易 忠 ，趙華林 ，林奕全 ，王運(yùn)俅 ，杜 麗 ，儲(chǔ)岳峰 ，朱建明 *

（1.新疆畜牧科學(xué)院獸醫(yī)研究所，烏魯木齊 830000；2.三亞雪古麗現(xiàn)代生態(tài)農(nóng)業(yè)綜合開(kāi)發(fā)有限公司，海南 三亞 572000 3.海南大學(xué)，?？?570000；4.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所，蘭州 730046）

布魯氏桿菌病（brucellosis）由布魯氏菌屬(Brucella)細(xì)菌所致以侵害生殖系統(tǒng)為特征的人畜共患地方流行性傳染病，羊?yàn)橹饕獋魅驹?，皮毛、肉?lèi)加工、擠奶等可經(jīng)皮膚黏膜受染，進(jìn)食病畜肉、奶及奶制品可經(jīng)消化道傳染[1,2]。 口蹄疫（Foot-and-mouth disease，F(xiàn)MD）是由口蹄疫病毒（Foot-and-mouth disease virus，F(xiàn)MDV）引起的世界性重大動(dòng)物疫病，嚴(yán)重制約著全球畜牧業(yè)的發(fā)展[3]。畜牧業(yè)是海南熱帶高效農(nóng)業(yè)的重要內(nèi)容之一，“無(wú)疫區(qū)”不僅是海南畜牧業(yè)發(fā)展的品牌，也是海南國(guó)際旅游島建設(shè)和公共衛(wèi)生安全的基礎(chǔ)性工程。近年來(lái)，在農(nóng)業(yè)部關(guān)于“促進(jìn)草食畜牧業(yè)加快發(fā)展的指導(dǎo)意見(jiàn)”的引導(dǎo)下，海南農(nóng)民養(yǎng)牛的積極性不斷高漲。保證該產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展不僅關(guān)系到畜產(chǎn)品的衛(wèi)生與安全，而且影響到全省旅游業(yè)的發(fā)展和國(guó)家“海南國(guó)際旅游島發(fā)展戰(zhàn)略”的順利實(shí)施。因此，持續(xù)性確保海南牛羊口蹄疫及布魯氏菌病無(wú)疫作用重大，意義深遠(yuǎn)[4]?；谏鲜瞿繕?biāo)，我們對(duì)三亞雪古麗的牛羊及從云南引進(jìn)的羊進(jìn)行了口蹄疫及布魯氏菌病自我監(jiān)測(cè)與風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估。

1 材料與方法

1.1 檢測(cè)樣品

2018年1月2日至31日采集三亞雪古麗奶牛場(chǎng)牛血液194份、OP液 21份；三亞雪古麗種羊場(chǎng)羊血液596份、OP液25份，昌江雪古麗羊場(chǎng)羊血液452份、OP液 25份，雪古麗引進(jìn)云南羊血液190份、OP液7份，共計(jì)血液樣品1 432份、OP液78份(注：牛血液有8份未分離出血清）。

1.2 檢測(cè)方法及試劑盒

參照布魯氏菌病診斷技術(shù)規(guī)程用虎紅平板方法檢測(cè)羊布魯氏菌病[5]?；⒓t平板凝集試驗(yàn)抗原（敏感型）、布魯氏菌試管凝集抗原及布魯氏菌陽(yáng)性對(duì)照血清（羊種）購(gòu)自英國(guó)OIE參考實(shí)驗(yàn)室。

口蹄疫免疫抗體檢測(cè)使用液相阻斷ELISA方法，口蹄疫病原學(xué)檢測(cè)采用多重RT-PCR（Multi-RTPCR）方法，試劑盒均購(gòu)自中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所。

2 結(jié)果與分析

2.1 三亞雪古麗羊血清樣品的布魯氏菌病檢測(cè)情況

2018年三亞雪古麗種羊場(chǎng)、昌江雪古麗羊場(chǎng)和雪古麗云南引進(jìn)羊血清樣品共計(jì)1 238頭份使用虎紅平板方法用于布魯氏菌病監(jiān)測(cè)，檢測(cè)結(jié)果全部陰性（—）。結(jié)果表明雪古麗的羊場(chǎng)目前不存在布魯氏菌感染情況。

2.2 三亞雪古麗牛羊樣品口蹄疫檢測(cè)情況

為了持續(xù)監(jiān)測(cè)本單位所有牛羊口蹄疫免疫情況及攜帶或感染口蹄疫情況，對(duì)采集的牛羊樣品進(jìn)行了口蹄疫免疫抗體及病原學(xué)檢測(cè)，具體如下表1。

