李 兵
(遼寧省本溪市中醫(yī)院,遼寧 本溪 117000)
五味子[Schisandra chinensis(Turcz.)Bail][1]可分為北五味子和南五味子,主要分布在東北三省一帶。五味子由于其具有辛、甘、酸、苦、咸五種味道,所以其名為五味子,一般生長(zhǎng)在向陽的叢林和灌木旁。五味子是一種中國(guó)傳統(tǒng)的藥材,在唐宋史書中就已經(jīng)有所記載,其應(yīng)用歷史悠久,但目前關(guān)于五味子的化學(xué)成分的相關(guān)研究并不多。本次實(shí)驗(yàn)是為了確定五味子的化學(xué)成分,為五味子在醫(yī)學(xué)上的利用提供進(jìn)一步的理論依據(jù)。
表1 采用試管實(shí)驗(yàn)北五味子果實(shí)水提取液、石油醚提取液以及乙醇提取液實(shí)驗(yàn)結(jié)果
1.1 實(shí)驗(yàn)材料
1.1.1 實(shí)驗(yàn)藥材、試劑。藥材:本次實(shí)驗(yàn)的五味子是北五味子果實(shí),于2014年11月在吉林長(zhǎng)白山地區(qū)采摘。試劑:石油醚、甲醇、乙酸乙酯、95%酒精、甲酸、氯仿、硫酸銅、丙酮、氫氧化鈉、氨水、鎂粉、三氯化鐵、氯化汞、明膠、氯化鈉、冰醋酸、香草醛、硼酸、酒石酸鉀鈉、硝酸銀、碘化鉀和濃鹽酸。
1.1.2 實(shí)驗(yàn)主要儀器:DH6-9075A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海東麓儀器有限公司);RE-52A型蒸發(fā)機(jī)(上海亞榮生化儀器廠);電熱恒溫水浴鍋(上海一恒科學(xué)儀器有限公司);FA2004型電子天平(上海精密科學(xué)儀器股份有限公司);電子調(diào)溫爐(重慶銀河實(shí)驗(yàn)儀器有限公司);ZF-1型紫外儀(上海精密科學(xué)儀器股份有限公司)。1.2 試驗(yàn)方法
1.2.1 供試溶液的制備。制備冷水溶液:①將北五味子磨成粉末,經(jīng)過過篩和62 ℃高溫烘干[2]后取5.0 g將其置于200 mL的有50 mL蒸餾水的平底燒杯中;②浸泡20 h后過濾即得到冷水溶液。濾液可以用作對(duì)多肽、氨基酸等成分的檢測(cè)研究。
制備熱水提取液:將北五味子磨成粉末,經(jīng)過過篩和62 ℃高溫烘干后取5.0 g將其置于200 mL的有50 mL蒸餾水平底燒杯中,經(jīng)過5 h浸泡后在水浴鍋中以62 ℃高溫加熱回流1 h,立即過濾即得到熱水提取液。濾液可以用作對(duì)多糖、有機(jī)酸等成分的檢測(cè)研究。
制備中性乙醇:將北五味子磨成粉末,經(jīng)過過篩和62 ℃高溫烘干后取10.0 g將其置于250 mL的有95%乙醇平底燒瓶后水浴回流1 h,待其降溫后,加入蒸餾水稀釋使其含醇量達(dá)到70%后過濾到分液漏斗,使葉綠素等雜質(zhì)出去,用60 mL的石油醚萃取兩次,這樣就得到了下層的乙醇提取液[3]。乙醇溶液可以作為香豆素、黃酮、有機(jī)酸、內(nèi)酯等成分的檢測(cè)研究。
制備酸性乙醇提取液:將北五味子磨成粉末,經(jīng)過過篩和60 ℃高溫烘干后取10.0 g將其置于250 mL的有5%硫酸-乙醇溶液100 mL平底燒瓶后水浴回流1 h,用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀器除去濾液中過量的乙醇。此溶液可以作為對(duì)生物堿的檢測(cè)研究。
制備石油醚提取液:將北五味子磨成粉末,經(jīng)過過篩和60 ℃高溫烘干后取5.0 g將其置于200 mL的有50 mL蒸餾水的平底燒杯中并加入50 mL石油醚,在密封處3 h左右,表面皿上放置濾液,使石油醚揮發(fā)。揮發(fā)后留下的液體可以作為對(duì)揮發(fā)油、油脂等成分的檢測(cè)研究。1.2.2 化學(xué)成分研究。試管實(shí)驗(yàn)法:根據(jù)五味子的化學(xué)成分使用預(yù)試研究的常規(guī)方式選取供試提取液加入檢測(cè)劑,并對(duì)植物的化學(xué)成分進(jìn)行實(shí)驗(yàn),觀察現(xiàn)象。薄層色譜法:在薄層板上加入供試溶液,在特定展開劑中噴以相應(yīng)的顯色劑,觀察現(xiàn)象。
2.1 采用試管實(shí)驗(yàn)檢測(cè)北五味子果實(shí)水提取液、石油醚提取液和乙醇提取液:采用試管實(shí)驗(yàn)檢測(cè)北五味子果實(shí)水提取液和北五味子果實(shí)乙醇提取液的實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1。
通過表1可以看出,蛋白質(zhì)、有機(jī)酸、氨基酸的測(cè)試反應(yīng)現(xiàn)象明顯,而苷類、皂苷沒有現(xiàn)象,這表明北五味子不含有皂苷和苷類,含有大量的蛋白質(zhì)、有機(jī)酸和氨基酸;黃酮類物質(zhì)反應(yīng)現(xiàn)象不明顯,說明有微量黃酮類物質(zhì),內(nèi)酯、生物堿和香豆素反應(yīng)明顯,說明其中含有大量這三類物質(zhì)。
2.3 采用薄層層析法對(duì)北五味子石油醚、乙醇和水提取液進(jìn)行檢測(cè):采用薄層層析法對(duì)北五味子石油醚、乙醇和水提取液進(jìn)行檢測(cè),實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2。
表2 采用薄層層析北五味子果實(shí)實(shí)驗(yàn)結(jié)果
通過表2可以發(fā)現(xiàn),采用薄層層析方式檢測(cè)出北五味子中含有揮發(fā)油、內(nèi)酯、黃酮、有機(jī)酸、生物堿、蛋白質(zhì)和氨基酸,并且實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象顯著,與采取試管實(shí)驗(yàn)的結(jié)果相符,說明了此次實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性。
本次實(shí)驗(yàn)通過采用試管法和薄層層析法兩種方式對(duì)北五味子的化學(xué)成分進(jìn)行檢驗(yàn),保證了實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性,實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明北五味子中含有揮發(fā)油、有機(jī)酸、香豆素、蛋白質(zhì)等多種化學(xué)成分,確定了五味子的化學(xué)成分,為五味子在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用提供進(jìn)一步的發(fā)現(xiàn)、理論依據(jù)和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。