李金琴，童 瑾，秦婭藍(lán)

(1.重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院 呼吸內(nèi)科， 重慶 400010； 2.宜賓市第二人民醫(yī)院 呼吸內(nèi)科，四川 宜賓 644000)

阿奇霉素除抗菌活性以外，其免疫調(diào)節(jié)及抗炎作用亦被逐漸認(rèn)可。在其臨床運(yùn)用日益廣泛的同時，該藥的不良反應(yīng)亦備受關(guān)注，最嚴(yán)重者可發(fā)生QT間期延長并尖端扭轉(zhuǎn)型室性心動過速[1]。霧化給藥可直接作用于靶器官，降低全身不良反應(yīng)，但國內(nèi)外鮮有針對該藥霧化治療的報道。本研究旨在探討其霧化用藥的安全性和有效性，為其進(jìn)一步臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥品與試劑：阿奇霉素針劑(東北制藥廠)；阿奇霉素原料藥(湖北黃石世星藥業(yè)有限公司)；BCA蛋白分析試劑盒(江蘇南京凱基生物公司)。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)對象：SPF級BABL/c 8周齡雌鼠20～23 g，60只[重慶醫(yī)科大學(xué)動物中心，合格證書：SYXK(渝)2012-0001]。

1.2 方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)小鼠處理：用0.9%氯化鈉溶液與阿奇霉素粉針配制劑量分別為10、20、50和100 mg/kg霧化液；測得各溶液pH在6.79～6.92之間。將小鼠隨機(jī)分成6組，放入不完全封閉的霧化箱；空白對照組不予以霧化處理， 實(shí)驗(yàn)組使用空氣壓縮霧化器分別給予0.9%氯化鈉溶液和各劑量阿奇霉素溶液霧化。

1.2.2 樣品收集：霧化5 d后，分別取肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid，BALF)、采眼球血(存放于-30 ℃)和取肺組織(存放于10%甲醛溶液)。

1.2.3 BCA法測BALF中白蛋白含量：全自動生化分析儀測其中乳酸脫氫酶(lactic dehydrogenase，LDH)活性。

1.2.4 HE染色：光鏡下觀察肺組織病理改變。

1.2.5 高效液相色譜法測BALF及血中阿奇霉素濃度：通過尿素稀釋法計算肺上皮黏液層(lung epithelial mucus layer,ELF)中阿奇霉素濃度[2](圖1，2)。

2 結(jié)果

2.1 阿奇霉素霧化溶液刺激性的研究：阿奇霉素組100 mg/kg組的BALF中的白蛋白含量及LDH明顯升高(P<0.05)(表1)。

2.2 阿奇霉素溶液霧化對呼吸道的病理影響：空白組、0.9% 氯化鈉溶液組、10～50 mg/kg阿奇霉素組肺臟組織結(jié)構(gòu)完整，無炎性反應(yīng)表現(xiàn)。100 mg/kg阿奇霉素組中肺間質(zhì)及血管周圍見少許中性粒細(xì)胞浸潤，肺泡壁輕度斷裂塌陷(圖3)。

A.standard; B.blank serum; C.serum+ standard; D.serum sample圖1 血漿阿奇霉素色譜圖Fig 1 Chromatograms of serum azithromycin

A.standard; B.blank BALF; C.BALF+standard; D.BALF sample圖2 BALF阿奇霉素色譜圖Fig 2 Chromatograms of BALF azithromycin

groupalbumin(μg/μL)LDH(U/L)blank 0.394±0.083 6.600±2.702normal saline 0.440±0.115 7.400±3.20910 mg/kg Az 0.510±0.208 8.200±2.58820 mg/kg Az 0.544±0.178 8.600±2.70450 mg/kg Az 0.656±0.241 9.800±3.493100 mg/kg Az 0.732±0.228* 11.204±4.231*

*P<0.05 compared with the blank group; Az.azithromycin

2.3 ELF及血中藥物濃度比較：小鼠ELF中的藥物濃度大于相應(yīng)霧化組的血藥濃度，前者大于肺炎支原體及嗜肺軍團(tuán)菌的最低抑菌濃度(minimal inhibitory concentration,MIC)(表2)。

3 討論

近年來阿奇霉素全身不良反應(yīng)隨應(yīng)用的廣泛而日益突出。霧化用藥可降低全身用藥的不良反應(yīng)，但其耐受性和可行性是實(shí)施的基礎(chǔ)。

從小鼠BALF中白蛋白含量和LDH活性及肺組織HE

表2 各組霧化后ELF及血中阿奇霉素的濃度

Az.azithromycin

染色的病理表現(xiàn)看， 小鼠能耐受50 mg/kg以下劑量， 而100 mg/kg劑量霧化時可產(chǎn)生局部非特異性炎性反應(yīng)，氣道肺泡上皮細(xì)胞有一定程度損傷，肺泡間質(zhì)僅見輕度炎性細(xì)胞浸潤。

10 mg/kg阿奇霉素組 ELF中藥物濃度明顯超過其對肺炎支原體及嗜肺軍團(tuán)菌的MIC(分別為0.125～0.5 μg/mL和0.08～0.5 μg/mL)[3]，完全達(dá)到有效的抗菌作用；當(dāng)藥物濃度超過防耐藥濃度時，可減少低藥物濃度誘發(fā)的耐藥突變株選擇性富集擴(kuò)增，說明較高的ELF藥物濃度能更有效防止耐藥菌的產(chǎn)生。

綜上所述，小鼠對10～50 mg/kg阿奇霉素溶液霧化具有良好的耐受性；氣道局部濃度遠(yuǎn)高于血藥濃度，大于該藥的局部MIC，具有有效性。