表1 牛羊樣品口蹄疫檢測(cè)情況

2.3 牛羊A、O型口蹄疫抗體免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

采集樣品的口蹄疫A型 和O型免疫抗體檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表2、表3。

表2 牛口蹄疫A型免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

從表2及表3表中可見(jiàn)，雪古麗的牛口蹄疫群體免疫水平（牛O型 ）達(dá)到國(guó)家重大動(dòng)物疫病規(guī)定的免疫合格率（70%）的標(biāo)準(zhǔn)，O型抗體免疫合格率72%；A型抗體免疫合格率47.4%，羊O型免疫合格率53.55%，免疫水平未達(dá)到農(nóng)業(yè)部規(guī)定的免疫合格率的標(biāo)準(zhǔn)。

表3 牛羊口蹄疫O型免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

2.4 口蹄疫病原學(xué)樣品監(jiān)測(cè)結(jié)果

隨機(jī)抽取牛羊OP液樣品使用多重RT-PCR進(jìn)行口蹄疫病原學(xué)檢測(cè)，結(jié)果顯示無(wú)病原學(xué)陽(yáng)性樣品，樣品RT-PCR結(jié)果見(jiàn)圖1、圖2、圖3和圖4。

圖1 三亞雪古麗牛場(chǎng)樣品口蹄疫病原學(xué)檢測(cè)RT-PCR結(jié)果

圖2 三亞雪古麗羊場(chǎng)樣品口蹄疫病原學(xué)檢測(cè)RT-PCR結(jié)果

圖3 昌江雪古麗樣品口蹄疫病原學(xué)檢測(cè)RT-PCR結(jié)果

圖4 引進(jìn)羊（云南）樣品口蹄疫病原學(xué)檢測(cè)RT-PCR結(jié)果

隨機(jī)抽取樣品的口蹄疫病原學(xué)檢測(cè)結(jié)果表明，目前雪古麗的牛羊及引進(jìn)羊只未被口蹄疫病毒感染。

3 討 論

口蹄疫是國(guó)家強(qiáng)制免疫的重大動(dòng)物疫病，海南是口蹄疫無(wú)疫區(qū)，持續(xù)性確保海南牛羊口蹄疫無(wú)疫作用重大，意義深遠(yuǎn)[3,6]。

布魯氏菌病在我國(guó)主要流行羊種，從臨床看，羊種的致病力最強(qiáng)，感染后癥狀較重，可引起暴發(fā)流行；布魯菌在自然環(huán)境中生命力較強(qiáng)，故可通過(guò)多種途徑傳播[7]。在病畜的分泌物、排泄物及在畜的臟器中傳染源存在[8]。檢出的病畜，及時(shí)隔離治療，必要時(shí)宰殺之，對(duì)受威脅動(dòng)物重要措施是進(jìn)行菌苗免疫。病畜的流產(chǎn)物及死畜必需深埋。防止病畜或患者的排泄物污染水源。對(duì)與牲畜或畜產(chǎn)品接觸密切者，要進(jìn)行宣傳教育，做好個(gè)人防護(hù)。

2017年海南三亞雪古麗曾進(jìn)行過(guò)口蹄疫病原及免疫抗體的自我監(jiān)測(cè)與風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，檢測(cè)結(jié)果顯示本場(chǎng)牛O型免疫抗體合格率剛剛達(dá)到農(nóng)業(yè)部規(guī)定的免疫合格率（70%）的標(biāo)準(zhǔn)，而羊的群體免疫狀況較差，免疫抗體合格率遠(yuǎn)低于農(nóng)業(yè)部規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)[9]。

2018年采集的海南雪古麗牛羊血清樣品及OP液樣品，再次用于羊布魯氏菌、口蹄疫病原及免疫抗體的自我監(jiān)測(cè)與風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估。虎紅平板檢測(cè)布魯氏菌病，結(jié)果表明雪古麗的羊場(chǎng)目前不存在布魯氏菌感染情況，但應(yīng)每年進(jìn)行一次監(jiān)測(cè)，確保牛羊始終處于布魯氏菌病凈化狀態(tài)[10]。本次監(jiān)測(cè)中雪古麗的牛羊中僅牛O型口蹄疫群體免疫水平達(dá)到國(guó)家重大動(dòng)物疫病規(guī)定的免疫合格率（70%）的標(biāo)準(zhǔn)，即O型抗體免疫合格的有126頭份，合格率72%；A型抗體免疫合格的有83頭份，合格率47.4%；檢測(cè)中羊O型抗體免疫合格的有663頭份，免疫合格率53.55%。

為確保雪古麗牛羊持續(xù)無(wú)疫，免疫抗體不合格動(dòng)物應(yīng)及時(shí)給予補(bǔ)免。同時(shí)，加強(qiáng)免疫持續(xù)監(jiān)測(cè)，引種時(shí)要做好隔離觀察及檢測(cè)。