構為主[1-3]。氟唑環(huán)菌胺是一種琥珀酸脫氫酶抑制劑類殺菌劑。通過抑制病原菌線粒體呼吸電子傳遞鏈上的蛋白復合體Ⅱ(即琥珀酸脫氫酶)來影響病原菌線粒體呼吸電子傳遞系統(tǒng)，阻礙其能量的代謝，抑制病原菌的生長并致其死亡。適用于谷物、大豆、油菜、玉米、馬鈴薯、甘蔗和果蔬作物，用作種子處理，防治黑粉病、絲黑穗病、黑星病、灰霉病等病害[2]。目前已在多個國家和地區(qū)登記使用，商品名為Vibrance。

氟唑環(huán)菌胺可用氣相色譜法進行分析檢測[4]。本文采用高效液相色譜法，用外標法對有效成分進行定性定量分析。該方法操作快速、簡便、準確，分離效果好，準確度和精密度均能達到定量分析的要求。

2 試驗部分

2.1 試劑和溶液 乙腈(色譜純)；磷酸(分析純)；超純水(電阻率18.2 MΩ·cm，25℃)；氟唑環(huán)菌胺標準物質(質量分數99.5%)，由農業(yè)部農藥檢定所提供。氟唑環(huán)菌胺原藥由某公司提供。

2.2 試驗儀器 高效液相色譜儀：Agilent 1200，具有二極管陣列檢測器和自動進樣器；Agilent色譜工作站；Millipore超純水制備系統(tǒng)；色譜柱：250mm×4.6mm(id)不銹鋼柱，內裝ZORBAX SB-C185μm填充物；微孔濾膜：0.45 μm有機膜。

2.3 液相色譜操作條件 流動相：ψ(乙腈:0.1%磷酸溶液)=65:35；流量：1.5mL/min；柱溫：30℃；檢測波長：220nm；進樣體積：5μL；保留時間：氟唑環(huán)菌胺約4.2min(反式)和4.7min(順式)(圖1)。

圖1 氟唑環(huán)菌胺原藥高效液相色譜圖

2.4 測定步驟

2.4.1 標樣溶液的配制 準確稱取氟唑環(huán)菌胺標樣0.03 g(精確至0.000 2 g)置于100 mL容量瓶中，先加5 mL水再用乙腈稀釋至刻度，搖勻。

2.4.2 線性試驗系列溶液配制 在2.4.1標準溶液配制的條件下，稱取不同量的標準品，配置成一系列校正曲線溶液，使氟唑環(huán)菌胺的質量濃度分別為0.121 1、0.181 4、0.302 3、0.483 7、0.604 6 g/L用于制作校正曲線。

2.4.3 試樣溶液的配制 稱取試樣0.03g(精確至0.000 2 g)，置于100 mL容量瓶中，先加5 mL水再用乙腈稀釋至刻度，搖勻。

2.4.4 測定 在上述操作條件下，待儀器基線穩(wěn)定后，連續(xù)注入數針標樣溶液，直至相鄰2針標樣溶液的響應值相對變化<1.5%后，按照標樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標樣溶液的順序進行測定。

2.4.5 計算 將測得的2針試樣溶液以及試樣前后2針標樣溶液中氟唑環(huán)菌胺峰面積分別進行平均。試樣中氟唑環(huán)菌胺的質量分數ω(%)，按式(1)計算：

式中：

A1──標樣溶液中氟唑環(huán)菌胺峰面積的平均值；

A2──試樣溶液中氟唑環(huán)菌胺峰面積的平均值；

m1──標樣的質量，g；

m2──試樣的質量，g；

P──標樣中氟唑環(huán)菌胺的質量分數，%。

3 結果與討論

3.1 色譜條件的選擇 使用Agilent 1200高效液相色譜儀的光譜數據采集功能，獲得氟唑環(huán)菌胺的紫外吸收譜圖(圖2)。從圖中可見氟唑環(huán)菌胺在190～220nm處有較大的吸收，為避免溶劑干擾，且氟唑環(huán)菌胺有較強吸收峰，選擇220nm為檢測波長。

圖2 氟唑環(huán)菌胺紫外吸收譜圖

色譜柱選擇常規(guī)的ZORBAX SB-C18反相柱。依據氟唑環(huán)菌胺物化性質，用乙腈作為溶劑溶解樣品，并選擇乙腈和水作為流動相，為了得到更好的分離效果和峰形，在1 000 mL水中加入1 mL磷酸，將流動相按不同比例在色譜柱上進行試驗，最終確定流動相為ψ(乙腈:磷酸溶液)=65:35，在流速1.5mL/min時，有效成分與雜質能得到很好的分離，峰形對稱，基線平穩(wěn)，能在短時間能得到滿意的分析結果，提高了工作效率。

3.2 方法的線性相關性試驗 在2.3的色譜條件下，將2.4.2中系列線性試驗溶液依次注入5 μL，以氟唑環(huán)菌胺的質量濃度(x，g/L)為橫坐標，峰面積(y, mAU)為縱坐標，繪制校正曲線。試驗測得氟唑環(huán)菌胺線性方程為y=12 058.86x+10.46，相關系數為1.000 0。結果表明氟唑環(huán)菌胺在測試的質量濃度范圍內線性關系良好。

3.3 方法的精密度試驗 從同一產品中準確稱取5個試樣，在上述色譜操作條件下進行分析，計算氟唑環(huán)菌胺質量分數的標準偏差和變異系數。氟唑環(huán)菌胺標準偏差為0.06，變異系數為0.06%(表1)。

表1 分析方法的精密度試驗結果

3.4 方法的準確度試驗 從已知質量分數的氟唑環(huán)菌胺(98.51%)中稱取5個試樣，分別加入一定量的氟唑環(huán)菌胺標樣(99.5%)，在上述色譜操作條件下進行分析，測得氟唑環(huán)菌胺的平均回收率為100.08%(表2)。

表2 分析方法的準確度試驗結果

4 結論

本方法建立的分離并檢測氟唑環(huán)菌胺原藥中有效成分質量分數的高效液相色譜分析方法，線性關系良好，準確度和精密度較高，具有快速、簡便、分離效果好，精密度和準確度高的特點，適用于產品的質量控制。