努爾拜合提·努爾旦，張 婷，劉 帥，丁夢(mèng)玥，靳紅娟，陳雅璐，張 悅，谷文喜*

（1.新疆畜牧科學(xué)院獸醫(yī)研究所，烏魯木齊 830000；2.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院，烏魯木齊 830052）

蟲媒病毒(arbovirus)是指由攜帶病毒的節(jié)肢動(dòng)物通過叮咬等方式將病毒傳播給脊椎動(dòng)物，引起動(dòng)物感染的一類病毒。其特點(diǎn)是病毒在節(jié)肢動(dòng)物體內(nèi)繁殖，但節(jié)肢動(dòng)物本身不發(fā)病[1]。2000年，在國際蟲媒病毒中心登記的蟲媒病毒已有537種，其中130余種可引起人、畜疾病[2]。

藍(lán)舌病、牛流行熱和鹿流行性出血熱是三種重要的嚴(yán)重危害牛羊健康的蟲媒病毒病，其傳播媒介主要為是庫蠓（Culicoides）,是出入境動(dòng)物檢驗(yàn)檢疫中重要的檢疫對(duì)象。藍(lán)舌病是由藍(lán)舌病病毒引起的一種非接觸性傳染病。世界衛(wèi)生組織（OIE）將其歸為多種動(dòng)物共患疫病，中國將其列為一類疫病[3]。綿羊?yàn)樵摬∫赘袆?dòng)物，臨床癥狀主要表現(xiàn)為發(fā)熱、口腔黏膜和舌發(fā)紺，、懷孕母畜流產(chǎn)等。山羊、牛和其他反芻動(dòng)物一般為隱性感染，無明顯癥狀。該病病程一般為6～12 d，發(fā)病率為30%～40%，病死率為20%～30%，有時(shí)高達(dá)90%，多死于肺炎或胃腸炎等并發(fā)癥[4]。目前，BT有26個(gè)血清型，且型與型之間交叉免疫性差[5]。迄今尚未發(fā)現(xiàn)藍(lán)舌病對(duì)人類有傳染性[6]。

牛流行熱，又稱為三日熱、暫時(shí)熱、牛流行性熱或牛登革熱，是由彈狀病毒科的流行熱病毒引起的牛的一種非接觸性傳染病[7]。奶牛、黃牛、水牛均可感染，但以奶牛最為易感[8]。發(fā)病癥狀為突發(fā)高熱，體溫高達(dá)41℃～42℃，流淚、流涎、流鼻涕及呼吸困難，消化道和呼吸道嚴(yán)重的卡他性炎，四肢和關(guān)節(jié)疼痛引起的跛行等。該病傳播迅速，流行面廣，且為良性經(jīng)過，輕癥病牛2～3日即可恢復(fù)正常。該病發(fā)病率高，死亡率低，在沒有繼發(fā)感染的情況下，死亡率為1%～3%。但引起奶牛大幅度降奶，有些孕牛發(fā)生流產(chǎn)及部分病牛常因癱瘓而淘汰，會(huì)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失[9]。

鹿流行性出血熱是由呼腸孤病毒環(huán)狀病毒屬鹿流行性出血熱病毒引起的，以庫蠓為主要傳播媒介的非接觸性傳染病。引起鹿（尤其是白尾鹿）、大角羚羊、牛、羊的等多種馴養(yǎng)和野生反芻動(dòng)物體溫升高，呼吸困難，粘膜和漿膜面出血，有時(shí)引起孕畜流產(chǎn)和常處于昏迷狀態(tài)下死亡為特征的嚴(yán)重致死性傳染病。EHDV為雙股RNA病毒，目前有12個(gè)血清型[10]。

1 材料與方法

1.1 血清來源

2014-2015年間采集哈密地區(qū)牛血清31份、羊血清10份，昌吉地區(qū)牛血清20份，伊犁地區(qū)牛血清20份，和田地區(qū)牛血清25份，以上樣品均為隨機(jī)篩選，共計(jì)106份血清樣品。

