景贊，劉超，胡丹，劉曉碧

(樂山市食品藥品檢驗檢測中心，四川 樂山 614000)

花椒油是人們餐桌上常見的一種調(diào)味品，在以麻、辣、鮮、香為特色的川菜食材中舉足輕重。花椒油的生產(chǎn)工藝有浸提法、溶劑萃取法、超臨界二氧化碳萃取法和壓榨法，提取出的精油配以一定比例的食用油脂，得到成品花椒油[1,2]。BHA,BHT,TBHQ是廣泛用于油脂食品以防止油脂氧化的合成抗氧化劑，近幾年，食品添加劑超范圍、超限量使用問題依然嚴(yán)峻，食用油脂中抗氧化劑超標(biāo)現(xiàn)象也時有發(fā)生，因此開發(fā)簡便、有效的檢測方法顯得尤為必要。

目前檢測BHA,BHT,TBHQ的方法主要有液相色譜法、氣相色譜法、液質(zhì)聯(lián)用法，另外電化學(xué)法也有報道[3-7]。QuEChERS 法在農(nóng)獸藥殘留檢測技術(shù)方面應(yīng)用廣泛，具有很大的開發(fā)潛力[8-10]。本文將氣質(zhì)聯(lián)用質(zhì)譜技術(shù)可同時測定多個目標(biāo)化合物、具有高選擇性、高靈敏度及豐富的結(jié)構(gòu)信息與QuEChERS 法簡單、快捷、試劑消耗少等優(yōu)點(diǎn)相結(jié)合，開發(fā)了花椒油中BHA,BHT,TBHQ的氣質(zhì)聯(lián)用檢測技術(shù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

BHA標(biāo)準(zhǔn)品：含量99.4%；BHT標(biāo)準(zhǔn)品：含量99.9%；TBHQ標(biāo)準(zhǔn)品：含量99.4%，均購于Dr.Ehrenstorfer GmbH；正己烷、乙腈、丙酮：均為色譜純。

1.2 儀器與設(shè)備

TQ-8040氣質(zhì)聯(lián)用儀 島津(中國)有限公司；EV331旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 萊伯泰科儀器股份有限公司。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)工作溶液

準(zhǔn)確稱取BHA，BHT，TBHQ標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)各10 mg至100 mL容量瓶中，用丙酮定容至刻度，配制成濃度為100 μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，混勻后置于冰箱中冷藏備用。使用時需要恢復(fù)到室溫后，根據(jù)實際配制成不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液。

以多反應(yīng)動態(tài)監(jiān)測模式(以下簡稱MRM)測定標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液，以工作液濃度為橫坐標(biāo)，對應(yīng)的響應(yīng)值為縱坐標(biāo)，擬合一元線性回歸方程。

1.4 樣品制備方法

稱取試樣0.5 g置于50 mL比色管中，加入5 mL乙腈飽和的正己烷，搖勻溶解試樣，加入10 mL正己烷飽和的乙腈，振搖3 min，充分靜置后，取上層溶液2 mL轉(zhuǎn)移至玻璃試管中，加入100 mg C18粉和100 mg PSA粉，漩渦3 min。取1 mL上層溶液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至近干，加入1 mL丙酮，12000 r/min高速冷凍離心后取上清液上機(jī)分析。

1.5 檢測條件

進(jìn)樣口條件設(shè)置：進(jìn)樣模式：不分流，高壓進(jìn)樣，溫度250 ℃；毛細(xì)管柱：Rxi-5Sil MS，購于Restek公司，30 m×0.25 mm×0.25 μm；色譜柱升溫程序：初始溫度70 ℃保持2 min，以10 ℃/min的升溫速率升至280 ℃，保持8 min；恒線速度模式：40 cm；進(jìn)樣體積：1 μL；載氣：氦氣，純度99.999%。