1.2 藍(lán)舌病、牛流行熱和鹿流行性出血熱血清抗體的檢查

1.2.1 檢測(cè)試劑盒

藍(lán)舌病C-ELISA試劑盒（云南省熱帶亞熱帶動(dòng)物病毒重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室），鹿流行性出血熱C-ELISA試劑盒（云南省熱帶亞熱帶動(dòng)物病毒重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室），牛流行熱病毒間接ELISA試劑盒（中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所）。

1.2.2 檢測(cè)方法

1.2.2.1 BTV C-ELISA檢測(cè) 按照BTV C-ELISA試劑盒說明書操作:取出4℃保存的BTV抗原包被ELISA板，按照樣品數(shù)量進(jìn)行編號(hào)。按照說明書要求把樣品和陰陽性對(duì)照加入到相應(yīng)的孔中，配制檢測(cè)競(jìng)爭(zhēng)液，并加到ELISA板中，在37℃孵育1 h。取出板，倒掉里面的液體，甩干，加酶標(biāo)二抗，混勻，在37℃孵育30 min。取出，洗板，加TMB顯色液，放入37℃避光反應(yīng)10（±2）min，顯色充分后加顯色終止液終止反應(yīng)。 酶標(biāo)儀測(cè)定 OD450nm 值，每孔計(jì)算抑制率（PI），PI＞40%為陽性，PI＜30%為陰性，30%＜PI＜40%為弱陽性，統(tǒng)計(jì)最后結(jié)果。

1.2.2.2 BEFV I-ELISA檢測(cè) 按照BEFV間接ELISA抗體檢測(cè)試劑盒說明書操作:取出4℃保存的BEFV抗原包被ELISA板，按照樣品數(shù)量進(jìn)行編號(hào)。按照說明書要求把樣品和陰陽性對(duì)照加入到相應(yīng)的孔中，混勻，37℃孵育30 min；洗板，加入酶標(biāo)二抗，37℃孵育30 min；洗板，加入TMB顯色液，放入37℃避光反應(yīng)10 min，顯色充分后加顯色終止液終止反應(yīng)。酶標(biāo)儀測(cè)定OD450nm值，樣品OD值≥0.3為陽性，樣品OD值≤0.22為陰性，樣品OD值在0.22～0.3之間為可疑。

1.2.2.3 EHDV C-ELISA檢測(cè) 按照EHDV C-ELISA試劑盒說明書操作:取出4℃保存的EHDV抗原包被ELISA板，按照樣品數(shù)量進(jìn)行編號(hào)。按照說明書要求把樣品、陽性、弱陽性和陰性對(duì)照加入到相應(yīng)的孔中，37℃孵育30 min，然后加入用稀釋液稀釋100倍的競(jìng)爭(zhēng)性抗體，混勻，37℃孵育30 min，取出板，倒掉里面的液體，甩干，加酶標(biāo)二抗，37℃孵育30 min，取出，洗板，加TMB顯色液，放入37℃避光反應(yīng)15（±2）min，顯色充分后加顯色終止液終止反應(yīng)。酶標(biāo)儀測(cè)定OD450nm值，每孔計(jì)算抑制率（PI），其中弱陽性上限值=1.1×弱陽性對(duì)照抑制率，弱陽性下限值=0.9×弱陽性對(duì)照抑制率，若PI≥弱陽性上限值則為陽性，PI≤弱陽性下限值則為陰性，弱陽性下限值＜PI＜弱陽性上限值，暫定為可疑，重復(fù)試驗(yàn)，若結(jié)果相同，則該樣品為弱陽性。統(tǒng)計(jì)最后結(jié)果。

2 結(jié)果與分析

BTV C-ELISA檢測(cè)結(jié)果：哈密地區(qū)牛感染率為12.90%，羊感染率為60%；昌吉、伊犁和和田地區(qū)的牛血清樣本中沒有檢測(cè)到BTV抗體。

BEFV I-ELISA檢測(cè)結(jié)果：哈密、伊犁和和田地區(qū)牛血清樣本陽性率均為100%；昌吉地區(qū)牛血清樣本陽性率為55%。

EHDV C-ELISA檢測(cè)結(jié)果：哈密地區(qū)羊血清樣本陽性率為20%，其他地區(qū)牛血清樣本均沒有檢測(cè)到EHDV抗體。

其中哈密地區(qū)的牛血清樣本中同時(shí)檢出BEFV抗體和BTV抗體的為12.9%，羊血清樣本中同時(shí)檢出BTV抗體和EHDV抗體的為20%。以上統(tǒng)計(jì)結(jié)果見表1。

表1 新疆部分地區(qū)重要牛羊蟲媒病的感染情況

3 討 論

藍(lán)舌病、牛流行熱和鹿流行性出血熱是三種對(duì)牛羊危害嚴(yán)重的蟲媒病，在新疆，對(duì)它們的關(guān)注和研究較少，其危害未知，但是它們?cè)趪H上一些國家和地區(qū)的流行則造成了重大的經(jīng)濟(jì)損失。以藍(lán)舌病為例，據(jù)估計(jì)，該病每年在全球?qū)е碌慕?jīng)濟(jì)損失高達(dá)30億美元。新疆是我國畜牧業(yè)大省，有著數(shù)量巨大的牛羊養(yǎng)殖量，因此為了確保我區(qū)畜牧業(yè)的健康發(fā)展，有必要對(duì)上述蟲媒病毒病進(jìn)行調(diào)查研究。

本研究表明，哈密地區(qū)有這三種蟲媒病毒病的同時(shí)流行，而牛流行熱的檢測(cè)結(jié)果在四個(gè)地區(qū)都為陽性，且陽性率高達(dá)90.6%，說明在新疆已有較嚴(yán)重的蟲媒病毒病的流行。這種情況應(yīng)該引起獸醫(yī)防疫部門和動(dòng)物養(yǎng)殖人員的高度重視。

在哈密地區(qū)的牛羊中都發(fā)現(xiàn)有兩種蟲媒病毒病同時(shí)感染的情況，這是因?yàn)樯鲜鱿x媒病毒病的宿主和傳播媒介相同或類似，均由庫蠓，蚊等吸血昆蟲攜帶并傳播，在其叮咬動(dòng)物的時(shí)候，就將這些病毒傳播給動(dòng)物導(dǎo)致其發(fā)病。多種蟲媒病毒病的同時(shí)流行，才能導(dǎo)致在同一動(dòng)物體內(nèi)兩種或兩種以上的病毒抗體同時(shí)存在。說明在新疆有多種蟲媒病毒病同時(shí)流行的情況發(fā)生。

由于牛流行熱僅感染牛，所以本研究主要選擇牛的血清樣本，只在哈密地區(qū)抽檢了羊的血清樣本，根據(jù)本項(xiàng)目組的前期調(diào)查，在新疆地區(qū)BTV主要感染的動(dòng)物是山羊，其次是綿羊，而牛的感染率較低[11，12]，這與本次調(diào)查的結(jié)果相一致，同時(shí)也解釋了為什么在本次調(diào)查中昌吉、伊犁和和田三地區(qū)BTV陽性率為零，可能與采集的都是牛血清有關(guān)。本次調(diào)查采集的樣本數(shù)量較少，真實(shí)的蟲媒病毒病感染情況可能更加嚴(yán)重。蟲媒病毒病的流行和傳播與蟲媒的活動(dòng)密切相關(guān)，隨著全球氣候變暖，吸血昆蟲的活動(dòng)范圍正逐漸擴(kuò)大，相應(yīng)的蟲媒病毒病也有明顯擴(kuò)大蔓延的趨勢(shì)。新疆做為我國“一帶一路”外達(dá)內(nèi)聯(lián)的重要樞紐，有必要摸清我區(qū)現(xiàn)存蟲媒病毒病的流行狀況，制定相應(yīng)的防控策略，同時(shí)要加強(qiáng)我區(qū)動(dòng)物貿(mào)易中的檢驗(yàn)檢疫工作，切斷蟲媒病毒病流入我區(qū)的可能途徑。