溶劑切割時間：4 min；GC-MS接口溫度：280 ℃；離子源溫度：230 ℃；電離方式：EI，電離能量70 eV。

2 結(jié)果與分析

2.1 試樣提取及監(jiān)測離子的優(yōu)化

樣品提取液參考了國標(biāo)方法和現(xiàn)有文獻(xiàn)，選用了正己烷飽和的乙腈，減少處理過程中對非極性成分的提取。C18粉和PSA 粉的加入能在很大程度上吸附油脂中的有機(jī)酸、親脂性色素、維生素等干擾物質(zhì)，凈化提取溶液同時降低了對目標(biāo)物的干擾。雖然經(jīng)過了上述的凈化處理，但在14.397 min附近仍存在干擾峰，氣相色譜圖譜見圖1，通過優(yōu)化現(xiàn)有條件后仍不能達(dá)到完全分離，進(jìn)而選擇了氣質(zhì)聯(lián)用技術(shù)，通過監(jiān)測目標(biāo)離子定性定量，可以大大減少其他成分的干擾，3種抗氧化劑在70 eV下的特征離子質(zhì)譜圖見圖2～圖4，根據(jù)特征離子建立MRM方法，分別以165>137，205>57，151>123作為3種目標(biāo)物的定量離子對，建立的方法在實際應(yīng)用中目標(biāo)物附近未見干擾物，見圖5，定性定量更為準(zhǔn)確。目標(biāo)物保留時間及MRM參數(shù)見表1。

圖1 花椒油提取液的氣相色譜圖Fig.1 The gas chromatogram ofZanthoxylum bungeanumoil extract

圖2 BHA碎片離子質(zhì)譜圖Fig.2 The fragment ions of BHA

圖3 BHT碎片離子質(zhì)譜圖Fig.3 The fragment ions of BHT

圖4 TBHQ碎片離子質(zhì)譜圖Fig.4 The fragment ions of TBHQ

圖5 抗氧化劑的總離子流色譜圖Fig.5 The total ion chromatogram of antioxidants

目標(biāo)物保留時間(min)定量離子對(m/z)CE定性離子對(m/z)CEBHA12.186165>13710180>16510BHT12.452205>5712205>17712TBHQ12.953151>1238166>15110

2.2 線性關(guān)系和檢出限

將濃度與對應(yīng)的響應(yīng)值進(jìn)行一元線性回歸方程擬合，在0～5 μg/mL的濃度范圍內(nèi)，3種物質(zhì)的相關(guān)系數(shù)分別為0.9989，0.9996，0.9993,線性關(guān)系良好。檢出限計算方法為3倍的S/N，結(jié)果見表2。

表2 線性范圍和檢出限Table 2 Linear range and detection limit of antioxidants

目前檢測油脂中抗氧化劑的國標(biāo)方法有GB 5009.32—2016，SN/T 1050—2014和SN/T 3849—2014，各方法主要采用液相色譜法、氣相色譜法、氣質(zhì)聯(lián)用法分析BHA，BHT和TBHQ，本方法由于使用了質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，在方法檢出限方面更有優(yōu)勢。

2.3 加標(biāo)回收率

稱取若干份不含待測成分的空白樣品，加入BHA，BHT，TBHQ標(biāo)準(zhǔn)溶液，使其在油脂中的濃度分別達(dá)到0.1，0.2，0.4 g/kg ，每個濃度水平設(shè)定6個平行，按照1.4樣品提取方法制備，測定并計算方法的回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差，結(jié)果見表3，加標(biāo)樣品色譜圖見圖6。

表3 加標(biāo)回收率及其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(n=6)Table 3 Recoveries and relative standard deviation of samples (n=6)

圖6 加標(biāo)樣品多反應(yīng)監(jiān)測色譜圖Fig.6 MRM chromatogram of spiked samples

由表3可知，3種抗氧化劑在低、中、高3個濃度下回收率均能達(dá)到80%以上，方法的準(zhǔn)確性滿足測定要求。

2.4 精密度

為了考察方法的精密度，將1.0 μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，測定數(shù)據(jù)見表4。

表4 精密度(n=6)Table 4 The precision of samples (n=6)

由表4可知，該方法測定的3種抗氧化劑精密度范圍為0.8%～1.4%，精密度滿足要求。

2.5 標(biāo)準(zhǔn)溶液的穩(wěn)定性

利用該方法對標(biāo)準(zhǔn)溶液的穩(wěn)定性進(jìn)行了考察，將分別在室溫下放置2，4，8，12，16，20，24 h后的溶液進(jìn)行測定，結(jié)果見表 5。

表5 標(biāo)準(zhǔn)溶液穩(wěn)定性Table 5 The stability of standard solution

由表5可知，在該方法下3種抗氧化劑精密度范圍為1.4%～3.1%，穩(wěn)定性滿足要求。

3 討論

本文采用乙腈提取并用QuEChERS方法凈化，結(jié)合氣質(zhì)聯(lián)用的高選擇性，建立了檢測3種抗氧化劑的方法，結(jié)果表明該方法的各方面均滿足要求，相比傳統(tǒng)方法可有效去除干擾物質(zhì)，簡化了處理過程，節(jié)省了溶劑的消耗，降低了對人和環(huán)境的污染，提高了工作效率，適用于花椒油中抗氧化劑的檢測。